Evaluación de la expresión de la proteína recombinante fenilalanina hidroxilasa humana producida por Lactobacillus plantarum
La fenilcetonuria es la amioacidopatía más frecuente dentro de los errores innatos de metabolismo y consiste en la acumulación del aminoácido L-fenilalanina (Phe) en tejidos y plasma a causa de la pérdida de actividad de la enzima fenilalanina hidroxilasa la cual oxida la Phe a L-tirosina. La acumul...
- Autores:
-
González Castellanos, Santiago Iaacov
- Tipo de recurso:
- Trabajo de grado de pregrado
- Fecha de publicación:
- 2019
- Institución:
- Pontificia Universidad Javeriana
- Repositorio:
- Repositorio Universidad Javeriana
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- OAI Identifier:
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- Acceso en línea:
- http://hdl.handle.net/10554/43202
- Palabra clave:
- Fenilcetonuria
Lactobacillus plantarum
Fenilalanina hidroxilasa humana
Phenylketonuria
Lactobacillus plantarum
Human phenylalanine hydroxylase
Microbiología industrial - Tesis y disertaciones académicas
Proteínas recombinantes
Lactobacillus plantarum
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La fenilcetonuria es la amioacidopatía más frecuente dentro de los errores innatos de metabolismo y consiste en la acumulación del aminoácido L-fenilalanina (Phe) en tejidos y plasma a causa de la pérdida de actividad de la enzima fenilalanina hidroxilasa la cual oxida la Phe a L-tirosina. La acumulación de este compuesto tiene un efecto neurotóxico y puede llegar a deteriorar la salud de quien padece la enfermedad si no es tratada a tiempo. Este trabajo de grado tuvo como objetivo evaluar a Lactobacillis plantarum como sistema de expresión de la enzima fenilalanina hidroxilasa humana, con el fin de determinar si la proteína heteróloga puede ser empleada como agente terapéutico contra la enfermedad. Dentro de los hallazgos obtenidos en este estudio, se obtuvo que Lactobacillus plantarum es sistema de expresión que es fácilmente transformable. Sin embargo, se observaron problemas con el seguimiento de la proteína recombinante mediante el uso del reportero, proteína verde fluorescente. Por otra parte, mediante técnicas moleculares como SDS PAGE y western blot fue posible identificar la presencia de esta enzima, donde los resultados sugieren que la proteína reportera está ausente. Finalmente, midiendo la actividad enzimática del clon positivo para la enzima se pudo concluir que este clon sintetiza una proteína funcional. Estos resultados muestran la importancia de seguir estudiando el uso de L. plantarum como sistema de expresión. Sin embargo, futuros trabajos se deben enfocar en la confirmación de la producción de la proteína, así como en nuevos reporteros que permitan seguir el proceso de producción de la proteína de una manera más eficiente. |
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Atribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 Internacionalhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/info:eu-repo/semantics/openAccessDe acuerdo con la naturaleza del uso concedido, la presente licencia parcial se otorga a título gratuito por el máximo tiempo legal colombiano, con el propósito de que en dicho lapso mi (nuestra) obra sea explotada en las condiciones aquí estipuladas y para los fines indicados, respetando siempre la titularidad de los derechos patrimoniales y morales correspondientes, de acuerdo con los usos honrados, de manera proporcional y justificada a la finalidad perseguida, sin ánimo de lucro ni de comercialización. De manera complementaria, garantizo (garantizamos) en mi (nuestra) calidad de estudiante (s) y por ende autor (es) exclusivo (s), que la Tesis o Trabajo de Grado en cuestión, es producto de mi (nuestra) plena autoría, de mi (nuestro) esfuerzo personal intelectual, como consecuencia de mi (nuestra) creación original particular y, por tanto, soy (somos) el (los) único (s) titular (es) de la misma. Además, aseguro (aseguramos) que no contiene citas, ni transcripciones de otras obras protegidas, por fuera de los límites autorizados por la ley, según los usos honrados, y en proporción a los fines previstos; ni tampoco contempla declaraciones difamatorias contra terceros; respetando el derecho a la imagen, intimidad, buen nombre y demás derechos constitucionales. Adicionalmente, manifiesto (manifestamos) que no se incluyeron expresiones contrarias al orden público ni a las buenas costumbres. En consecuencia, la responsabilidad directa en la elaboración, presentación, investigación y, en general, contenidos de la Tesis o Trabajo de Grado es de mí (nuestro) competencia exclusiva, eximiendo de toda responsabilidad a la Pontifica Universidad Javeriana por tales aspectos. Sin perjuicio de los usos y atribuciones otorgadas en virtud de este documento, continuaré (continuaremos) conservando los correspondientes derechos patrimoniales sin modificación o restricción alguna, puesto que, de acuerdo con la legislación colombiana aplicable, el presente es un acuerdo jurídico que en ningún caso conlleva la enajenación de los derechos patrimoniales derivados del régimen del Derecho de Autor. De conformidad con lo establecido en el artículo 30 de la Ley 23 de 1982 y el artículo 11 de la Decisión Andina 351 de 1993, “Los derechos morales sobre el trabajo son propiedad de los autores”, los cuales son irrenunciables, imprescriptibles, inembargables e inalienables. En consecuencia, la Pontificia Universidad Javeriana está en la obligación de RESPETARLOS Y HACERLOS RESPETAR, para lo cual tomará las medidas correspondientes para garantizar su observancia.http://purl.org/coar/access_right/c_abf2Alméciga Díaz, Carlos JavierGonzález Castellanos, Santiago IaacovMontaña Lara, Jose Salvador2019-06-14T12:53:16Z2020-04-15T20:18:31Z2019-06-14T12:53:16Z2020-04-15T20:18:31Z2019-06-10http://hdl.handle.net/10554/43202instname:Pontificia Universidad Javerianareponame:Repositorio Institucional - Pontificia Universidad Javerianarepourl:https://repository.javeriana.edu.coLa fenilcetonuria es la amioacidopatía más frecuente dentro de los errores innatos de metabolismo y consiste en la acumulación del aminoácido L-fenilalanina (Phe) en tejidos y plasma a causa de la pérdida de actividad de la enzima fenilalanina hidroxilasa la cual oxida la Phe a L-tirosina. La acumulación de este compuesto tiene un efecto neurotóxico y puede llegar a deteriorar la salud de quien padece la enfermedad si no es tratada a tiempo. Este trabajo de grado tuvo como objetivo evaluar a Lactobacillis plantarum como sistema de expresión de la enzima fenilalanina hidroxilasa humana, con el fin de determinar si la proteína heteróloga puede ser empleada como agente terapéutico contra la enfermedad. Dentro de los hallazgos obtenidos en este estudio, se obtuvo que Lactobacillus plantarum es sistema de expresión que es fácilmente transformable. Sin embargo, se observaron problemas con el seguimiento de la proteína recombinante mediante el uso del reportero, proteína verde fluorescente. Por otra parte, mediante técnicas moleculares como SDS PAGE y western blot fue posible identificar la presencia de esta enzima, donde los resultados sugieren que la proteína reportera está ausente. Finalmente, midiendo la actividad enzimática del clon positivo para la enzima se pudo concluir que este clon sintetiza una proteína funcional. Estos resultados muestran la importancia de seguir estudiando el uso de L. plantarum como sistema de expresión. Sin embargo, futuros trabajos se deben enfocar en la confirmación de la producción de la proteína, así como en nuevos reporteros que permitan seguir el proceso de producción de la proteína de una manera más eficiente.Pontificia Universidad JaverianaPhenylketonuria is the most common aminoacidopathy in innate metabolism errors and consists of the accumulation of the amino acid L-phenylalanine (Phe) in tissues and plasma due to the loss of activity of the enzyme phenylalanine hydroxylase which oxidizes the Phe to L-tyrosine. The accumulation of this compound has a neurotoxic effect and can damage the health of the sufferer if not treated in time. This study aimed to evaluate Lactobacillis plantarum as an expression system of the human enzyme phenylalanine hydroxylase, in order to determine whether heterologous protein can be used as a therapeutic agent against the disease. Among the findings obtained in this study, it was obtained that Lactobacillus plantarum is system of expression that is easily transformable. However, problems were observed with the tracking of recombinant protein through the use of the reporter, green fluorescent protein. On the other hand, using molecular techniques such as SDS-PAGE and western blot it was possible to identify the presence of this enzyme, where the results suggest that the reporter protein is absent. Finally, by measuring the enzymatic activity of the positive clone for the enzyme, it was concluded that this clone synthesizes a functional protein. These results show the importance of further studying the use of L. plantarum as an expression system. However, future work should focus on confirming the production of the protein, as well as on new reporters that allow them to follow the process of producing the protein in a more efficient wayMicrobiólogo (a) IndustrialPregradoPDFapplication/pdfspaPontificia Universidad JaverianaMicrobiología IndustrialFacultad de CienciasFenilcetonuriaLactobacillus plantarumFenilalanina hidroxilasa humanaPhenylketonuriaLactobacillus plantarumHuman phenylalanine hydroxylaseMicrobiología industrial - Tesis y disertaciones académicasProteínas recombinantesLactobacillus plantarumEvaluación de la expresión de la proteína recombinante fenilalanina hidroxilasa humana producida por Lactobacillus plantarumTesis/Trabajo de grado - Monografía - Pregradohttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1finfo:eu-repo/semantics/bachelorThesisTHUMBNAILEvaluación de la expresión de la proteína recombinante fenilalanina hidroxilasa humana producida por Lactobacillus plantarum.pdf.jpgIM Thumbnailimage/jpeg2338http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/43202/1/Evaluaci%c3%b3n%20de%20la%20expresi%c3%b3n%20de%20la%20prote%c3%adna%20recombinante%20fenilalanina%20hidroxilasa%20humana%20producida%20por%20Lactobacillus%20plantarum.pdf.jpgb488e45a3baf0eee276b04810be7a9ceMD51open accessCarta de Autorización de los Autores.pdf.jpgIM Thumbnailimage/jpeg4712http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/43202/2/Carta%20de%20Autorizaci%c3%b3n%20de%20los%20Autores.pdf.jpg104377782f09034cc6aef53e27a155bbMD52open accessCarta de aprobación de los directores.pdf.jpgIM Thumbnailimage/jpeg4041http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/43202/3/Carta%20de%20aprobaci%c3%b3n%20de%20los%20directores.pdf.jpged39751e6466adaf7e957e481e9a5144MD53open accessLICENSElicense.txttext/plain2603http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/43202/4/license.txt2070d280cc89439d983d9eee1b17df53MD54open accessORIGINALEvaluación de la expresión de la proteína recombinante fenilalanina hidroxilasa humana producida por Lactobacillus plantarum.pdfTrabajo de grado, titulado: Evaluación de la expresión de la proteína recombinante fenilalanina hidroxilasa humana producida por Lactobacillus plantarumapplication/pdf1255959http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/43202/5/Evaluaci%c3%b3n%20de%20la%20expresi%c3%b3n%20de%20la%20prote%c3%adna%20recombinante%20fenilalanina%20hidroxilasa%20humana%20producida%20por%20Lactobacillus%20plantarum.pdf1c641c6d0abe1a2c23c30a7afe275a18MD55open accessCarta de Autorización de los Autores.pdfapplication/pdf1451960http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/43202/6/Carta%20de%20Autorizaci%c3%b3n%20de%20los%20Autores.pdff37c6bf4a2ebb7555ae8ad4daba78441MD56metadata only accessCarta de aprobación de los directores.pdfapplication/pdf381956http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/43202/7/Carta%20de%20aprobaci%c3%b3n%20de%20los%20directores.pdf19b7c372625d44ab92437eb43d0c0d64MD57metadata only access10554/43202oai:repository.javeriana.edu.co:10554/432022022-05-02 15:25:29.12Repositorio Institucional - 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