Diseño preliminar y construcción de un riboswitch ON
En este proyecto se realizó el diseño, construcción y primera evaluación de un riboswitch ON. Para esto se estudiaron las funciones y los mecanismos de diferentes biobricks para su conformación y se incorporaron dos biomarcadores o genes (tetA y GFPuv) para la selección posterior del aptámero por me...
- Autores:
-
Sarmiento Sánchez, Andrea Teresa
- Tipo de recurso:
- Trabajo de grado de pregrado
- Fecha de publicación:
- 2019
- Institución:
- Universidad de los Andes
- Repositorio:
- Séneca: repositorio Uniandes
- Idioma:
- spa
- OAI Identifier:
- oai:repositorio.uniandes.edu.co:1992/45355
- Acceso en línea:
- http://hdl.handle.net/1992/45355
- Palabra clave:
- ARN mensajero
Riboswitches
Código genético
Biología sintética
Ingeniería
- Rights
- openAccess
- License
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En este proyecto se realizó el diseño, construcción y primera evaluación de un riboswitch ON. Para esto se estudiaron las funciones y los mecanismos de diferentes biobricks para su conformación y se incorporaron dos biomarcadores o genes (tetA y GFPuv) para la selección posterior del aptámero por medio de un SELEX (Systematic evolution of ligands by exponential enrichment) "in vivo". El diseño resultante fue sintetizado y clonado dentro de un vector pCC1 que se introdujo por transformación de electrochoque a una cepa de Escherichia coli DH5{alfa}. Como resultado se obtuvo que las bacterias transformadas si generaron resistencia a la tetraciclina gracias a la correcta expresión del gen tetA; sin embargo, no se da la fluorescencia esperada de la inserción del gen GFPuv. La razón de esto puede ser el linker que une ambos codones e impide una adecuada traducción de la secuencia. Por otro lado, se observó que al aumentar la concentración del inductor IPTG (isopropil-{beta]-D-1-tiogalactopiranósido) se aumentaba la velocidad de crecimiento de los inóculos y aumenta la resistencia en comparación con una concentración muy baja del mismo. |
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