Análisis de variantes de interés en salud publica de SARS-CoV-2 en Colombia

La pandemia actualmente tiene una preocupación especial sobre las variantes presentes del virus causante del COVID-19, debido a su afectación en el manejo de esta emergencia, las VOCs existentes del SARS-CoV-2 requieren un esfuerzo importante y rápido de herramientas de vigilancia genómica. El objet...

Full description

Autores:
Palacio Ardila, Ana María
Tipo de recurso:
Trabajo de grado de pregrado
Fecha de publicación:
2021
Institución:
Universidad de los Andes
Repositorio:
Séneca: repositorio Uniandes
Idioma:
spa
OAI Identifier:
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Acceso en línea:
http://hdl.handle.net/1992/55079
Palabra clave:
Linajes
COVID-19
Secuenciación
Alfa
Gamma
Biología
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description La pandemia actualmente tiene una preocupación especial sobre las variantes presentes del virus causante del COVID-19, debido a su afectación en el manejo de esta emergencia, las VOCs existentes del SARS-CoV-2 requieren un esfuerzo importante y rápido de herramientas de vigilancia genómica. El objetivo de este trabajo fue identificar los linaje. Materiales y métodos: Un total de 376 muestras de ARN de pacientes con diagnóstico positivo para COVID19 fueron elegidas, bajo los criterios de selección del Instituto Nacional de Salud de Colombia para la vigilancia genómica en el país. La presuntiva identificación de linajes se realizó mediante la comparación de dos protocolos de biología molecular. El primero consistió en una RT-qPCR "in house" usando tres sondas Taqman para la identificación de dos mutaciones de interés presentes en las variantes de preocupación (VOCs) alfa, beta y gamma de SARS-CoV-2. El segundo protocolo consistió en una RT-PCR "in house", que evalúa un total de siete mutaciones para las mismas variantes. Las muestras que presuntivamente correspondían a un linaje de interés en salud publica fueron confirmadas con secuenciación de nueva generación usando la plataforma Ion Torrent S5. Resultados: Los resultados del primer protocolo (RT-qPCR) mostraron que 43 muestras correspondían a posibles VOCs. Para el segundo, protocolo (RT-PCR) 16 muestras fueron evaluadas, obteniendo diez muestras como posibles VOCs según la interpretación de los resultados. La confirmación se realizó usando secuenciación de nueva generación para el protocolo RT-qPCR, donde se escogieron 32 muestras; las cuales permitieron identificar los linajes alfa (B.1.1.7; n=6), gamma (P.1; n=5), iota (B.1.526; n=1), A.2.5 (n=1), B.1.625 (n=8), B.1.621(n=3), B.1.1.519 (n=1), B.1.111(n=3), B.1.1.348 (n=4). Conclusión: La implementación de protocolos de tamizaje masivo para la identificación de linajes de preocupación puede ser útil para la optimización de los recursos para análisis genómicos.
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Materiales y métodos: Un total de 376 muestras de ARN de pacientes con diagnóstico positivo para COVID19 fueron elegidas, bajo los criterios de selección del Instituto Nacional de Salud de Colombia para la vigilancia genómica en el país. La presuntiva identificación de linajes se realizó mediante la comparación de dos protocolos de biología molecular. El primero consistió en una RT-qPCR "in house" usando tres sondas Taqman para la identificación de dos mutaciones de interés presentes en las variantes de preocupación (VOCs) alfa, beta y gamma de SARS-CoV-2. El segundo protocolo consistió en una RT-PCR "in house", que evalúa un total de siete mutaciones para las mismas variantes. Las muestras que presuntivamente correspondían a un linaje de interés en salud publica fueron confirmadas con secuenciación de nueva generación usando la plataforma Ion Torrent S5. Resultados: Los resultados del primer protocolo (RT-qPCR) mostraron que 43 muestras correspondían a posibles VOCs. Para el segundo, protocolo (RT-PCR) 16 muestras fueron evaluadas, obteniendo diez muestras como posibles VOCs según la interpretación de los resultados. La confirmación se realizó usando secuenciación de nueva generación para el protocolo RT-qPCR, donde se escogieron 32 muestras; las cuales permitieron identificar los linajes alfa (B.1.1.7; n=6), gamma (P.1; n=5), iota (B.1.526; n=1), A.2.5 (n=1), B.1.625 (n=8), B.1.621(n=3), B.1.1.519 (n=1), B.1.111(n=3), B.1.1.348 (n=4). Conclusión: La implementación de protocolos de tamizaje masivo para la identificación de linajes de preocupación puede ser útil para la optimización de los recursos para análisis genómicos.The pandemic currently has a special concern on the present variants of the COVID-19 causative virus, due to its affectation in the management of this emergency, the existing SARS-CoV-2 VOCs require a major and rapid effort of genomic surveillance tools. The objective of this work was to identify the predominant SARS-CoV-2 lineages in a group of samples. Materials and methods: A total of 376 RNA samples from patients with positive diagnosis for COVID19 were chosen, under the selection criteria of the National Institute of Health of Colombia for genomic surveillance in the country. Presumptive lineage identification was performed by comparing two molecular biology protocols. The first consisted of an in house RT-qPCR using three Taqman probes for the identification of two mutations of interest, present in the alpha, beta and gamma variants of concern (VOCs) of SARS-CoV-2. The second protocol consisted of an in house RT-PCR, evaluating a total of seven mutations for the same variants. Samples that presumptively corresponded to a lineage of public health interest were confirmed with next-generation sequencing using the Ion Torrent S5 platform. Results: The results of the first protocol (RT-qPCR) showed that 43 samples corresponded to possible VOCs. For the second protocol (RT-PCR) 16 samples were evaluated, obtaining ten samples as possible VOCs according to the interpretation of the results. Confirmation was performed using next-generation sequencing for the RT-qPCR protocol, where 32 samples were chosen, which allowed the identification of the alpha lineages (B.1 .1.7; n=6), gamma (P.1; n=5), iota (B.1.526; n=1), A.2.5 (n=1), B.1.625 (n=8), B.1.621(n=3), B.1.1.519 (n=1), B.1.111(n=3), B.1.1.348 (n=4). Conclusion: Implementation of mass screening protocols for identification of lineages of concern may be useful for optimization of resources for genomic analysis.BiólogoPregrado25 páginasapplication/pdfspaUniversidad de los AndesBiologíaFacultad de CienciasDepartamento de Ciencias BiológicasAnálisis de variantes de interés en salud publica de SARS-CoV-2 en ColombiaTrabajo de grado - Pregradoinfo:eu-repo/semantics/bachelorThesisinfo:eu-repo/semantics/acceptedVersionhttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1fTexthttp://purl.org/redcol/resource_type/TPLinajesCOVID-19SecuenciaciónAlfaGammaBiología201426456Publicationhttps://scholar.google.es/citations?user=RRatlj4AAAAJvirtual::6226-10000-0001-8089-4056virtual::6226-1https://scienti.minciencias.gov.co/cvlac/visualizador/generarCurriculoCv.do?cod_rh=0000211010virtual::6226-19026322f-770f-4c0a-b50f-78c4a32b9f06virtual::6226-137e9ea61-5849-47a8-9d95-7a80bfa78a54virtual::6227-19026322f-770f-4c0a-b50f-78c4a32b9f06virtual::6226-137e9ea61-5849-47a8-9d95-7a80bfa78a54virtual::6227-1TEXT25375.pdf.txt25375.pdf.txtExtracted texttext/plain39869https://repositorio.uniandes.edu.co/bitstreams/ff715eb4-bc8c-4bc8-8ca1-f749e5adf26e/download6ba5fa594a2028e54f9222b53453c31bMD52ORIGINAL25375.pdfapplication/pdf470000https://repositorio.uniandes.edu.co/bitstreams/e66895c2-c2ef-4fe8-b4dc-aea98b88732a/download06d07d6fd747cc001e4fc068be3fd5e9MD51THUMBNAIL25375.pdf.jpg25375.pdf.jpgIM Thumbnailimage/jpeg21626https://repositorio.uniandes.edu.co/bitstreams/55e85999-974c-4bf7-9a25-973e0a1a8d27/download195b150fa3e3485a11ea4732e79a6e86MD531992/55079oai:repositorio.uniandes.edu.co:1992/550792024-03-13 13:07:59.928http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/open.accesshttps://repositorio.uniandes.edu.coRepositorio institucional Sénecaadminrepositorio@uniandes.edu.co