Evaluación in vitro del sistema de edición genómica CRISPR/nCas9 en fibroblastos de pacientes con mucopolisacaridosis IIIB como posible estrategia de tratamiento
La mucopolisacaridosis IIIB (MPS IIIB) es una enfermedad de depósito lisosomal (EDL) que se caracteriza por la deficiencia de la enzima α–N-acetilglucosaminidasa causada por mutaciones en el gen NAGLU. La deficiencia de esta enzima lisosomal genera la acumulación de glicosaminoglicanos (GAGs), espec...
- Autores:
-
Lemaitre Gómez, Paloma
- Tipo de recurso:
- Trabajo de grado de pregrado
- Fecha de publicación:
- 2022
- Institución:
- Pontificia Universidad Javeriana
- Repositorio:
- Repositorio Universidad Javeriana
- Idioma:
- spa
- OAI Identifier:
- oai:repository.javeriana.edu.co:10554/60402
- Acceso en línea:
- http://hdl.handle.net/10554/60402
- Palabra clave:
- Mucopolisacaridosis IIIB
CRISPR/nCas9
Terapia génica
Edición genómica
CRISPR/Cas9
Mucopolysaccharidosis IIIB
CRISPR/nCas9
Gene therapy
Genome editing
CRISPR/Cas9
Microbiología industrial - Tesis y disertaciones académicas
Terapia de gen - Bogotá (Colombia)
Mucopolisacaridosis
Genómica
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- openAccess
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- Atribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 Internacional
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In vitro evaluation of the CRISPR/nCas9 genomic editing system in fibroblasts of patients with mucopolysaccharidosis IIIB as a possible treatment strategy |
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La mucopolisacaridosis IIIB (MPS IIIB) es una enfermedad de depósito lisosomal (EDL) que se caracteriza por la deficiencia de la enzima α–N-acetilglucosaminidasa causada por mutaciones en el gen NAGLU. La deficiencia de esta enzima lisosomal genera la acumulación de glicosaminoglicanos (GAGs), específicamente de heparán sulfato (HS) tanto en los lisosomas como a nivel extracelular, lo que causa distintas afecciones clínicas con particular compromiso del sistema nervioso central (SNC). A la fecha, no hay una terapia aprobada para el tratamiento de la MPS IIIB, sin embargo, la edición génica con CRISPR/nCas9 y vectores no virales como mecanismo de entrega de genes surge como una alternativa de tratamiento que ha mostrado resultados alentadores en otros tipos de EDL como la gangliosidosis GM2 y MPS IVA. En este sentido, en el presente estudio se evaluó por primera vez en un modelo in vitro el uso de la herramienta de edición genómica CRISPR/nCas9 para generar el knock-in de un casete de expresión que contiene el ADNc de NAGLU en el locus AAVS1 del genoma humano. Los resultados mostraron una construcción exitosa de un vector donante con el ADNc de NAGLU. Luego de 30 días de edición, se alcanzó hasta un 71% de la actividad normal de NAGLU. Adicionalmente, se observó una tendencia a la disminución de la masa lisosomal promedio a los 30 días post-transfección, aunque no en la cantidad de GAGs totales. Estos resultados sirven como base para futuros experimentos que permitan sumar al conocimiento sobre los beneficios, ventajas y riesgos de la utilización de CRISPR/nCas9 como nueva alternativa de terapia génica para la MPS IIIB. |
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Atribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 Internacionalhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/info:eu-repo/semantics/openAccessDe acuerdo con la naturaleza del uso concedido, la presente licencia parcial se otorga a título gratuito por el máximo tiempo legal colombiano, con el propósito de que en dicho lapso mi (nuestra) obra sea explotada en las condiciones aquí estipuladas y para los fines indicados, respetando siempre la titularidad de los derechos patrimoniales y morales correspondientes, de acuerdo con los usos honrados, de manera proporcional y justificada a la finalidad perseguida, sin ánimo de lucro ni de comercialización. De manera complementaria, garantizo (garantizamos) en mi (nuestra) calidad de estudiante (s) y por ende autor (es) exclusivo (s), que la Tesis o Trabajo de Grado en cuestión, es producto de mi (nuestra) plena autoría, de mi (nuestro) esfuerzo personal intelectual, como consecuencia de mi (nuestra) creación original particular y, por tanto, soy (somos) el (los) único (s) titular (es) de la misma. Además, aseguro (aseguramos) que no contiene citas, ni transcripciones de otras obras protegidas, por fuera de los límites autorizados por la ley, según los usos honrados, y en proporción a los fines previstos; ni tampoco contempla declaraciones difamatorias contra terceros; respetando el derecho a la imagen, intimidad, buen nombre y demás derechos constitucionales. Adicionalmente, manifiesto (manifestamos) que no se incluyeron expresiones contrarias al orden público ni a las buenas costumbres. En consecuencia, la responsabilidad directa en la elaboración, presentación, investigación y, en general, contenidos de la Tesis o Trabajo de Grado es de mí (nuestro) competencia exclusiva, eximiendo de toda responsabilidad a la Pontifica Universidad Javeriana por tales aspectos. Sin perjuicio de los usos y atribuciones otorgadas en virtud de este documento, continuaré (continuaremos) conservando los correspondientes derechos patrimoniales sin modificación o restricción alguna, puesto que, de acuerdo con la legislación colombiana aplicable, el presente es un acuerdo jurídico que en ningún caso conlleva la enajenación de los derechos patrimoniales derivados del régimen del Derecho de Autor. De conformidad con lo establecido en el artículo 30 de la Ley 23 de 1982 y el artículo 11 de la Decisión Andina 351 de 1993, "Los derechos morales sobre el trabajo son propiedad de los autores", los cuales son irrenunciables, imprescriptibles, inembargables e inalienables. En consecuencia, la Pontificia Universidad Javeriana está en la obligación de RESPETARLOS Y HACERLOS RESPETAR, para lo cual tomará las medidas correspondientes para garantizar su observancia.http://purl.org/coar/access_right/c_abf2Alméciga Díaz, Carlos JavierLeal Bohorquez, Andrés FelipeLemaitre Gómez, PalomaRodríguez Arias, Edwin AlexanderColombia2021-2022Bogotá (Colombia)2022-06-23T13:52:35Z2022-06-23T13:52:35Z2022-06-08http://hdl.handle.net/10554/60402instname:Pontificia Universidad Javerianareponame:Repositorio Institucional - Pontificia Universidad Javerianarepourl:https://repository.javeriana.edu.coLa mucopolisacaridosis IIIB (MPS IIIB) es una enfermedad de depósito lisosomal (EDL) que se caracteriza por la deficiencia de la enzima α–N-acetilglucosaminidasa causada por mutaciones en el gen NAGLU. La deficiencia de esta enzima lisosomal genera la acumulación de glicosaminoglicanos (GAGs), específicamente de heparán sulfato (HS) tanto en los lisosomas como a nivel extracelular, lo que causa distintas afecciones clínicas con particular compromiso del sistema nervioso central (SNC). A la fecha, no hay una terapia aprobada para el tratamiento de la MPS IIIB, sin embargo, la edición génica con CRISPR/nCas9 y vectores no virales como mecanismo de entrega de genes surge como una alternativa de tratamiento que ha mostrado resultados alentadores en otros tipos de EDL como la gangliosidosis GM2 y MPS IVA. En este sentido, en el presente estudio se evaluó por primera vez en un modelo in vitro el uso de la herramienta de edición genómica CRISPR/nCas9 para generar el knock-in de un casete de expresión que contiene el ADNc de NAGLU en el locus AAVS1 del genoma humano. Los resultados mostraron una construcción exitosa de un vector donante con el ADNc de NAGLU. Luego de 30 días de edición, se alcanzó hasta un 71% de la actividad normal de NAGLU. Adicionalmente, se observó una tendencia a la disminución de la masa lisosomal promedio a los 30 días post-transfección, aunque no en la cantidad de GAGs totales. Estos resultados sirven como base para futuros experimentos que permitan sumar al conocimiento sobre los beneficios, ventajas y riesgos de la utilización de CRISPR/nCas9 como nueva alternativa de terapia génica para la MPS IIIB.Mucopolysaccharidosis IIIB (MPS IIIB) is a lysosomal storage disease (LSD) characterized by the deficiency of the α-N-acetylglucosaminidase enzyme caused by mutations in the gene encoding for it. The deficiency of this lysosomal enzyme generates the accumulation of glycosaminoglycans (GAGs), especially heparan sulfate (HS) in the lysosomes of the cell as well as extracellularly, which causes different clinical conditions mainly affecting the central nervous system (CNS). To date, there is no approved therapy for the treatment of MPS IIIB, however, gene editing with CRISPR/nCas9 and non-viral vectors as a gene delivery mechanism arises as a treatment model alternative that has shown encouraging results in other types of LSD such as GM2 gangliosidoses and MPS IVA. In this sense, in the present study the use of the genomic editing tool CRISPR/nCas9 for the expression of a cassette with NAGLU cDNA at the AAVS1 locus of the human genome was evaluated for the first time in an in vitro model. The results showed a successful recombination and construction of a donor vector with NAGLU cDNA, and an increase in long-term enzyme activity (30 days) reaching values of 71% of normal NAGLU activity. Additionally, a decrease in the average lysosomal mass was observed within 30 days post-transfection, but not in total GAGs. These results serve as a basis for future experiments that sum up to the actual information about the benefits, advantages, and risks of using CRISPR/nCas9 as a new gene therapy alternative for MPS IIIB.Microbiólogo (a) IndustrialPregradoPDFapplication/pdfspaPontificia Universidad JaverianaMicrobiología IndustrialFacultad de CienciasMucopolisacaridosis IIIBCRISPR/nCas9Terapia génicaEdición genómicaCRISPR/Cas9Mucopolysaccharidosis IIIBCRISPR/nCas9Gene therapyGenome editingCRISPR/Cas9Microbiología industrial - Tesis y disertaciones académicasTerapia de gen - Bogotá (Colombia)MucopolisacaridosisGenómicaEvaluación in vitro del sistema de edición genómica CRISPR/nCas9 en fibroblastos de pacientes con mucopolisacaridosis IIIB como posible estrategia de tratamientoIn vitro evaluation of the CRISPR/nCas9 genomic editing system in fibroblasts of patients with mucopolysaccharidosis IIIB as a possible treatment strategyTesis/Trabajo de grado - Monografía - Pregradohttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1finfo:eu-repo/semantics/bachelorThesisLICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-82603http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/60402/3/license.txt2070d280cc89439d983d9eee1b17df53MD53open accessORIGINALTrabajo de grado - Paloma Lemaitre Gómez.pdfTrabajo de grado - Paloma Lemaitre Gómez.pdfDocumentoapplication/pdf1180013http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/60402/1/Trabajo%20de%20grado%20-%20Paloma%20Lemaitre%20Go%cc%81mez.pdfc744cbefe87acf71a4b128edd117782cMD51open accessCarta de autorización.pdfCarta de autorización.pdfLicencia de usoapplication/pdf231422http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/60402/2/Carta%20de%20autorizaci%c3%b3n.pdfce18354fe3e64a462878ba922375cc8dMD52metadata only accessTHUMBNAILTrabajo de grado - Paloma Lemaitre Gómez.pdf.jpgTrabajo de grado - Paloma Lemaitre Gómez.pdf.jpgIM Thumbnailimage/jpeg5310http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/60402/4/Trabajo%20de%20grado%20-%20Paloma%20Lemaitre%20Go%cc%81mez.pdf.jpg0886d8b7fc5ef3ccc79bfd623e5e29e8MD54open accessCarta de autorización.pdf.jpgCarta de autorización.pdf.jpgIM Thumbnailimage/jpeg7286http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/60402/5/Carta%20de%20autorizaci%c3%b3n.pdf.jpgbf31e6bc7092d4074dbc2ca91809587cMD55open access10554/60402oai:repository.javeriana.edu.co:10554/604022022-06-27 03:06:49.035Repositorio Institucional - Pontificia Universidad Javerianarepositorio@javeriana.edu.coTElDRU5DSUEgWSBBVVRPUklaQUNJw5NOIERFIExPUyBBVVRPUkVTIFBBUkEgUFVCTElDQVIgWSBQRVJNSVRJUiBMQSBDT05TVUxUQSBZIFVTTy4KClBhcnRlIDEuIFTDqXJtaW5vcyBkZSBsYSBsaWNlbmNpYSBnZW5lcmFsIHBhcmEgcHVibGljYWNpw7NuIGRlIG9icmFzIGVuIGVsIHJlcG9zaXRvcmlvIGluc3RpdHVjaW9uYWwKQ29tbyB0aXR1bGFyIChlcykgZGVsIGRlcmVjaG8gZGUgYXV0b3IsIGNvbmZpZXJvIChlcmltb3MpIGEgbGEgUG9udGlmaWNpYSBVbml2ZXJzaWRhZCBKYXZlcmlhbmEgdW5hIGxpY2VuY2lhIG5vIGV4Y2x1c2l2YSwgbGltaXRhZGEgeSBncmF0dWl0YSBzb2JyZSBsYSBvYnJhIHF1ZSBzZSBpbnRlZ3JhcsOhIGVuIGVsIFJlcG9zaXRvcmlvIEluc3RpdHVjaW9uYWwsIHF1ZSBzZSBhanVzdGEgYSBsYXMgc2lndWllbnRlcyBjYXJhY3RlcsOtc3RpY2FzOgphKSAgICAgIEVzdGFyw6EgdmlnZW50ZSBhIHBhcnRpciBkZSBsYSBmZWNoYSBkZSBpbmNsdXNpw7NuIGVuIGVsIHJlcG9zaXRvcmlvLCBwb3IgdW4gcGxhem8gZGUgNSBhw7FvcywgcXVlIHNlcsOhbiBwcm9ycm9nYWJsZXMgaW5kZWZpbmlkYW1lbnRlIHBvciBlbCB0aWVtcG8gcXVlIGR1cmUgZWwgZGVyZWNobyBwYXRyaW1vbmlhbCBkZWwgYXV0b3IuIEVsIGF1dG9yIHBvZHLDoSBkYXIgcG9yIHRlcm1pbmFkYSBsYSBsaWNlbmNpYSBzb2xpY2l0w6FuZG9sbyBhIGxhIFVuaXZlcnNpZGFkIHBvciBlc2NyaXRvLgpiKSAgICAgIEF1dG9yaXphIGEgbGEgUG9udGlmaWNpYSBVbml2ZXJzaWRhZCBKYXZlcmlhbmEgYSBwdWJsaWNhciBsYSBvYnJhIGVuIGRpZ2l0YWwsIGNvbm9jaWVuZG8gcXVlLCBkYWRvIHF1ZSBzZSBwdWJsaWNhIGVuIEludGVybmV0LCBwb3IgZXN0ZSBoZWNobyBjaXJjdWxhIGNvbiB1biBhbGNhbmNlIG11bmRpYWwuCmMpICAgICAgTG9zIGF1dG9yZXMgYWNlcHRhbiBxdWUgbGEgYXV0b3JpemFjacOzbiBzZSBoYWNlIGEgdMOtdHVsbyBncmF0dWl0bywgcG9yIGxvIHRhbnRvIHJlbnVuY2lhbiBhIHJlY2liaXIgYmVuZWZpY2lvIGFsZ3VubyBwb3IgbGEgcHVibGljYWNpw7NuLCBkaXN0cmlidWNpw7NuLCBjb211bmljYWNpw7NuIHDDumJsaWNhIHkgY3VhbHF1aWVyIG90cm8gdXNvIHF1ZSBzZSBoYWdhIGVuIGxvcyB0w6lybWlub3MgZGUgbGEgcHJlc2VudGUgbGljZW5jaWEgeSBkZSBsYSBsaWNlbmNpYSBkZSB1c28gY29uIHF1ZSBzZSBwdWJsaWNhLgpkKSAgICAgIExvcyBhdXRvcmVzIG1hbmlmaWVzdGFuIHF1ZSBzZSB0cmF0YSBkZSB1bmEgb2JyYSBvcmlnaW5hbCBzb2JyZSBsYSBxdWUgdGllbmVuIGxvcyBkZXJlY2hvcyBxdWUgYXV0b3JpemFuIHkgcXVlIHNvbiBlbGxvcyBxdWllbmVzIGFzdW1lbiB0b3RhbCByZXNwb25zYWJpbGlkYWQgcG9yIGVsIGNvbnRlbmlkbyBkZSBzdSBvYnJhIGFudGUgbGEgUG9udGlmaWNpYSBVbml2ZXJzaWRhZCBKYXZlcmlhbmEgeSBhbnRlIHRlcmNlcm9zLiBFbiB0b2RvIGNhc28gbGEgUG9udGlmaWNpYSBVbml2ZXJzaWRhZCBKYXZlcmlhbmEgc2UgY29tcHJvbWV0ZSBhIGluZGljYXIgc2llbXByZSBsYSBhdXRvcsOtYSBpbmNsdXllbmRvIGVsIG5vbWJyZSBkZWwgYXV0b3IgeSBsYSBmZWNoYSBkZSBwdWJsaWNhY2nDs24uCmUpICAgICAgQXV0b3Jpem8gKGFtb3MpIGEgbGEgVW5pdmVyc2lkYWQgcGFyYSBpbmNsdWlyIGxhIG9icmEgZW4gbG9zIMOtbmRpY2VzIHkgYnVzY2Fkb3JlcyBxdWUgZXN0aW1lbiBuZWNlc2FyaW9zIHBhcmEgcHJvbW92ZXIgc3UgZGlmdXNpw7NuLgpmKSAgICAgIEFjZXB0byAoYW1vcykgcXVlIGxhIFBvbnRpZmljaWEgVW5pdmVyc2lkYWQgSmF2ZXJpYW5hIHB1ZWRhIGNvbnZlcnRpciBlbCBkb2N1bWVudG8gYSBjdWFscXVpZXIgbWVkaW8gbyBmb3JtYXRvIHBhcmEgcHJvcMOzc2l0b3MgZGUgcHJlc2VydmFjacOzbiBkaWdpdGFsLgpnKSAgICAgIEF1dG9yaXpvIChhbW9zKSBxdWUgbGEgb2JyYSBzZWEgcHVlc3RhIGEgZGlzcG9zaWNpw7NuIGRlbCBww7pibGljbyBlbiBsb3MgdMOpcm1pbm9zIGF1dG9yaXphZG9zIGVuIGxvcyBsaXRlcmFsZXMgYW50ZXJpb3JlcyBiYWpvIGxvcyBsw61taXRlcyBkZWZpbmlkb3MgcG9yIGxhIHVuaXZlcnNpZGFkIGVuIGxhcyDigJxDb25kaWNpb25lcyBkZSB1c28gZGUgZXN0cmljdG8gY3VtcGxpbWllbnRv4oCdIGRlIGxvcyByZWN1cnNvcyBwdWJsaWNhZG9zIGVuIFJlcG9zaXRvcmlvIEluc3RpdHVjaW9uYWwgUFVKICwgY3V5byB0ZXh0byBjb21wbGV0byBzZSBwdWVkZSBjb25zdWx0YXIgZW4gaHR0cDovL3JlcG9zaXRvcnkuamF2ZXJpYW5hLmVkdS5jby8KClNJIEVMIERPQ1VNRU5UTyBTRSBCQVNBIEVOIFVOIFRSQUJBSk8gUVVFIEhBIFNJRE8gUEFUUk9DSU5BRE8gTyBBUE9ZQURPIFBPUiBVTkEgQUdFTkNJQSBPIFVOQSBPUkdBTklaQUNJw5NOLCBDT04gRVhDRVBDScOTTiBERSBMQSBQT05USUZJQ0lBIFVOSVZFUlNJREFEIEpBVkVSSUFOQSwgRUwgKExPUykgQVVUT1IoRVMpIEdBUkFOVElaQShNT1MpIFFVRSBTRSBIQSBDVU1QTElETyBDT04gTE9TIERFUkVDSE9TIFkgT0JMSUdBQ0lPTkVTIFJFUVVFUklET1MgUE9SIEVMIFJFU1BFQ1RJVk8gQ09OVFJBVE8gTyBBQ1VFUkRPLgo= |