Estandarización de un método cuantitativo para la detección de Salmonella spp. en hojas de lechuga

Salmonella spp. es un género de bacterias patógenas que causa enfermedades transmitidas por los alimentos en todo el mundo. Este microorganismo generalmente se transmite a los humanos por la vía fecal-oral, los alimentos o el agua contaminada. Salmonella es la causa de fiebre alta prolongada, fatiga...

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Autores:
Bocanegra Díaz, María Alejandra
Tipo de recurso:
Trabajo de grado de pregrado
Fecha de publicación:
2018
Institución:
Universidad de los Andes
Repositorio:
Séneca: repositorio Uniandes
Idioma:
spa
OAI Identifier:
oai:repositorio.uniandes.edu.co:1992/39226
Acceso en línea:
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Palabra clave:
Salmonella
Horticultura
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Lechuga
Ingeniería
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description Salmonella spp. es un género de bacterias patógenas que causa enfermedades transmitidas por los alimentos en todo el mundo. Este microorganismo generalmente se transmite a los humanos por la vía fecal-oral, los alimentos o el agua contaminada. Salmonella es la causa de fiebre alta prolongada, fatiga, dolor de cabeza, náuseas, dolor abdominal y diarrea. Es por esto que los esfuerzos por desarrollar métodos eficientes y confiables para la detección de Salmonella en los alimentos continua. Los protocolos para la detección de la bacteria se clasifican en métodos de cultivo convencionales, ensayos basados en inmunología, ácido nucleico, productos bioquímicos miniaturizados y biosensores. Actualmente, los métodos de detección de la Food Drug Administration, FDA y la Organización Internacional de Normalización, ISO 6579: 2002 se basan en una etapa de pre-enriquecimiento de la muestra en un medio nutritivo no selectivo, lo que hace posible la reparación de las células estresada y dañadas y luego una etapa de enriquecimiento selectivo que incrementa las poblaciones iniciales de Salmonella. Debido a esto, no es posible conocer la concentración inicial del microorganismo en una muestra de alimento. El propósito de este estudio fue estandarizar un método para cuantificar Salmonella spp a partir de hojas de lechuga. Inicialmente, se verifico la identidad de la cepa de Salmonella spp. utilizando la técnica de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para corroborar la presencia del gen invA, que es específico de las cepas patógenas de Salmonella. Se inocularon concentraciones conocidas de Salmonella spp. en hojas de lechuga previamente tratadas con luz UV, y luego se recuperaron las células en una solución amortiguadora de fosfato sin enriquecimiento. Después, se cuantifico la cantidad de Salmonella en la solución colocando muestras en diferentes medios de crecimiento y contando las colonias. Los medios utilizados fueron: Salmonella-Shigella, Bismuto, Sulfito y Hektoen.
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Es por esto que los esfuerzos por desarrollar métodos eficientes y confiables para la detección de Salmonella en los alimentos continua. Los protocolos para la detección de la bacteria se clasifican en métodos de cultivo convencionales, ensayos basados en inmunología, ácido nucleico, productos bioquímicos miniaturizados y biosensores. Actualmente, los métodos de detección de la Food Drug Administration, FDA y la Organización Internacional de Normalización, ISO 6579: 2002 se basan en una etapa de pre-enriquecimiento de la muestra en un medio nutritivo no selectivo, lo que hace posible la reparación de las células estresada y dañadas y luego una etapa de enriquecimiento selectivo que incrementa las poblaciones iniciales de Salmonella. Debido a esto, no es posible conocer la concentración inicial del microorganismo en una muestra de alimento. El propósito de este estudio fue estandarizar un método para cuantificar Salmonella spp a partir de hojas de lechuga. Inicialmente, se verifico la identidad de la cepa de Salmonella spp. utilizando la técnica de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para corroborar la presencia del gen invA, que es específico de las cepas patógenas de Salmonella. Se inocularon concentraciones conocidas de Salmonella spp. en hojas de lechuga previamente tratadas con luz UV, y luego se recuperaron las células en una solución amortiguadora de fosfato sin enriquecimiento. Después, se cuantifico la cantidad de Salmonella en la solución colocando muestras en diferentes medios de crecimiento y contando las colonias. Los medios utilizados fueron: Salmonella-Shigella, Bismuto, Sulfito y Hektoen.Salmonella spp. is a genus of pathogenic bacteria that causes food-borne diseases throughout the world. This microorganism is usually transmitted to humans via the fecal-oral route, food or contaminated water and is the cause of prolonged high fever, fatigue, headache, nausea, abdominal pain, and diarrhea. This is why the effort to develop efficient and reliable methods for the detection of Salmonella in food continues. The protocols for the detection of the bacteria are classified into conventional culture methods, immunology-based assays, nucleic acid, miniaturized biochemicals, and biosensors. Currently, the detection methods of the Food Drug Administration, FDA and the International Organization for Standardization, ISO 6579: 2002 are based on a stage of pre-enrichment of the sample in a non-selective nutrient medium, which makes it possible to repair stressed and damaged cells. a stage of selective enrichment that increases the initial populations of Salmonella. Due to this, it is not possible to know the initial concentration of the microorganism in a food sample. The purpose of this study was to standardize a method to quantify Salmonella spp from lettuce leaves. Initially, we verified the identity of the Salmonella spp. Strain using the Polymerase Chain Reaction (PCR) technique to corroborate the presence of the invA gene, which is specific to pathogenic strains of Salmonella. We inoculated known concentrations of Salmonella spp. on lettuce leaves previously treated by UV, and then recovered bacteria in phosphate buffer without pre-enrichment. We later quantified be the amount of Salmonella in the buffer by plating samples on different growth media and counting colonies. The growth media used were: Salmonella-Shigella, Bismuth Sulphite, and Hektoen Enteric Agar.Ingeniero AmbientalPregrado12 hojasapplication/pdfspaUniversidad de los AndesIngeniería AmbientalFacultad de IngenieríaDepartamento de Ingeniería Civil y Ambientalinstname:Universidad de los Andesreponame:Repositorio Institucional SénecaEstandarización de un método cuantitativo para la detección de Salmonella spp. en hojas de lechugaTrabajo de grado - Pregradoinfo:eu-repo/semantics/bachelorThesishttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1fhttp://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85Texthttp://purl.org/redcol/resource_type/TPSalmonellaHorticulturaReacción en cadena de la polimerasaLechugaIngenieríaPublicationhttps://scholar.google.es/citations?user=HitOO8AAAAJvirtual::8564-10000-0002-1390-1583virtual::8564-1https://scienti.minciencias.gov.co/cvlac/visualizador/generarCurriculoCv.do?cod_rh=0000277860virtual::8564-16c9de8f6-67e3-4472-9a44-7379cf7e0fafvirtual::8564-16c9de8f6-67e3-4472-9a44-7379cf7e0fafvirtual::8564-1TEXTu821117.pdf.txtu821117.pdf.txtExtracted texttext/plain41081https://repositorio.uniandes.edu.co/bitstreams/49898cff-e39b-454e-8689-70fa0b3acdb2/download4b90b1da0e6849248dd0d581ef012d14MD54ORIGINALu821117.pdfapplication/pdf972790https://repositorio.uniandes.edu.co/bitstreams/39a80bd5-a9f6-48e8-b147-7199a9053284/downloadff95bc302717010ea2e663d24780a62bMD51THUMBNAILu821117.pdf.jpgu821117.pdf.jpgIM Thumbnailimage/jpeg22934https://repositorio.uniandes.edu.co/bitstreams/2ddd1b36-a653-4f78-9274-952b26e52fcb/download0572298ff5ed53549e98bba8cd39a6c8MD551992/39226oai:repositorio.uniandes.edu.co:1992/392262024-03-13 13:42:37.508https://repositorio.uniandes.edu.co/static/pdf/aceptacion_uso_es.pdfopen.accesshttps://repositorio.uniandes.edu.coRepositorio institucional Sénecaadminrepositorio@uniandes.edu.co