Aislamiento y caracterización molecular y biológica decepas nativas de Bacillus thuringiensis PARA EL CONTROL DETuta absoluta (Meyrick: Lepidoptera: Gelechiidae), insecto plaga del tomate(Lycopersicon esculentum) (2010)
Se recolectaron 28 muestras de suelo en 14 municipios en Colombia. Se aislaron bacilos esporulados, que se caracterizaron microscópicamente cuantificando cristales. Los aislamientos positivos para cristales se sometie-ron a una caracterización bioquímica por medio de electroforesis de proteínas totales (SDS-PAGE). Las cepas positivas para la presencia de genes cry1 fueron sometidas a dos rondas de M-PCR con 2 mezclas de oligonu-cleótidos, reconociendo 6 genes específicos. Se aislaron 99 bacilos esporulados nativos que presentaron cristales con formas amorfas, bipiramidal, cuadradas, redondas y triangulares. Se observaron bacilos con 1, 2, 3 y 4 for-mas de cristal, estableciéndose 18 perfiles diferentes. Por SDS, se evidenciaron bandas de proteínas de 28 hasta 150 kDA clasificándose en 7 por su posible actividad biológica, lo que originó 28 perfiles diferentes. 35 bacilos esporulados presentaron genes cry1, y en estos, se detectaron por M-PCR los genes cry1Aa, cry1Ab, cry1Ac, cry1B, cry1C y cry1D en el 76, 26, 21, 35, 32, y 8,8% respectivamente. De acuerdo a estas caracterizaciones se seleccionaron 10 aislamientos nativos como promisorios para el control de Tuta absoluta y se retaron contra larvas de 2do instar de este insecto plaga. Los bacilos nativos ZBUJTL39 y ZCUJTL11 presentaron una mejor actividad biológica que la cepa de referencia Bt var kurstaki HD1. El bacilo nativo ZCUJTL11 presentó una CL 50 de 2,4 µg/ml (P<0,05). La metodología estandarizada selecciona las cepas de acuerdo a su actividad bio-lógica potencial, como un paso previo a los ensayos biológicos, Este resultado es promisorio para posteriores investigaciones en ingeniería genética de tomate, para la obtención de cultivares autorresistentes a Tuta absoluta. ABSTRACT Were collected 28 soil samples in 14 municipalities in Colombia. Sporulated bacillus were isolated, characteri-zed microscopically by quantifying crystals. Isolates positive for crystals were subjected to biochemical charac-terization by electrophoresis of total proteins (SDS-PAGE). The strains positive for the presence of cry1 genes were subjected to two rounds of M-PCR with two oligonucleotide mixtures, recognizing specific genes 6. 99 bacillus were isolated forms filed with amorphous crystals, bipiramidal, square, round and triangular. Bacillus were observed with 1, 2, 3 and 4 forms of glass, with 18 different profiles. For SDS, showed protein bands of 28 to 150 kDa in 7 classified by their potential biological activity, resulting in 28 different profiles. 35 sporulated ba-cillus showed cry1 genes, and these were detected by M-PCR gene cry1Aa, cry1Ab, cry1Ac, cry1B, cry1C and cry1D in 76, 26, 21, 35, 32, and 8.8% respectively. According to these characterizations 10 isolates were selected as promising for the control of Tuta absoluta and challenged against the 2nd instar larvae of this insect pest. Strain ZBUJTL39 and introduced ZCUJTL11 better biological activity that the reference strain Bt. var kurstaki HD1. strain ZCUJTL11 presented a LC 50 of 2.4 mg / ml (P <0.05). The methodology selected strains according to their potential biological activity, as a preliminary step to biological tests, this result is promising for further research into genetic engineering of tomato cultivars to obtain resistant to Tuta absoluta.