Estandarización cualitativa de un protocolo de sonicación para la extracción de la enzima Pfu polimerasa en Escherichia Coli BL21-DE3 y su potencial uso en la investigación de nuevos fármacos contra la enfermedad de Alzheimer

En este proyecto se desarrolló una estandarización de un protocolo de sonicación para la extracción de la enzima Pfu polimerasa producida en la cepa de Escherichia coli BL21-DE3, con el objetivo de que esta enzima pueda ser posteriormente utilizada en un proyecto de desarrollo de una biofábrica prod...

Full description

Autores:
Galindo Villanueva, Dahiana
Tipo de recurso:
Trabajo de grado de pregrado
Fecha de publicación:
2023
Institución:
Universidad de Ibagué
Repositorio:
Repositorio Universidad de Ibagué
Idioma:
spa
OAI Identifier:
oai:repositorio.unibague.edu.co:20.500.12313/3857
Acceso en línea:
https://hdl.handle.net/20.500.12313/3857
Palabra clave:
Alzheimer - Farmácos
Escherichia coli
Pfu
Enfermedad de Alzheimer
Sonicación
lisis
SDS-PAGE
Escherichia coli
Pfu
Alzheimer's disease
Sonication
lysis
SDS-PAGE
Rights
openAccess
License
http://purl.org/coar/access_right/c_abf2
Description
Summary:En este proyecto se desarrolló una estandarización de un protocolo de sonicación para la extracción de la enzima Pfu polimerasa producida en la cepa de Escherichia coli BL21-DE3, con el objetivo de que esta enzima pueda ser posteriormente utilizada en un proyecto de desarrollo de una biofábrica productora de galantamina para el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer. Para ello se generaron cultivos de bacterias E. coli BL21 (DE3) transformadas con el plásmido pET 16B-Pfu que posteriormente fueron inducidas mediante IPTG 1 mM. La expresión de la proteína fue verificada a través de electroforesis SDS-PAGE. La estandarización de extracción de proteínas se realizó a través de un proceso por sonicación en el que se evaluaron diferentes amplitudes de onda: 20%, 30%, 45%, 60% y 70% y resuspendiendo las células en buffer PBS. Se obtuvo mayor cantidad de Pfu, a partir del sobrenadante del cultivo inducido con IPTG y extraída con sonicación a un 45% y a un 70% de amplitud de onda. Se realizó también un control de viabilidad de las bacterias como indicador de la eficiencia de sonicación, el cual indicó que, bajo todas las amplitudes evaluadas, estas no se lisaban completamente. Con base en análisis de literatura se sugiere complementar el protocolo haciendo uso de un buffer específico para lisis con detergentes y o enzimas que contribuyan a la eficiente extracción de proteínas durante el proceso de sonicación, y aumentar la duración de los pulsos a las condiciones de amplitud encontradas como mejores.