Potencial antioxidante y modulador de la inflamación de Mollinedia Racemosa, Siparuna Sessiliflora y Croton Leptostachyus
141 p. Recurso Electrónico
- Autores:
-
Sánchez Peralta, Wilmer Fernando
- Tipo de recurso:
- Fecha de publicación:
- 2018
- Institución:
- Universidad del Tolima
- Repositorio:
- RIUT: Repositorio U. Tolima
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- Acceso en línea:
- https://repository.ut.edu.co/handle/001/2766
- Palabra clave:
- Mollinedia racemosa
Siparuna sessiliflora
Croton leptostachyus
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- License
- Atribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 Internacional (CC BY-NC-ND 4.0)
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Sánchez Peralta, Wilmer Fernandoddb60475-11d3-4018-b203-59c449e5abe7-1(Ibagué - Tolima - Colombia)2019-06-10T17:30:05Z(Mundo, Suramérica, Colombia, Tolima) [1023837]2019-06-10T22:41:23Z2019-06-10T22:41:23Z2018141 p. Recurso ElectrónicoEl objetivo del presente trabajo fue evaluar el potencial antioxidante y antiinflamatorio de Mollinedia racemosa, Siparuna sessiliflora y Croton leptostachyus; especies pertenecientes a géneros usados en el tratamiento de dolencias asociadas al dolor e inflamación y que se caracterizan por ser ricas en metabolitos secundarios como fenoles y terpenoides principalmente. Las hojas de cada una de las especies, fueron secadas a temperatura ambiente durante un periodo de 24-48 horas; posteriormente se colocaron en contacto con el solvente por 48 horas. Los extractos etanólicos obtenidos fueron concentrados hasta sequedad mediante rotaevaporación a temperatura inferior a 50o C, se prepararon subextractos a partir de los extractos secos mediante partición líquido/sólido con n-hexano, acetato de etilo y etanol para así establecer un perfil de polaridad. La actividad antirradical de los subextractos de cada una de las plantas se midió in vitro mediante ensayos de estabilización de las especies DPPH, ABTS así como mediante la inhibición del óxido nítrico. El efecto modulador de la inflamación fue medido in vivo en ratones ICR mediante ensayos de fase aguda (edema auricular inducido por TPA) y subcrónica (modelo de bolsa de aire tratada con zimosano); las matrices biológicas obtenidas en cada uno de los modelos fueron sometidas a extracción proteica con el fin de evaluar parámetros marcadores de respuesta inflamatoria tales como: Mieloperoxidasa (MPO) y las citoquinas Factor de Necrosis Tumoral alfa (TNF-α) e interleucina 10 (IL-10). Así mismo, se realizó un análisis fitoquímico con el fin de reconocer las principales metabolitos secundarios presentes en las especies y posteriormente, teniendo en cuenta las fracciones con mayor poder antiinflamatorio, se hizo análisis por UHPLC con el fin de poder identificar compuestos fenólicos que pudieran estar asociadas al efecto antiinflamatorio y antioxidante observado. Los resultados obtenidos en las pruebas de actividad antirradical mostraron un patrón de respuesta que parece guardar relación directa con el contenido fenólico y con el solvente extractor. De este modo, la especie con mayor capacidad antioxidante en todos los ensayos fue Mollinedia racemosa (EtOHMr), seguida de Croton leptostachyus (AcOEtCl) y por último de Siparuna sessiliflora (EtOHSs). Los resultados del modelo in vivo de edema auricular, mostraron un marcado efecto antiinflamatorio en los subextractos de acetato de etilo de las especies estudiadas en comparación con las matrices etanólicas y hexánicas. La muestra más activa luego del patrón de indometacina (85.69% de inhibición) fue AcOEtCl (67.53%) seguida por AcOEtSs (46.46%) y AcOEtMr (43.46%). C. leptostachyus mostró un destacable efecto inhibitorio de la MPO (mieloperoxidasa) producida en el modelo de bolsa de aire (17.16% y 63.28% a dosis de 10 mg/kg y 50 mg/kg respectivamente). En el caso de F2AcOEtSs, esta especie no parece mostrar efecto inhibitorio de esta enzima. En el análisis de TNF-α algunos tratamientos mostraron un efecto muy cercano al de la indometacina (64.49%): de este modo, son destacables F2AcOEtSs (50 mg/Kg, 57.92%), F3AcOEtMr a (10 mg/kg (59.75%) y 50 mg/kg (57.19)). El análisis fitoquímico mostró variedad compuestos que incluye terpenoides, alcaloides y metabolitos fenólicos (taninos, flavonoides y fenilpropanoides). Estos últimos fueron corroborados mediante UHPLC. Toda la información recopilada perfila a dos subextractos como los más promisorios en función de las capacidades antirradicalaria (EtOHMr) y anti-inflamatoria (AcOEtCl) que se sustenta en el contenido fitoquímico y antecedentes etnobotánicos de los géneros a los que pertenecen. A partir de lo anterior, se puede inferir que las especies estudiadas tienen potencial farmacológico en el ámbito de las terapias antiinflamatorias alternativas, debido a la 22 variedad de su composición química y a su capacidad quimiopreventiva que guarda relación con el método de extracción empleado. Palabras Claves: Mollinedia racemosa, Siparuna sessiliflora, Croton leptostachyus, actividad antiinflamatoria, actividad antioxidanteThe aim of this work was to evaluate the antioxidant and anti-inflammatory potential of Mollinedia racemosa, Siparuna sessiliflora and Croton leptostachyus; whose genera are used in the treatment of the ailments associated with pain and inflammation and which are characterized by possessing secondary metabolites such as phenols and terpenoids mainly. The leaves of each specimen were dried at room temperature for 24 to 48 hours. Then, they were extracted with ethanol for 48 hours. The ethanolic extracts were concentrated at a temperature below 50 ° C, sub-extracts were obtained a liquid / solid partition of the dried extracts by with n-hexane and ethyl acetate and ethanol to thereby establish a polarity profile. The anti-radical activity of the sub-extracts from each plant was measured in vitro using the DPPH and ABTS tests as well as by the inhibition of nitric oxide. The modulating effect of inflammation was measured in vivo in ICR mice by acute phase tests (TPA induced ear edema) and subchronic (zymosan treated air pouch model); The biological matrices from each in vivo model were treated in order to obtain the protein extracts and then analyzed for parameters such as myeloperoxidase (MPO) and the tumor necrosis factor alpha (TNF-α) and interleukin 10 (IL-10) cytokines. Likewise, a phytochemical analysis was carried out in order to recognize the main secondary metabolites present in the species and later, taking into account the fractions with higher anti-inflammatory capacity, a UHPLC analysis was carried out in order to identify phenolic compounds that could be associated with their anti- inflammatory and antioxidant effect. The results obtained in the antiradical activity tests showed a response pattern that seems to be directly related to the phenolic content and the extractor solvent. In this way, the species with the highest antioxidant capacity in all the trials was Mollinedia racemosa (EtOHMr), followed by Croton leptostachyus (AcOEtCl) and finally Siparuna sessiliflora (EtOHSs). The results of the in vivo model of auricular edema showed a marked anti-inflammatory effect in the subextracts of ethyl acetate of the species studied in comparison with the ethanolic and hexane matrices. The most active sample after the indomethacin standard (85.69% inhibition) was AcOEtCl (67.53%) followed by AcOEtSs (46.46%) and AcOEtMr (43.46%). C. leptostachyus showed a remarkable inhibitory effect of MPO (myeloperoxidase) produced in the air pouch model (17.16% and 63.28% at doses of 10 mg / kg and 50 mg / kg respectively). In the case of F2AcOEtSs, this species does not seem to show an inhibitory effect of this enzyme. In the analysis of TNF-α some treatments showed an effect very close to that of indomethacin (64.49%): in this way, F2AcOEtSs (50 mg / Kg, 57.92%), F3AcOEtMr a (10 mg / kg (59.75% ) and 50 mg / kg (57.19)). The phytochemical analysis showed a variety of compounds including terpenoids, alkaloids and phenolic metabolites (tannins, flavonoids and phenylpropanoids). The latter were corroborated by UHPLC. All the collected information profiles two subextracts as the most promising in terms of antiradical (EtOHMr) and anti-inflammatory (AcOEtCl) capacities, which is based on the phytochemical content and ethnobotanical background of the genera to which they belong. From the above, it can be inferred that the species studied have a pharmacological potential in the field of alternative anti-inflammatory therapies, due to the variety of their chemical composition and their chemopreventive capacity that is related to the extraction method used. Keyworks: Mollinedia racemosa, Siparuna sessiliflora, Croton leptostachyus, antioxidant activity, anti-inflammatory activity.INTRODUCCIÓN 25 1. LA INFLAMACIÓN Y SUS IMPLICACIONES FISIOPATOLÓGICAS 27 1.1 MEDIADORES CELULARES Y BIOQUÍMICOS DE LA INFLAMACIÓN 27 1.1.1 La Inflamación y el rol de los Eicosanoides 29 1.1.2 Papel de los Radicales Libres en la Inflamación 31 1.1.3 Tratamiento Farmacológico de la Inflamación 35 1.1.4 Mecanismos de Defensa Antioxidante 40 1.1.5 Los Productos Naturales en la Quimioprevención de la Inflamación 40 1.1.5.1 Estudio de los Mecanismos Antioxidantes 43 1.2 POTENCIAL ANTIINFLAMATORIO DE LA FLORA COLOMBIANA 45 1.2.1 El Género Mollinedia (Monimiaceae) 46 1.2.1.1 Composición Química 47 1.2.1.2 Mollinedia Racemosa 48 1.2.2 Género Siparuna 49 1.2.2.1 Composición Química 49 1.2.2.2 Siparuna Sessiliflora 51 1.2.3 Género Croton 53 1.2.3.1 Composición Química 53 1.2.3.2 Croton Leptostachyus 55 2. JUSTIFICACIÓN 57 3. OBJETIVOS 60 3.1 OBJETIVO GENERAL 60 3.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS 60 4. METODOLOGÍA 61 4.1 RECOLECCIÓN DEL MATERIAL VEGETAL 61 4.2 ADECUACIÓN DEL MATERIAL VEGETAL Y PREPARACIÓN DE EXTRACTOS 61 4.3 CARACTERIZACIÓN FITOQUÍMICA 62 4.3.1 Tamizaje Fitoquímico Preliminar 62 4.3.2 Separación Cromatográfica 62 4.3.2.1 Análisis por UHPLC 63 4.4 EVALUACIÓN DE LA CAPACIDAD ANTIRRADICALARIA IN VITRO 64 4.4.1 Capacidad Estabilizante del Radical DPPH 64 4.4.2 Capacidad Estabilizante Del Catión Radical ABTS 65 4.4.3 Actividad Antinitrosativa 65 4.5 EVALUACIÓN DE LA CAPACIDAD ANTIINFLAMATORIA IN VIVO MEDIANTE INDUCCIÓN DE EDEMA AURICULAR EN RATÓN POR TPA 66 4.5.1 Animales de Experimentación 66 4.5.2 Edema Auricular En Ratón 67 4.5.3. Cuantificación de la Actividad Inhibitoria de la Mieloperoxidasa (MPO) 67 4.5.3.1. Preparación de Homogenados De Orejas De Ratón Y Obtención De Extracto Proteico 68 4.5.4 Fraccionamiento Dirigido y Evaluación de la Capacidad Antiinflamatoria en Modelo de Inflamación Auricular Inducida por tpa y en un Modelo de Bolsa de Aire Con Zimosano 68 4.5.4.1 Fraccionamiento de subextractos M. racemosa, S. sessiliflora y C 68 4.6 ANÁLISIS ESTADÍSTICO 70 5. RESULTADOS 72 5.1 ACTIVIDAD ANTIRRADICALARIA IN VITRO 72 5.2 ACTIVIDAD ANTIINFLAMATORIA IN VIVO 74 5.2.1 Inhibición del Edema Auricular Inducido por TPA 74 5.2.2 Ensayo de Actividad Antiinflamatoria En Un Modelo De Inflamación Inducida En Bolsa De Aire Por Zimosano 79 5.3 ANÁLISIS QUÍMICO 82 5.3.1 Tamizaje Fitoquímico 82 5.4 COMPOSICIÓN QUÍMICA DE LAS FRACCIONES EVALUADAS 83 5.4.1 Tamizaje Fitoquímico de las Fracciones 84 5.4.2 Contenido Fenólico de Fracciones de M. Racemosa, S 85 5.4.3 Análisis por UPLC de la Fracciones 86 6. DISCUSIÓN 87 6.1 CROTON LEPTOSTACHYUS 87 6.2 SIPARUNA SESSILIFLORA 93 6.3 MOLLINEDIA RACEMOSA 100 7. CONCLUSIONES 107 PERSPECTIVAS 108 REFERENCIAS 109application/pdfSánchez Peralta, Wilmer Fernando. Potencial antioxidante y modulador de la inflamación de Mollinedia Racemosa, Siparuna Sessiliflora y Croton Leptostachyus. Ibagué : Universidad del Tolima, 2018.https://repository.ut.edu.co/handle/001/2766spaIbagué : Universidad del Tolima, 2018(CO COL 170)Atribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 Internacional (CC BY-NC-ND 4.0)https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/legalcodehttp://purl.org/coar/access_right/c_16ecMollinedia racemosaSiparuna sessilifloraCroton leptostachyusFacultad de Ciencias - Doctorado en Ciencias BiomédicasMéndez Arteaga, Jonh Jairo - DirectorMurillo Arango, Walter - CodirectorDoctoradoDoctor en Ciencias BiomédicasPotencial antioxidante y modulador de la inflamación de Mollinedia Racemosa, Siparuna Sessiliflora y Croton LeptostachyusTrabajo de grado - DoctoradoTextinfo:eu-repo/semantics/doctoralThesishttp://purl.org/coar/version/c_71e4c1898caa6e32http://purl.org/coar/resource_type/c_db06PublicationORIGINALT 0958 003 CD6091.pdfT 0958 003 CD6091.pdfapplication/pdf5041270https://repository.ut.edu.co/bitstreams/e16d2e66-6ea1-47bd-b6c4-38a09a9d49c1/downloadc19d17d1e2c85050ee6eabb9865d7f15MD51CC-LICENSElicense_urllicense_urltext/plain; charset=utf-849https://repository.ut.edu.co/bitstreams/a3021115-9f5e-471a-9ce2-53399dbf048f/download4afdbb8c545fd630ea7db775da747b2fMD52license_textlicense_texttext/html; charset=utf-80https://repository.ut.edu.co/bitstreams/12e9ce7b-bd02-4093-8515-34f7b7b1cdba/downloadd41d8cd98f00b204e9800998ecf8427eMD53license_rdflicense_rdfapplication/rdf+xml; charset=utf-80https://repository.ut.edu.co/bitstreams/4cc2bed7-1c8a-4c76-83c3-959e6137f40c/downloadd41d8cd98f00b204e9800998ecf8427eMD54LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-8227https://repository.ut.edu.co/bitstreams/642fa1ae-dd66-4843-9cf5-c2fb063a0b92/download127f1942dfbe07f43e8227b660620c70MD55TEXTT 0958 003 CD6091.pdf.txtT 0958 003 CD6091.pdf.txtExtracted texttext/plain101836https://repository.ut.edu.co/bitstreams/726a3283-f936-4233-8f78-a80c6dc0b31e/downloadfb1e9cc9044348dd8016612889a974efMD56THUMBNAILT 0958 003 CD6091.pdf.jpgT 0958 003 CD6091.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg8013https://repository.ut.edu.co/bitstreams/5516320a-b0fd-4dd9-bdcf-056ba42e4b8e/downloadb0ffac74c1cbeba486f5d515d1a40081MD57001/2766oai:repository.ut.edu.co:001/27662023-03-24 17:47:02.288https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/legalcodeAtribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 Internacional (CC BY-NC-ND 4.0)https://repository.ut.edu.coRepositorio Institucional - Universidad del Tolimasoporte@metabiblioteca.comQ3JlYXRpdmUgQ29tbW9ucyAtIExpY2VuY2lhIGRlIFJlY29ub2NpbWllbnRvIC0gTm9Db21lcmNpYWwgKGJ5LW5jKSA6IFNlIHBlcm1pdGUgbGEgZ2VuZXJhY2nDs24gZGUgb2JyYXMgZGVyaXZhZGFzIHNpZW1wcmUgcXVlIG5vIHNlIGhhZ2EgdW4gdXNvIGNvbWVyY2lhbC4gVGFtcG9jbyBzZSBwdWVkZSB1dGlsaXphciBsYSBvYnJhIG9yaWdpbmFsIGNvbiBmaW5hbGlkYWRlcyBjb21lcmNpYWxlcy4= |