Diseño preliminar y construcción de un riboswitch ON

En este proyecto se realizó el diseño, construcción y primera evaluación de un riboswitch ON. Para esto se estudiaron las funciones y los mecanismos de diferentes biobricks para su conformación y se incorporaron dos biomarcadores o genes (tetA y GFPuv) para la selección posterior del aptámero por medio de un SELEX (Systematic evolution of ligands by exponential enrichment) "in vivo". El diseño resultante fue sintetizado y clonado dentro de un vector pCC1 que se introdujo por transformación de electrochoque a una cepa de Escherichia coli DH5{alfa}. Como resultado se obtuvo que las bacterias transformadas si generaron resistencia a la tetraciclina gracias a la correcta expresión del gen tetA; sin embargo, no se da la fluorescencia esperada de la inserción del gen GFPuv. La razón de esto puede ser el linker que une ambos codones e impide una adecuada traducción de la secuencia. Por otro lado, se observó que al aumentar la concentración del inductor IPTG (isopropil-{beta]-D-1-tiogalactopiranósido) se aumentaba la velocidad de crecimiento de los inóculos y aumenta la resistencia en comparación con una concentración muy baja del mismo.

• Autores: Sarmiento Sánchez, Andrea Teresa
• Tipo de recurso: Trabajo de grado de pregrado
• Fecha de publicación: 2019
• Institución: Universidad de los Andes
• Repositorio: Séneca: repositorio Uniandes
• Idioma: spa
• OAI Identifier: oai:repositorio.uniandes.edu.co:1992/45355
• Acceso en línea: http://hdl.handle.net/1992/45355
• Palabra clave: ARN mensajero; Riboswitches; Código genético; Biología sintética; Ingeniería
• Rights: openAccess
• License: http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/