Síntesis de columna de sílica estructurada químicamente con níquel para la purificación de proteínas con cola de poli- histidina.

La purificación de proteínas actualmente demanda mucho interés en cuanto a su utilización para el diagnóstico de enfermedades y de uso terapéutico. Estos son capaces de resolver muchas de las necesidades científicas requeridas para la implementación de alternativas biotecnológicas y moleculares las cuales cumplen con las adaptaciones experimentales que promueven técnicas eficientes y de costos considerables, teniendo la facilidad de suplir con los resultados deseados. Los métodos para la purificación de proteína pueden considerarse altamente complejos de acuerdo a su utilización y sus requerimientos económicos, por lo que en el siguiente trabajo se empleó una alternativa estructurada químicamente a partir de la sílica cargada con Ni (II) con la posibilidad de retener a la proteína GFP a través de su cola de poli histidina suspendida en una matriz cromatográfica que busca obtener o sustituir otros métodos que requieran más gastos económicos y carezcan de ahorro de tiempo en cuanto a los resultados. Para la preparación química de la sílica se utilizaron protocolos diseñados en base a información científica y a la experiencia aportada en el centro de investigación de la Universidad Simón Bolívar Adaptia. Así mismo se puso a prueba el comportamiento de la sílica basado en la experimentación de usos de reactivos y métodos necesarios para la preparación de la sílica a base de la utilización de APS (aminopropilsilano), determinado como el proceso de silanización, fundamental para iniciar con el montaje de la estructura química con la formación de grupos aminos que a su vez son necesarios para adherir el EDTA, el cual, ayudará a desarrollar y fortalecer la superficie química a la que se desea pegar el níquel. Para la unión del EDTA a la sílica se emplearon dos mecanismos con la capacidad de lograr que a la sílica silanizada se le unieran diversos EDTA, tales como; Método por reflujo y por microondas. Además, de incorporar el sulfato de níquel y el cloruro de níquel para conseguir la adherencia de este a la matriz cromatográfica. Por otro lado, la proteína GFP requerida para probar la columna cromatográfica compuesta de sílica contaba con una cola de poli histidina, obtenida y expresada por Escherichia coli BL21, en la que solo fue necesario aplicar un protocolo de inducción con IPTG y lisis bacteriana debido a que estas ya venían transformadas con el plásmido pET28 para la obtención de GFP. Los resultados del siguiente trabajo demostraron que para la estructuración química de la sílica los protocolos más eficientes provienen del protocolo de Adherencia del EDTA a través de microondas, lo cual, fue de gran ventaja debido a que necesita menor tiempo para elaborar el proceso y es una técnica más práctica. Así mismo, la utilización del sulfato de níquel demostró ser más preciso en cuanto a la retención de GFP en la columna. Por otro lado, en el proceso final de la obtención de GFP pura se suministraron diferentes gradientes de concentración de imidazol durante la purificación, en la cual, se logró desprender a GFP de la columna y tener la proteína purificada. Por otra parte, se concluyó que es importante explorar diversas alternativas capaces de suplir y reemplazar métodos que demandan elevados costos y complejidad para su obtención, teniendo en cuenta que el fundamento y experimentación sean eficientes y recursivos

• Autores: Medina Santos, Hanys Saray
• Fecha de publicación: 2023
• Institución: Universidad Simón Bolívar
• Repositorio: Repositorio Digital USB
• Idioma: spa
• OAI Identifier: oai:bonga.unisimon.edu.co:20.500.12442/13486
• Acceso en línea: https://hdl.handle.net/20.500.12442/13486
• Palabra clave: Cromatografía; Proteína; Biotecnología; E. coli; Economía; Columna; Purificación; Chromatography; Protein; Biotechnology; E. coli; Economy; Column; Purification
• Rights: restrictedAccess
• License: Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional