Estandarización de la prueba de amplificación isotérmica mediada por bucles (LAMP) para la detección molecular del virus del chikungunya

Las enfermedades transmitidas por vectores (ETVs) afectan a millones de personas a nivel mundial, y se estima que por eventos migratorios y cambio climático la situación epidemiológica podría empeorar. Aedes aegypti es un mosquito capaz de transmitir virus tales como, Dengue, Mayaro, Zika y Chikungunya, generando impactos significativos en salud pública. Estas enfermedades generan un espectro clínico similar, lo que complica su rápido diagnóstico por criterio clínico. Por su parte, estas infecciones pueden ocasionar brotes epidémicos que afectan a comunidades enteras, lo que conlleva a la sobrecarga de los sistemas de salud locales, agotando sus recursos y dificultando la respuesta a otras emergencias médicas. Este impacto se hace evidente al observar que, en el período comprendido entre el 1 de enero y el 4 de marzo del 2023, se reportaron 113,447 casos de chikungunya en América latina, con un total de 51 fallecidos, este número representa un aumento cuatro veces mayor en comparación con el mismo periodo de 2022 [1]. El diagnóstico molecular y definitivo del virus del chikungunya (VCHIK) usualmente se lleva a cabo por qRT-PCR, una metodología que a pesar de su sensibilidad y especificidad es impráctica en centros de salud primarios, y está centralizado al Instituto Nacional de Salud. En este trabajo nos propusimos estandarizar una metodología que fuera capaz de detectar la presencia del virus del VCHIK de manera rápida, sencilla, precisa y económica. Para ello, se optimizó la técnica de amplificación isotérmica mediada por bucles con transcripción reversa (RT- LAMP) para identificar al VCHIK mediante una reacción colorimétrica que vira de rosado a amarillo en presencia del genoma viral. En una etapa inicial de validación se evaluaron varias diluciones de ARN del VCHIK que fueron generadas in vitro, con el objetivo de determinar el límite de detección de la prueba. Adicionalmente, como una forma de validación se simuló una infección adicionando diferentes diluciones del ARN del VCHIK sintetizado in vitro en una muestra de sangre total extraída de un paciente. Luego de contar con la sangre infectada se realizó una extracción del mismo ARN de VCHIK combinado con esta; a partir de esto se determinó el límite de detección de la prueba RT-LAMP reconociendo que esta es efectiva hasta concentraciones de 0,5 atogramo (ag) en un tiempo de 30 minutos. El experimento demostró que es posible identificar el virus en un entorno clínico real. Como controles en cada una de las pruebas realizadas se incluyó ARN del virus del dengue para estimar la especificidad de la prueba, se observó que en ningún caso la prueba RT-LAMP resultó positiva para dengue. A pesar de ser un estudio preliminar y en curso, este trabajo muestra el gran potencial de la prueba RT-LAMP para la identificación molecular del virus en individuos febriles con diagnóstico presuntivo de VCHIK, lo que convierte a esta prueba en una valiosa herramienta para la vigilancia virológica de este virus, especialmente en áreas con recursos tecnológicos limitados y una infraestructura de salud insuficiente.

• Autores: Bermúdez Varela, Jhonairys Adriana; Cuello Coba, Fabiana Danitza; Caballero Bolaños, Jesús Gabriel
• Fecha de publicación: 2023
• Institución: Universidad Simón Bolívar
• Repositorio: Repositorio Digital USB
• Idioma: spa
• OAI Identifier: oai:bonga.unisimon.edu.co:20.500.12442/13458
• Acceso en línea: https://hdl.handle.net/20.500.12442/13458
• Palabra clave: Diagnóstico molecular; Arbovirus; Virus del Chikungunya (VCHIK); Prueba isotérmica; RT- LAMP; Molecular diagnosis; Arbovirus; Chikungunya Virus (CHIKV); Isothermal test; RT-LAMP
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