Procesos de biocatáalisis enzimática en almidones nativos y pre-gelatinizados de yuca: Efectos a nivel morfológico, molecular y de digestibilidad in vitro
Actualmente, en la industria procesadora de almidón urge la necesidad de implementar procesos y tecnologías limpias fácilmente escalables a nivel industrial, para el desarrollo de almidones modificados con diversas propiedades tecno-funcionales. Investigaciones recientes del Grupo de Investigación P...
- Autores:
-
Figueroa Florez, Jorge
- Tipo de recurso:
- Doctoral thesis
- Fecha de publicación:
- 2020
- Institución:
- Universidad Nacional de Colombia
- Repositorio:
- Universidad Nacional de Colombia
- Idioma:
- spa
- OAI Identifier:
- oai:repositorio.unal.edu.co:unal/79620
- Palabra clave:
- 620 - Ingeniería y operaciones afines
540 - Química y ciencias afines::547 - Química orgánica
Almidón de yuca
Tratamiento hidrotérmico
Polipéptidos enzimáticos
Digestibilidad in vitro
Almidón resistente
Almidón de yuca
Porosidad
Annealing
Cassava starch
Hydrothermal treatment
Enzymatic polypeptides
Enzymatic biocatalysis
Porosity
In vitro digestibility
Resistant starch
- Rights
- openAccess
- License
- Atribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 Internacional
id |
UNACIONAL2_ba2abdd68d56c913c93d5323a4e11737 |
---|---|
oai_identifier_str |
oai:repositorio.unal.edu.co:unal/79620 |
network_acronym_str |
UNACIONAL2 |
network_name_str |
Universidad Nacional de Colombia |
repository_id_str |
|
dc.title.spa.fl_str_mv |
Procesos de biocatáalisis enzimática en almidones nativos y pre-gelatinizados de yuca: Efectos a nivel morfológico, molecular y de digestibilidad in vitro |
dc.title.translated.eng.fl_str_mv |
Enzymatic biocatalysis processes in cassava native and pre-gelatinized starches: Effects at the morphological, molecular and in vitro digestibility levels |
title |
Procesos de biocatáalisis enzimática en almidones nativos y pre-gelatinizados de yuca: Efectos a nivel morfológico, molecular y de digestibilidad in vitro |
spellingShingle |
Procesos de biocatáalisis enzimática en almidones nativos y pre-gelatinizados de yuca: Efectos a nivel morfológico, molecular y de digestibilidad in vitro 620 - Ingeniería y operaciones afines 540 - Química y ciencias afines::547 - Química orgánica Almidón de yuca Tratamiento hidrotérmico Polipéptidos enzimáticos Digestibilidad in vitro Almidón resistente Almidón de yuca Porosidad Annealing Cassava starch Hydrothermal treatment Enzymatic polypeptides Enzymatic biocatalysis Porosity In vitro digestibility Resistant starch |
title_short |
Procesos de biocatáalisis enzimática en almidones nativos y pre-gelatinizados de yuca: Efectos a nivel morfológico, molecular y de digestibilidad in vitro |
title_full |
Procesos de biocatáalisis enzimática en almidones nativos y pre-gelatinizados de yuca: Efectos a nivel morfológico, molecular y de digestibilidad in vitro |
title_fullStr |
Procesos de biocatáalisis enzimática en almidones nativos y pre-gelatinizados de yuca: Efectos a nivel morfológico, molecular y de digestibilidad in vitro |
title_full_unstemmed |
Procesos de biocatáalisis enzimática en almidones nativos y pre-gelatinizados de yuca: Efectos a nivel morfológico, molecular y de digestibilidad in vitro |
title_sort |
Procesos de biocatáalisis enzimática en almidones nativos y pre-gelatinizados de yuca: Efectos a nivel morfológico, molecular y de digestibilidad in vitro |
dc.creator.fl_str_mv |
Figueroa Florez, Jorge |
dc.contributor.advisor.none.fl_str_mv |
Rodriguez-Sandoval, Eduardo |
dc.contributor.author.none.fl_str_mv |
Figueroa Florez, Jorge |
dc.contributor.researchgroup.spa.fl_str_mv |
Ingeniería Agrícola |
dc.subject.ddc.spa.fl_str_mv |
620 - Ingeniería y operaciones afines 540 - Química y ciencias afines::547 - Química orgánica |
topic |
620 - Ingeniería y operaciones afines 540 - Química y ciencias afines::547 - Química orgánica Almidón de yuca Tratamiento hidrotérmico Polipéptidos enzimáticos Digestibilidad in vitro Almidón resistente Almidón de yuca Porosidad Annealing Cassava starch Hydrothermal treatment Enzymatic polypeptides Enzymatic biocatalysis Porosity In vitro digestibility Resistant starch |
dc.subject.lemb.none.fl_str_mv |
Almidón de yuca |
dc.subject.proposal.spa.fl_str_mv |
Tratamiento hidrotérmico Polipéptidos enzimáticos Digestibilidad in vitro Almidón resistente Almidón de yuca Porosidad |
dc.subject.proposal.eng.fl_str_mv |
Annealing Cassava starch Hydrothermal treatment Enzymatic polypeptides Enzymatic biocatalysis Porosity In vitro digestibility Resistant starch |
description |
Actualmente, en la industria procesadora de almidón urge la necesidad de implementar procesos y tecnologías limpias fácilmente escalables a nivel industrial, para el desarrollo de almidones modificados con diversas propiedades tecno-funcionales. Investigaciones recientes del Grupo de Investigación PADES han vislumbrado el potencial y la viabilidad económica tanto de procesos enzimáticos como de tratamientos físicos, en la modificación de gránulos nativos de tubérculos, libres de agentes químicos. A partir de ello, se planteó en el presente trabajo de investigación el objetivo de evaluar procesos de biocatálisis enzimática sobre almidones nativos y pre-tratados hidrotérmicamente en la producción de gránulos modificados de yuca con funcionalidades microporosas, hidrofílicas y de baja digestibilidad. Procesos de biocatálisis enzimática usando α-amilasa, β-amilasa, pululanasa y amiloglucosidasa en almidones nativos de yuca mostraron una acción preferencial en las lamelas amorfas durante la fase inicial a una mayor tasa de conversión, seguida de una menor velocidad hidrolítica sobre las lamelas cristalinas, afectando signiticativamente el grado de cristalinidad. Además, los resultados evidenciaron que la acción exógena de α-amilasa y amiloglucosidasa promovieron fenómenos de exo-corrosión y la aparición de laceraciones en la superficie granular del almidón, mientras que el uso de β-amilasa y pululanasa provocaron la obtención de gránulos fragmentados levemente erosionados. La acción enzimática simultánea de α-amilasa con amiloglucosidasa en gránulos de almidón de yuca pre-tratados físicamente, permitió estimar que las condiciones óptimas del proceso hidrotérmico para maximizar las propiedades de solubilidad y de digestión lenta, fueron: relación almidón/agua a 0.145 g/mL, temperatura de calentamiento a 60 °C y enfriamiento a −15°C durante 24 h. Además, que la temperatura de almacenamiento a 4 °C es fundamental en la reorganización molecular después del pre-tratamiento hidrotérmico, afectando el orden semicristalino y maximizando las fracciones de baja digestibilidad. Mientras tanto, el tratamiento de annealing un proceso hidrotérmico realizado por debajo de la temperatura de gelatinización, favoreció la susceptibilidad del gránulo al ataque enzimático. De este modo, el proceso hidrotérmico a 60 °C seguida de la acción enzimática simultánea con amilasas, acrecentó los fenómenos de endo-corrosión en la estructura granular, aumentando el área superficial específica, el tamaño y volumen de los poros. Por otro lado, la desramificación con pululanasa sobre gránulos pre-tratados a 65 °C, produjeron agregados poliméricos de cadenas cortas en forma reticulada con polimorfos semicristalino tipo-V, que favorecieron las propiedades hidrofílicas como la capacidad de retención de agua e índice de solubilidad en agua. El análisis de mecanismos de digestibilidad in vitro a través de estudios moleculares, estructurales y morfológicos permitió establecer la redistribución de las longitudes de cadenas durante el annealing, afectando el tamaño granular y la fracción de almidón de digestión rápida (ADR). Además, que la despolimerización de los almidones pre-tratados después del ataque enzimático, conllevó a un aumento en el contenido de cadenas cortas (GP< 12) que, asociado a una reducción en los valores de masa molar y radio de giro, aumentaron las propiedades de digestión lenta. Estos resultados permitieron diseñar un proceso novedoso en la modificación del almidón nativo, implementando un ataque enzimático ternario-secuencial (pululanasa ! β-amilasa ! amiloglucosidasa) sobre gránulos pre-tratados hidrotérmicamente. Los resultados analizados a través de correlación de Pearson mostraron que el contenido de amilosa y la distribución de la longitud de la cadena, fueron determinantes en el aumento significativo de las fracciones de almidón de digestión lenta (ADL) y almidón resistente (AR). En síntesis, las diversas aplicaciones de polipéptidos enzimáticos sobre almidones nativos y pre-tratados, permitieron identificar que las características fisicoquímicas y funcionalidades de los gránulos modificados de yuca dependieron del grado de hidrólisis, y de la acción térmica inducida en las suspensiones de almidón cerca de las condiciones de gelatinización. Asimismo, los resultados revelan la factibilidad tecnológica para producir gránulos modificados de yuca con propiedades microporosas, hidrofílicas y de digestión lenta. En este contexto, los resultados de investigación basados en las nuevas funcionalidades de los gránulos modificados, permiten visionar una alta aplicabilidad en el sector agroalimentario, y abre oportunidad a futuras investigaciones para el desarrollo de productos competitivos con respecto a los almidones producidos por vía química existentes en el mercado. |
publishDate |
2020 |
dc.date.issued.none.fl_str_mv |
2020-12 |
dc.date.accessioned.none.fl_str_mv |
2021-06-09T20:29:56Z |
dc.date.available.none.fl_str_mv |
2021-06-09T20:29:56Z |
dc.type.spa.fl_str_mv |
Trabajo de grado - Doctorado |
dc.type.driver.spa.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
dc.type.version.spa.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/acceptedVersion |
dc.type.coar.spa.fl_str_mv |
http://purl.org/coar/resource_type/c_db06 |
dc.type.content.spa.fl_str_mv |
Text |
dc.type.redcol.spa.fl_str_mv |
http://purl.org/redcol/resource_type/TD |
format |
http://purl.org/coar/resource_type/c_db06 |
status_str |
acceptedVersion |
dc.identifier.uri.none.fl_str_mv |
https://repositorio.unal.edu.co/handle/unal/79620 |
dc.identifier.instname.spa.fl_str_mv |
Universidad Nacional de Colombia |
dc.identifier.reponame.spa.fl_str_mv |
Repositorio Institucional Universidad Nacional de Colombia |
dc.identifier.repourl.spa.fl_str_mv |
https://repositorio.unal.edu.co/ |
url |
https://repositorio.unal.edu.co/handle/unal/79620 https://repositorio.unal.edu.co/ |
identifier_str_mv |
Universidad Nacional de Colombia Repositorio Institucional Universidad Nacional de Colombia |
dc.language.iso.spa.fl_str_mv |
spa |
language |
spa |
dc.relation.indexed.spa.fl_str_mv |
N/A |
dc.relation.references.spa.fl_str_mv |
Bertoft E. (2013). On the building block and backbone concepts of amylopectin structure. Cereal Chemistry, 90, 294–311. Cai L, Shi YC, Rong L, Hsiao BS. (2010). Debranching and crystallization of waxy maize starch in relation to enzyme digestibility. Carbohydrate Polymers, 81(2), 385-393. Das R, Kayastha AM. (2019). Enzymatic hydrolysis of native granular starches by a new β-amylase from peanut (Arachis hypogaea). Food Chemistry, 276, 583-590. Dhital S, Shrestha AK, Gidley MJ. (2010). Relationship between granule size and in vitro digestibility of maize and potato starches. Carbohydrate Polymers, 82, 480-488. Dura A, Błaszczak W, Rosell CM. (2014). Functionality of porous starch obtained by amylase or amyloglucosidase treatments. Carbohydrate Polymers, 101(1), 837-845. Englyst HN, Kigman S, Cummings J. (1992). Classification and measurement of nutritionally important starch fractions. European Journal of Clinical Nutrition, 46, S33-S50. Figueroa-Flórez JA, Cadena-Chamorro EM, Rodríguez-Sandoval E, Salcedo-Mendoza JG, CiroVelasquez HJ. (2019). Cassava starches modified by enzymatic biocatalysis: effect of reaction time and drying method. Dyna, 86 (208), 162-170. Gomes AM, Mendes CE, Ricardo NM. (2005). Effects of annealing on the physicochemical properties of fermented cassava starch (polvilho azedo). Carbohydrate Polymers, 60, 1-6. Guo L, Li J, Li H, Zhu Y, Cui B. (2020). The structure property and adsorption capacity of new enzyme-treated potato and sweet potato starches. International Journal of Biological Macromolecules, 144, 863-873. Guo L. (2018). Sweet potato starch modified by branching enzyme, β-amylase and transglucosidase. Food Hydrocolloids, 83, 182-189. Hanashiro I, Abe J, Hizukuri. (1996). A periodic distribution of the chain length of amylopectin as revealed by high-performance anion-exchange chromatography. Carbohydrate Research, 283, 151-159. Iftikhar SA, Dutta H. (2019). Status of polymorphism, physicochemical properties and in vitro digestibility of dual retrogradation-annealing modified rice starches. International Journal of Biological Macromolecules, 132, 330-339. Jayakody L, Hoover R, Liu Q, Donner E. (2009). Studies on tuber starches III. Impact of annealing on the molecular structure, composition and physicochemical properties of yam (Dioscorea sp.) starches grown in Sri Lanka. Carbohydrate Polymers, 76, 145-153. Kim BS, Kim HS, Yoo SH. (2015). Characterization of enzymatically modified rice and barley starches with amylosucrase at scale-up production. Carbohydrate Polymers, 125, 61-68. Kim HR, Choi JS, Choi HD, Park CS, Moon TW. (2020). Amylosucrase-modified waxy potato starches recrystallized with amylose: The role of amylopectin chain length in formation of low-digestible fractions. Food Chemistry, 318, 126490. Lee DJ, Park EY, Lim ST. (2019). Effects of partial debranching and storage temperature on recrystallization of waxy maize starch. International Journal of Biological Macromolecules, 140, 350-357. Lertwanawatana P, Frazier R, Niranjan K. (2015). High pressure intensification of cassava resistant starch (RS3) yields. Food Chemistry, 181, 85-93. Li P, He X, Dhital S, Zhang B, Huang Q. (2017). Structural and physicochemical properties of granular starches after treatment with debranching enzyme. Carbohydrate Polymers, 169, 351-356. Li H, Gui Y, Li J, Zhu Y, Cui B, Guo L. (2020). Modification of rice starch using a combination of autoclaving and triple enzyme treatment: Structural, physicochemical and digestibility properties. International Journal of Biological Macromolecules, 144, 500-508. Li MN, Zhang B, Xie Y, Chen HQ. (2019a). Effects of debranching and repeated heat-moisture treatments on structure, physicochemical properties and in vitro digestibility of wheat starch. Food Chemistry, 294, 440-447. Li H, Li J, Xiao Y, Cui B, Fang Y, Guo L. (2019b). in vitro digestibility of rice starch granules modified by β-amylase, transglucosidase and pullulanase. International Journal of Biological Macromolecules, 136, 1228-1236. Lin L, Guo D, Huang J, Zhang X, Zhang L, Wei C. (2016). Molecular structure and enzymatic hydrolysis properties of starches from high-amylose maize inbred lines and their hybrids. Food Hydrocolloids, 58, 246–254. Liu G, Gu Z, Hong Y, Wei H, Zhang C, Huang S, Chen Y, Lu Y, Li Y. (2020a). Effects of molecular interactions in debranched high amylose starch on digestibility and hydrogel properties. Food Hydrocolloids, 105498. Liu P, Fang Y, Zhang X, Zou F, Gao W, Zhao H, Yuan C, Cui B. (2020b). Effects of multienzyme treatment on the physicochemical properties of maize starch-lauric acid complex. Food Hydrocolloids, 107, 105941. Liu W, Hong Y, Gu Z, Cheng L, Li Z, Li C. (2017). In structure and in vitro digestibility of waxy corn starch debranched by pullulanase. Food Hydrocolloids, 67, 104-110. Lockyer S, Nugent AP. (2017). Health effects of resistant starch. Nutrition Bulletin, 42(1), 10-41. Lopez-Rubio A, Flanagan BM, Shrestha AK, Gidley MJ, Gilbert EP. (2008). Molecular rearrangement of starch during in vitrodigestion: toward a better understanding of enzyme resistant starch formation in processed starches. Biomacromolecules, 9, 1951-1958. Ma Z, Yin X, Chang D, Hu X, Boye J. (2018). Long- and short-range structural characteristics of pea starch modified by autoclaving, α-amylolysis, and pullulanase debranching. International Journal of Biological Macromolecules, 120, 650-656. Magallanes-Cruz PA, Flores-Silva PC, Bello-Pérez LA. (2017). Starch structure influences its digestibility: A Review. Journal of Food Science, 82(9), 2016-2023. Miao M, Jiang B, Zhang T. (2009). Effect of pullulanase debranching and recrystallization on structure and digestibility of waxy maize starch. Carbohydrate Polymers, 76, 214-221. Miao M, Xiong S, Jiang B, Jiang H, Cui S, Zhang T. (2014). Dual-enzymatic modification of maize starch for increasing slow digestion property. Food Hydrocolloids, 38, 180-185. Ratnaningsih N, Suparmo, Harmayani E, Marsono Y. (2020). Physicochemical properties, in vitro starch digestibility, and estimated glycemic index of resistant starch from cowpea (Vigna unguiculata) starch by autoclaving-cooling cycles. International Journal of Biological Macromolecules, 142, 191-200. Ren J, Li C, Gu Z, Cheng L, Hong Y, Li Z. (2018). Digestion rate of tapioca starch was lowed through molecular rearrangement catalyzed by 1,4-α-glucan branching enzyme. Food Hydrocolloids, 84, 117-124. Shah A, Masoodi FA, Gani A, Ashwar B. (2018). Dual enzyme modified oat starch: Structural characterisation, rheological properties, and digestibility in simulated GI tract. International Journal of Biological Macromolecules, 106, 140-147. Tester RF, Morrison WR. (1990). Swelling and gelatinization of cereal starches. I. Effects of amylopectin, amylose and lipids. Cereal Chemistry, 67, 551-557. Wang S, Wang J, Wang S, Wang S. (2017). Annealing improves paste viscosity and stability of starch. Food Hydrocolloids, 62, 203-211. Xie Y, Li MN, Chen HQ, Zhang B. (2018). Effects of the combination of repeated heat-moisture treatment and compound enzymes hydrolysis on the structural and physicochemical properties of porous wheat starch. Food Chemistry, 274, 351-359. Xu M, Saleh A, Liu Y, Jing L, Zhao K, Wu H, Zhang G, Li W. (2018). The changes in structural, physicochemical, and digestive properties of red adzuki bean starch after repeated and continuous annealing treatments. Starch, 1700322. Xu J, Chen L, Guo X, Liang Y, Xie F. (2020). Understanding the multi-scale structure and digestibility of different waxy maize starches. International Journal of Biological Macromolecules, 144, 252–258. Ye J, Liu C, Luo S, Hu X, McClements D. (2018). Modification of the digestibility of extruded rice starch by enzyme treatment (β-amylolysis): An in vitro study. Food Research International, 111, 590-596. Zhang H, Zhou X, Wang T, He J, Yue M, Luo X, Wang R, Chen Z. (2017). Enzymatically modified waxy corn starch with amylosucrase: The effect of branch chain elongation on structural and physicochemical properties. Food Hydrocolloids, 63, 518–524. Zhang H, Wang R, Chen Z, Zhong Q. (2019). Enzymatically modified starch with low digestibility produced from amylopectin by sequential amylosucrase and pullulanase treatments. Food Hydrocolloids, 95, 195-202. Zhu F. 2015). Composition, structure, physicochemical properties, and modifications of cassava starch. Carbohydrate Polymers, 122, 456-480. |
dc.rights.coar.fl_str_mv |
http://purl.org/coar/access_right/c_abf2 |
dc.rights.license.spa.fl_str_mv |
Atribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 Internacional |
dc.rights.uri.spa.fl_str_mv |
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/ |
dc.rights.accessrights.spa.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/openAccess |
rights_invalid_str_mv |
Atribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 Internacional http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/ http://purl.org/coar/access_right/c_abf2 |
eu_rights_str_mv |
openAccess |
dc.format.extent.spa.fl_str_mv |
174 páginas |
dc.format.mimetype.spa.fl_str_mv |
application/pdf |
dc.publisher.spa.fl_str_mv |
Universidad Nacional de Colombia - Sede Medellín |
dc.publisher.program.spa.fl_str_mv |
Medellín - Ciencias - Doctorado en Biotecnología |
dc.publisher.department.spa.fl_str_mv |
Escuela de biociencias |
dc.publisher.faculty.spa.fl_str_mv |
Facultad de Ciencias |
dc.publisher.place.spa.fl_str_mv |
Medellín |
dc.publisher.branch.spa.fl_str_mv |
Universidad Nacional de Colombia - Sede Medellín |
institution |
Universidad Nacional de Colombia |
bitstream.url.fl_str_mv |
https://repositorio.unal.edu.co/bitstream/unal/79620/1/license.txt https://repositorio.unal.edu.co/bitstream/unal/79620/2/1103096687.2021.pdf https://repositorio.unal.edu.co/bitstream/unal/79620/3/1103096687.2021.pdf.jpg |
bitstream.checksum.fl_str_mv |
cccfe52f796b7c63423298c2d3365fc6 94c2e6a3386e0ac88334c195e4a9586c 3b0fe4ac995670d69057d15d430ff293 |
bitstream.checksumAlgorithm.fl_str_mv |
MD5 MD5 MD5 |
repository.name.fl_str_mv |
Repositorio Institucional Universidad Nacional de Colombia |
repository.mail.fl_str_mv |
repositorio_nal@unal.edu.co |
_version_ |
1814089800740765696 |
spelling |
Atribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 Internacionalhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/info:eu-repo/semantics/openAccesshttp://purl.org/coar/access_right/c_abf2Rodriguez-Sandoval, Eduardoaf0fff614e6f528ce9565075334377ed600Figueroa Florez, Jorgea32c36e9970b0521b996ba531b7cf596Ingeniería Agrícola2021-06-09T20:29:56Z2021-06-09T20:29:56Z2020-12https://repositorio.unal.edu.co/handle/unal/79620Universidad Nacional de ColombiaRepositorio Institucional Universidad Nacional de Colombiahttps://repositorio.unal.edu.co/Actualmente, en la industria procesadora de almidón urge la necesidad de implementar procesos y tecnologías limpias fácilmente escalables a nivel industrial, para el desarrollo de almidones modificados con diversas propiedades tecno-funcionales. Investigaciones recientes del Grupo de Investigación PADES han vislumbrado el potencial y la viabilidad económica tanto de procesos enzimáticos como de tratamientos físicos, en la modificación de gránulos nativos de tubérculos, libres de agentes químicos. A partir de ello, se planteó en el presente trabajo de investigación el objetivo de evaluar procesos de biocatálisis enzimática sobre almidones nativos y pre-tratados hidrotérmicamente en la producción de gránulos modificados de yuca con funcionalidades microporosas, hidrofílicas y de baja digestibilidad. Procesos de biocatálisis enzimática usando α-amilasa, β-amilasa, pululanasa y amiloglucosidasa en almidones nativos de yuca mostraron una acción preferencial en las lamelas amorfas durante la fase inicial a una mayor tasa de conversión, seguida de una menor velocidad hidrolítica sobre las lamelas cristalinas, afectando signiticativamente el grado de cristalinidad. Además, los resultados evidenciaron que la acción exógena de α-amilasa y amiloglucosidasa promovieron fenómenos de exo-corrosión y la aparición de laceraciones en la superficie granular del almidón, mientras que el uso de β-amilasa y pululanasa provocaron la obtención de gránulos fragmentados levemente erosionados. La acción enzimática simultánea de α-amilasa con amiloglucosidasa en gránulos de almidón de yuca pre-tratados físicamente, permitió estimar que las condiciones óptimas del proceso hidrotérmico para maximizar las propiedades de solubilidad y de digestión lenta, fueron: relación almidón/agua a 0.145 g/mL, temperatura de calentamiento a 60 °C y enfriamiento a −15°C durante 24 h. Además, que la temperatura de almacenamiento a 4 °C es fundamental en la reorganización molecular después del pre-tratamiento hidrotérmico, afectando el orden semicristalino y maximizando las fracciones de baja digestibilidad. Mientras tanto, el tratamiento de annealing un proceso hidrotérmico realizado por debajo de la temperatura de gelatinización, favoreció la susceptibilidad del gránulo al ataque enzimático. De este modo, el proceso hidrotérmico a 60 °C seguida de la acción enzimática simultánea con amilasas, acrecentó los fenómenos de endo-corrosión en la estructura granular, aumentando el área superficial específica, el tamaño y volumen de los poros. Por otro lado, la desramificación con pululanasa sobre gránulos pre-tratados a 65 °C, produjeron agregados poliméricos de cadenas cortas en forma reticulada con polimorfos semicristalino tipo-V, que favorecieron las propiedades hidrofílicas como la capacidad de retención de agua e índice de solubilidad en agua. El análisis de mecanismos de digestibilidad in vitro a través de estudios moleculares, estructurales y morfológicos permitió establecer la redistribución de las longitudes de cadenas durante el annealing, afectando el tamaño granular y la fracción de almidón de digestión rápida (ADR). Además, que la despolimerización de los almidones pre-tratados después del ataque enzimático, conllevó a un aumento en el contenido de cadenas cortas (GP< 12) que, asociado a una reducción en los valores de masa molar y radio de giro, aumentaron las propiedades de digestión lenta. Estos resultados permitieron diseñar un proceso novedoso en la modificación del almidón nativo, implementando un ataque enzimático ternario-secuencial (pululanasa ! β-amilasa ! amiloglucosidasa) sobre gránulos pre-tratados hidrotérmicamente. Los resultados analizados a través de correlación de Pearson mostraron que el contenido de amilosa y la distribución de la longitud de la cadena, fueron determinantes en el aumento significativo de las fracciones de almidón de digestión lenta (ADL) y almidón resistente (AR). En síntesis, las diversas aplicaciones de polipéptidos enzimáticos sobre almidones nativos y pre-tratados, permitieron identificar que las características fisicoquímicas y funcionalidades de los gránulos modificados de yuca dependieron del grado de hidrólisis, y de la acción térmica inducida en las suspensiones de almidón cerca de las condiciones de gelatinización. Asimismo, los resultados revelan la factibilidad tecnológica para producir gránulos modificados de yuca con propiedades microporosas, hidrofílicas y de digestión lenta. En este contexto, los resultados de investigación basados en las nuevas funcionalidades de los gránulos modificados, permiten visionar una alta aplicabilidad en el sector agroalimentario, y abre oportunidad a futuras investigaciones para el desarrollo de productos competitivos con respecto a los almidones producidos por vía química existentes en el mercado.Currently, in the starch processing industry there is an urgent need to implement clean processes and technologies that are easily scalable at an industrial level, for the development of modified starches with various techno-functional properties. Recent research from the PADES Research Group has glimpsed the potential and economic viability of both enzymatic processes and physical treatments in modifying native tuber granules, free of chemical agents. From this, the objective of evaluating enzymatic biocatalysis processes on on native and hydrothermally pretreated starches in the production of modified cassava granules with microporous, hydrophilic and low digestibility functionalities was proposed in this research work. Enzymatic biocatalysis processes using α-amylase, β-amylase, pullulanase and amyloglucosidase in native cassava starch showed a preferential action on amorphous lamellae during the initial phase at a higher conversion rate, followed by a lower hydrolytic rate on crystalline lamellae, affecting significantly the degree of crystallinity. Furthermore, the results showed that the exogenous action of α-amylase and amyloglucosidase promoted phenomena of exocorrosion and the appearance of lacerations on the granular surface of the starch, while the use of β-amylase and pullulanase caused the obtaining of eroded slightly fragmented granules. The simultaneous enzymatic action of α-amylase with amyloglucosidase in physically pre-treatment cassava starch granules, allowed estimating that the optimal conditions of the hydrothermal processes to maximize the properties of solubility and slow digestion, were: starch/water ratio at 0.145 g/mL, heating temperature at 60 °C and cooling at −15 °C for 24 h. Furthermore, that the storage temperature at 4 °C is fundamental in the molecular reorganization after hydrothermal pre-treatment, affecting the semicrystalline order and maximizing low digestibility fractions. Meanwhile, annealing treatment a hydrothermal process performed below the gelatinization temperature, favored the granule’s susceptibility to enzyme attack. In this way, pre-treatment at 60 °C followed by the simultaneous enzymatic action with amylases, increased the endo-corrosion phenomena in the granular structure, increasing the specific surface area, the size and volume of the pores. Likewise, the pre-treatment at 65 °C continuous to the de-branching with pullulanase produced cross-linked polymer aggregates in short form with V-type semicrystalline polymorphs, which favored the hydrophilic properties such as the water retention capacity and solubility index in water. XVII XVIII The analysis of in vitro digestibility mechanisms through molecular, structural and morphological studies allowed to establish the redistribution of chain lengths during annealing, affecting the granular size and the fast digesting starch fraction (ADR). Furthermore, that the depolymerization of the pre-treated starches after the enzymatic attack, led to an increase in the content of short chains (GP< 12) which, associated with a reduction in the values of molar mass and gyration radius, increased the slow digestion properties. These results allowed designing a novel process in the modification of the native starch, implementing a ternary-sequential enzymatic attack (pullulanase → β-amylase → amyloglucosidase) on hydrothermally pre-treated granules. The results analyzed through Pearson’s correlation showed that the amylose content and the chain length distribution were decisive in the significant increase in the fractions of slow digesting starch (ADL) and resistant starch (AR). In summary, the various applications of enzymatic polypeptides on native and pre-treated starches allowed identifying that the physicochemical characteristics and functionalities of the modified cassava granules depended on the hydrolysis degree, and the thermal action induced in the starch suspensions near the gelatinization conditions. Also, the results reveal the technological feasibility to produce modified cassava granules with microporous, hydrophilic and slow digesting properties. In this context, the research results based on the new functionalities of the modified granules, allow to envision a high applicability in the agri-food sector, and open opportunities for future research for the development of competitive products with respect to the starches produced by chemical means existing in the market.DoctoradoDoctor en BiotecnologíaAgroindustria y poscosecha174 páginasapplication/pdfspaUniversidad Nacional de Colombia - Sede MedellínMedellín - Ciencias - Doctorado en BiotecnologíaEscuela de biocienciasFacultad de CienciasMedellínUniversidad Nacional de Colombia - Sede Medellín620 - Ingeniería y operaciones afines540 - Química y ciencias afines::547 - Química orgánicaAlmidón de yucaTratamiento hidrotérmicoPolipéptidos enzimáticosDigestibilidad in vitroAlmidón resistenteAlmidón de yucaPorosidadAnnealingCassava starchHydrothermal treatmentEnzymatic polypeptidesEnzymatic biocatalysisPorosityIn vitro digestibilityResistant starchProcesos de biocatáalisis enzimática en almidones nativos y pre-gelatinizados de yuca: Efectos a nivel morfológico, molecular y de digestibilidad in vitroEnzymatic biocatalysis processes in cassava native and pre-gelatinized starches: Effects at the morphological, molecular and in vitro digestibility levelsTrabajo de grado - Doctoradoinfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisinfo:eu-repo/semantics/acceptedVersionhttp://purl.org/coar/resource_type/c_db06Texthttp://purl.org/redcol/resource_type/TDN/ABertoft E. (2013). On the building block and backbone concepts of amylopectin structure. Cereal Chemistry, 90, 294–311. Cai L, Shi YC, Rong L, Hsiao BS. (2010). Debranching and crystallization of waxy maize starch in relation to enzyme digestibility. Carbohydrate Polymers, 81(2), 385-393. Das R, Kayastha AM. (2019). Enzymatic hydrolysis of native granular starches by a new β-amylase from peanut (Arachis hypogaea). Food Chemistry, 276, 583-590. Dhital S, Shrestha AK, Gidley MJ. (2010). Relationship between granule size and in vitro digestibility of maize and potato starches. Carbohydrate Polymers, 82, 480-488. Dura A, Błaszczak W, Rosell CM. (2014). Functionality of porous starch obtained by amylase or amyloglucosidase treatments. Carbohydrate Polymers, 101(1), 837-845. Englyst HN, Kigman S, Cummings J. (1992). Classification and measurement of nutritionally important starch fractions. European Journal of Clinical Nutrition, 46, S33-S50. Figueroa-Flórez JA, Cadena-Chamorro EM, Rodríguez-Sandoval E, Salcedo-Mendoza JG, CiroVelasquez HJ. (2019). Cassava starches modified by enzymatic biocatalysis: effect of reaction time and drying method. Dyna, 86 (208), 162-170. Gomes AM, Mendes CE, Ricardo NM. (2005). Effects of annealing on the physicochemical properties of fermented cassava starch (polvilho azedo). Carbohydrate Polymers, 60, 1-6. Guo L, Li J, Li H, Zhu Y, Cui B. (2020). The structure property and adsorption capacity of new enzyme-treated potato and sweet potato starches. International Journal of Biological Macromolecules, 144, 863-873. Guo L. (2018). Sweet potato starch modified by branching enzyme, β-amylase and transglucosidase. Food Hydrocolloids, 83, 182-189. Hanashiro I, Abe J, Hizukuri. (1996). A periodic distribution of the chain length of amylopectin as revealed by high-performance anion-exchange chromatography. Carbohydrate Research, 283, 151-159. Iftikhar SA, Dutta H. (2019). Status of polymorphism, physicochemical properties and in vitro digestibility of dual retrogradation-annealing modified rice starches. International Journal of Biological Macromolecules, 132, 330-339. Jayakody L, Hoover R, Liu Q, Donner E. (2009). Studies on tuber starches III. Impact of annealing on the molecular structure, composition and physicochemical properties of yam (Dioscorea sp.) starches grown in Sri Lanka. Carbohydrate Polymers, 76, 145-153. Kim BS, Kim HS, Yoo SH. (2015). Characterization of enzymatically modified rice and barley starches with amylosucrase at scale-up production. Carbohydrate Polymers, 125, 61-68. Kim HR, Choi JS, Choi HD, Park CS, Moon TW. (2020). Amylosucrase-modified waxy potato starches recrystallized with amylose: The role of amylopectin chain length in formation of low-digestible fractions. Food Chemistry, 318, 126490. Lee DJ, Park EY, Lim ST. (2019). Effects of partial debranching and storage temperature on recrystallization of waxy maize starch. International Journal of Biological Macromolecules, 140, 350-357. Lertwanawatana P, Frazier R, Niranjan K. (2015). High pressure intensification of cassava resistant starch (RS3) yields. Food Chemistry, 181, 85-93. Li P, He X, Dhital S, Zhang B, Huang Q. (2017). Structural and physicochemical properties of granular starches after treatment with debranching enzyme. Carbohydrate Polymers, 169, 351-356. Li H, Gui Y, Li J, Zhu Y, Cui B, Guo L. (2020). Modification of rice starch using a combination of autoclaving and triple enzyme treatment: Structural, physicochemical and digestibility properties. International Journal of Biological Macromolecules, 144, 500-508. Li MN, Zhang B, Xie Y, Chen HQ. (2019a). Effects of debranching and repeated heat-moisture treatments on structure, physicochemical properties and in vitro digestibility of wheat starch. Food Chemistry, 294, 440-447. Li H, Li J, Xiao Y, Cui B, Fang Y, Guo L. (2019b). in vitro digestibility of rice starch granules modified by β-amylase, transglucosidase and pullulanase. International Journal of Biological Macromolecules, 136, 1228-1236. Lin L, Guo D, Huang J, Zhang X, Zhang L, Wei C. (2016). Molecular structure and enzymatic hydrolysis properties of starches from high-amylose maize inbred lines and their hybrids. Food Hydrocolloids, 58, 246–254. Liu G, Gu Z, Hong Y, Wei H, Zhang C, Huang S, Chen Y, Lu Y, Li Y. (2020a). Effects of molecular interactions in debranched high amylose starch on digestibility and hydrogel properties. Food Hydrocolloids, 105498. Liu P, Fang Y, Zhang X, Zou F, Gao W, Zhao H, Yuan C, Cui B. (2020b). Effects of multienzyme treatment on the physicochemical properties of maize starch-lauric acid complex. Food Hydrocolloids, 107, 105941. Liu W, Hong Y, Gu Z, Cheng L, Li Z, Li C. (2017). In structure and in vitro digestibility of waxy corn starch debranched by pullulanase. Food Hydrocolloids, 67, 104-110. Lockyer S, Nugent AP. (2017). Health effects of resistant starch. Nutrition Bulletin, 42(1), 10-41. Lopez-Rubio A, Flanagan BM, Shrestha AK, Gidley MJ, Gilbert EP. (2008). Molecular rearrangement of starch during in vitrodigestion: toward a better understanding of enzyme resistant starch formation in processed starches. Biomacromolecules, 9, 1951-1958. Ma Z, Yin X, Chang D, Hu X, Boye J. (2018). Long- and short-range structural characteristics of pea starch modified by autoclaving, α-amylolysis, and pullulanase debranching. International Journal of Biological Macromolecules, 120, 650-656. Magallanes-Cruz PA, Flores-Silva PC, Bello-Pérez LA. (2017). Starch structure influences its digestibility: A Review. Journal of Food Science, 82(9), 2016-2023. Miao M, Jiang B, Zhang T. (2009). Effect of pullulanase debranching and recrystallization on structure and digestibility of waxy maize starch. Carbohydrate Polymers, 76, 214-221. Miao M, Xiong S, Jiang B, Jiang H, Cui S, Zhang T. (2014). Dual-enzymatic modification of maize starch for increasing slow digestion property. Food Hydrocolloids, 38, 180-185. Ratnaningsih N, Suparmo, Harmayani E, Marsono Y. (2020). Physicochemical properties, in vitro starch digestibility, and estimated glycemic index of resistant starch from cowpea (Vigna unguiculata) starch by autoclaving-cooling cycles. International Journal of Biological Macromolecules, 142, 191-200. Ren J, Li C, Gu Z, Cheng L, Hong Y, Li Z. (2018). Digestion rate of tapioca starch was lowed through molecular rearrangement catalyzed by 1,4-α-glucan branching enzyme. Food Hydrocolloids, 84, 117-124. Shah A, Masoodi FA, Gani A, Ashwar B. (2018). Dual enzyme modified oat starch: Structural characterisation, rheological properties, and digestibility in simulated GI tract. International Journal of Biological Macromolecules, 106, 140-147. Tester RF, Morrison WR. (1990). Swelling and gelatinization of cereal starches. I. Effects of amylopectin, amylose and lipids. Cereal Chemistry, 67, 551-557. Wang S, Wang J, Wang S, Wang S. (2017). Annealing improves paste viscosity and stability of starch. Food Hydrocolloids, 62, 203-211. Xie Y, Li MN, Chen HQ, Zhang B. (2018). Effects of the combination of repeated heat-moisture treatment and compound enzymes hydrolysis on the structural and physicochemical properties of porous wheat starch. Food Chemistry, 274, 351-359. Xu M, Saleh A, Liu Y, Jing L, Zhao K, Wu H, Zhang G, Li W. (2018). The changes in structural, physicochemical, and digestive properties of red adzuki bean starch after repeated and continuous annealing treatments. Starch, 1700322. Xu J, Chen L, Guo X, Liang Y, Xie F. (2020). Understanding the multi-scale structure and digestibility of different waxy maize starches. International Journal of Biological Macromolecules, 144, 252–258. Ye J, Liu C, Luo S, Hu X, McClements D. (2018). Modification of the digestibility of extruded rice starch by enzyme treatment (β-amylolysis): An in vitro study. Food Research International, 111, 590-596. Zhang H, Zhou X, Wang T, He J, Yue M, Luo X, Wang R, Chen Z. (2017). Enzymatically modified waxy corn starch with amylosucrase: The effect of branch chain elongation on structural and physicochemical properties. Food Hydrocolloids, 63, 518–524. Zhang H, Wang R, Chen Z, Zhong Q. (2019). Enzymatically modified starch with low digestibility produced from amylopectin by sequential amylosucrase and pullulanase treatments. Food Hydrocolloids, 95, 195-202. Zhu F. 2015). Composition, structure, physicochemical properties, and modifications of cassava starch. Carbohydrate Polymers, 122, 456-480.LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-83964https://repositorio.unal.edu.co/bitstream/unal/79620/1/license.txtcccfe52f796b7c63423298c2d3365fc6MD51ORIGINAL1103096687.2021.pdf1103096687.2021.pdfTesis de Doctorado en Biotecnologiaapplication/pdf14806428https://repositorio.unal.edu.co/bitstream/unal/79620/2/1103096687.2021.pdf94c2e6a3386e0ac88334c195e4a9586cMD52THUMBNAIL1103096687.2021.pdf.jpg1103096687.2021.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg3966https://repositorio.unal.edu.co/bitstream/unal/79620/3/1103096687.2021.pdf.jpg3b0fe4ac995670d69057d15d430ff293MD53unal/79620oai:repositorio.unal.edu.co:unal/796202024-07-20 23:11:08.597Repositorio Institucional Universidad Nacional de Colombiarepositorio_nal@unal.edu.coUExBTlRJTExBIERFUMOTU0lUTwoKQ29tbyBlZGl0b3IgZGUgZXN0ZSDDrXRlbSwgdXN0ZWQgcHVlZGUgbW92ZXJsbyBhIHJldmlzacOzbiBzaW4gYW50ZXMgcmVzb2x2ZXIgbG9zIHByb2JsZW1hcyBpZGVudGlmaWNhZG9zLCBkZSBsbyBjb250cmFyaW8sIGhhZ2EgY2xpYyBlbiBHdWFyZGFyIHBhcmEgZ3VhcmRhciBlbCDDrXRlbSB5IHNvbHVjaW9uYXIgZXN0b3MgcHJvYmxlbWFzIG1hcyB0YXJkZS4KCk5PVEFTOgoqU0kgTEEgVEVTSVMgQSBQVUJMSUNBUiBBRFFVSVJJw5MgQ09NUFJPTUlTT1MgREUgQ09ORklERU5DSUFMSURBRCBFTiBFTCBERVNBUlJPTExPIE8gUEFSVEVTIERFTCBET0NVTUVOVE8uIFNJR0EgTEEgRElSRUNUUklaIERFIExBIFJFU09MVUNJw5NOIDAyMyBERSAyMDE1LCBQT1IgTEEgQ1VBTCBTRSBFU1RBQkxFQ0UgRUwgUFJPQ0VESU1JRU5UTyBQQVJBIExBIFBVQkxJQ0FDScOTTiBERSBURVNJUyBERSBNQUVTVFLDjUEgWSBET0NUT1JBRE8gREUgTE9TIEVTVFVESUFOVEVTIERFIExBIFVOSVZFUlNJREFEIE5BQ0lPTkFMIERFIENPTE9NQklBIEVOIEVMIFJFUE9TSVRPUklPIElOU1RJVFVDSU9OQUwgVU4sIEVYUEVESURBIFBPUiBMQSBTRUNSRVRBUsONQSBHRU5FUkFMLgoqTEEgVEVTSVMgQSBQVUJMSUNBUiBERUJFIFNFUiBMQSBWRVJTScOTTiBGSU5BTCBBUFJPQkFEQS4KUGFyYSB0cmFiYWpvcyBkZXBvc2l0YWRvcyBwb3Igc3UgcHJvcGlvIGF1dG9yOiBBbCBhdXRvYXJjaGl2YXIgZXN0ZSBncnVwbyBkZSBhcmNoaXZvcyBkaWdpdGFsZXMgeSBzdXMgbWV0YWRhdG9zLCBZbyBnYXJhbnRpem8gYWwgUmVwb3NpdG9yaW8gSW5zdGl0dWNpb25hbCBVTiBlbCBkZXJlY2hvIGEgYWxtYWNlbmFybG9zIHkgbWFudGVuZXJsb3MgZGlzcG9uaWJsZXMgZW4gbMOtbmVhIGRlIG1hbmVyYSBncmF0dWl0YS4gRGVjbGFybyBxdWUgZGljaG8gbWF0ZXJpYWwgZXMgZGUgbWkgcHJvcGllZGFkIGludGVsZWN0dWFsIHkgcXVlIGVsIFJlcG9zaXRvcmlvIEluc3RpdHVjaW9uYWwgVU4gbm8gYXN1bWUgbmluZ3VuYSByZXNwb25zYWJpbGlkYWQgc2kgaGF5IGFsZ3VuYSB2aW9sYWNpw7NuIGEgbG9zIGRlcmVjaG9zIGRlIGF1dG9yIGFsIGRpc3RyaWJ1aXIgZXN0b3MgYXJjaGl2b3MgeSBtZXRhZGF0b3MuIChTZSByZWNvbWllbmRhIGEgdG9kb3MgbG9zIGF1dG9yZXMgYSBpbmRpY2FyIHN1cyBkZXJlY2hvcyBkZSBhdXRvciBlbiBsYSBww6FnaW5hIGRlIHTDrXR1bG8gZGUgc3UgZG9jdW1lbnRvLikgRGUgbGEgbWlzbWEgbWFuZXJhLCBhY2VwdG8gbG9zIHTDqXJtaW5vcyBkZSBsYSBzaWd1aWVudGUgbGljZW5jaWE6IExvcyBhdXRvcmVzIG8gdGl0dWxhcmVzIGRlbCBkZXJlY2hvIGRlIGF1dG9yIGRlbCBwcmVzZW50ZSBkb2N1bWVudG8gY29uZmllcmVuIGEgbGEgVW5pdmVyc2lkYWQgTmFjaW9uYWwgZGUgQ29sb21iaWEgdW5hIGxpY2VuY2lhIG5vIGV4Y2x1c2l2YSwgbGltaXRhZGEgeSBncmF0dWl0YSBzb2JyZSBsYSBvYnJhIHF1ZSBzZSBpbnRlZ3JhIGVuIGVsIFJlcG9zaXRvcmlvIEluc3RpdHVjaW9uYWwsIHF1ZSBzZSBhanVzdGEgYSBsYXMgc2lndWllbnRlcyBjYXJhY3RlcsOtc3RpY2FzOiBhKSBFc3RhcsOhIHZpZ2VudGUgYSBwYXJ0aXIgZGUgbGEgZmVjaGEgZW4gcXVlIHNlIGluY2x1eWUgZW4gZWwgcmVwb3NpdG9yaW8sIHF1ZSBzZXLDoW4gcHJvcnJvZ2FibGVzIGluZGVmaW5pZGFtZW50ZSBwb3IgZWwgdGllbXBvIHF1ZSBkdXJlIGVsIGRlcmVjaG8gcGF0cmltb25pYWwgZGVsIGF1dG9yLiBFbCBhdXRvciBwb2Ryw6EgZGFyIHBvciB0ZXJtaW5hZGEgbGEgbGljZW5jaWEgc29saWNpdMOhbmRvbG8gYSBsYSBVbml2ZXJzaWRhZC4gYikgTG9zIGF1dG9yZXMgYXV0b3JpemFuIGEgbGEgVW5pdmVyc2lkYWQgTmFjaW9uYWwgZGUgQ29sb21iaWEgcGFyYSBwdWJsaWNhciBsYSBvYnJhIGVuIGVsIGZvcm1hdG8gcXVlIGVsIHJlcG9zaXRvcmlvIGxvIHJlcXVpZXJhIChpbXByZXNvLCBkaWdpdGFsLCBlbGVjdHLDs25pY28gbyBjdWFscXVpZXIgb3RybyBjb25vY2lkbyBvIHBvciBjb25vY2VyKSB5IGNvbm9jZW4gcXVlIGRhZG8gcXVlIHNlIHB1YmxpY2EgZW4gSW50ZXJuZXQgcG9yIGVzdGUgaGVjaG8gY2lyY3VsYSBjb24gdW4gYWxjYW5jZSBtdW5kaWFsLiBjKSBMb3MgYXV0b3JlcyBhY2VwdGFuIHF1ZSBsYSBhdXRvcml6YWNpw7NuIHNlIGhhY2UgYSB0w610dWxvIGdyYXR1aXRvLCBwb3IgbG8gdGFudG8sIHJlbnVuY2lhbiBhIHJlY2liaXIgZW1vbHVtZW50byBhbGd1bm8gcG9yIGxhIHB1YmxpY2FjacOzbiwgZGlzdHJpYnVjacOzbiwgY29tdW5pY2FjacOzbiBww7pibGljYSB5IGN1YWxxdWllciBvdHJvIHVzbyBxdWUgc2UgaGFnYSBlbiBsb3MgdMOpcm1pbm9zIGRlIGxhIHByZXNlbnRlIGxpY2VuY2lhIHkgZGUgbGEgbGljZW5jaWEgQ3JlYXRpdmUgQ29tbW9ucyBjb24gcXVlIHNlIHB1YmxpY2EuIGQpIExvcyBhdXRvcmVzIG1hbmlmaWVzdGFuIHF1ZSBzZSB0cmF0YSBkZSB1bmEgb2JyYSBvcmlnaW5hbCBzb2JyZSBsYSBxdWUgdGllbmVuIGxvcyBkZXJlY2hvcyBxdWUgYXV0b3JpemFuIHkgcXVlIHNvbiBlbGxvcyBxdWllbmVzIGFzdW1lbiB0b3RhbCByZXNwb25zYWJpbGlkYWQgcG9yIGVsIGNvbnRlbmlkbyBkZSBzdSBvYnJhIGFudGUgbGEgVW5pdmVyc2lkYWQgTmFjaW9uYWwgeSBhbnRlIHRlcmNlcm9zLiBFbiB0b2RvIGNhc28gbGEgVW5pdmVyc2lkYWQgTmFjaW9uYWwgZGUgQ29sb21iaWEgc2UgY29tcHJvbWV0ZSBhIGluZGljYXIgc2llbXByZSBsYSBhdXRvcsOtYSBpbmNsdXllbmRvIGVsIG5vbWJyZSBkZWwgYXV0b3IgeSBsYSBmZWNoYSBkZSBwdWJsaWNhY2nDs24uIGUpIExvcyBhdXRvcmVzIGF1dG9yaXphbiBhIGxhIFVuaXZlcnNpZGFkIHBhcmEgaW5jbHVpciBsYSBvYnJhIGVuIGxvcyDDrW5kaWNlcyB5IGJ1c2NhZG9yZXMgcXVlIGVzdGltZW4gbmVjZXNhcmlvcyBwYXJhIHByb21vdmVyIHN1IGRpZnVzacOzbi4gZikgTG9zIGF1dG9yZXMgYWNlcHRhbiBxdWUgbGEgVW5pdmVyc2lkYWQgTmFjaW9uYWwgZGUgQ29sb21iaWEgcHVlZGEgY29udmVydGlyIGVsIGRvY3VtZW50byBhIGN1YWxxdWllciBtZWRpbyBvIGZvcm1hdG8gcGFyYSBwcm9ww7NzaXRvcyBkZSBwcmVzZXJ2YWNpw7NuIGRpZ2l0YWwuIFNJIEVMIERPQ1VNRU5UTyBTRSBCQVNBIEVOIFVOIFRSQUJBSk8gUVVFIEhBIFNJRE8gUEFUUk9DSU5BRE8gTyBBUE9ZQURPIFBPUiBVTkEgQUdFTkNJQSBPIFVOQSBPUkdBTklaQUNJw5NOLCBDT04gRVhDRVBDScOTTiBERSBMQSBVTklWRVJTSURBRCBOQUNJT05BTCBERSBDT0xPTUJJQSwgTE9TIEFVVE9SRVMgR0FSQU5USVpBTiBRVUUgU0UgSEEgQ1VNUExJRE8gQ09OIExPUyBERVJFQ0hPUyBZIE9CTElHQUNJT05FUyBSRVFVRVJJRE9TIFBPUiBFTCBSRVNQRUNUSVZPIENPTlRSQVRPIE8gQUNVRVJETy4KUGFyYSB0cmFiYWpvcyBkZXBvc2l0YWRvcyBwb3Igb3RyYXMgcGVyc29uYXMgZGlzdGludGFzIGEgc3UgYXV0b3I6IERlY2xhcm8gcXVlIGVsIGdydXBvIGRlIGFyY2hpdm9zIGRpZ2l0YWxlcyB5IG1ldGFkYXRvcyBhc29jaWFkb3MgcXVlIGVzdG95IGFyY2hpdmFuZG8gZW4gZWwgUmVwb3NpdG9yaW8gSW5zdGl0dWNpb25hbCBVTikgZXMgZGUgZG9taW5pbyBww7pibGljby4gU2kgbm8gZnVlc2UgZWwgY2FzbywgYWNlcHRvIHRvZGEgbGEgcmVzcG9uc2FiaWxpZGFkIHBvciBjdWFscXVpZXIgaW5mcmFjY2nDs24gZGUgZGVyZWNob3MgZGUgYXV0b3IgcXVlIGNvbmxsZXZlIGxhIGRpc3RyaWJ1Y2nDs24gZGUgZXN0b3MgYXJjaGl2b3MgeSBtZXRhZGF0b3MuCkFsIGhhY2VyIGNsaWMgZW4gZWwgc2lndWllbnRlIGJvdMOzbiwgdXN0ZWQgaW5kaWNhIHF1ZSBlc3TDoSBkZSBhY3VlcmRvIGNvbiBlc3RvcyB0w6lybWlub3MuCgpVTklWRVJTSURBRCBOQUNJT05BTCBERSBDT0xPTUJJQSAtIMOabHRpbWEgbW9kaWZpY2FjacOzbiAyNy8yMC8yMDIwCg== |