Chimeras: an alternative for studying zebrafish pronephric tubule development in vivo.
El desarrollo renal consta de tres estadios: pronefros, mesonefros, y metanefros. En el ámbito académico, el pronefros llama especial atención debido a su simplicidad, la cual es conveniente para estudios renales en etapas tempranas. En particular, el pez cebra ha sido postulado como un modelo anima...
- Autores:
-
Bacca González, Luisa Fernanda
- Tipo de recurso:
- Trabajo de grado de pregrado
- Fecha de publicación:
- 2022
- Institución:
- Universidad de los Andes
- Repositorio:
- Séneca: repositorio Uniandes
- Idioma:
- eng
- OAI Identifier:
- oai:repositorio.uniandes.edu.co:1992/55393
- Acceso en línea:
- http://hdl.handle.net/1992/55393
- Palabra clave:
- Microinyección
Transgénicos
Transferencia de blastómeros
Peces cebra
Pronefros
Biología
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El desarrollo renal consta de tres estadios: pronefros, mesonefros, y metanefros. En el ámbito académico, el pronefros llama especial atención debido a su simplicidad, la cual es conveniente para estudios renales en etapas tempranas. En particular, el pez cebra ha sido postulado como un modelo animal para estudiar las nefronas, debido a su similitud estructural con mamíferos. Sin embargo, hay insuficiente información acerca de cómo el pronefros de este animal se forma y adquiere su funcionalidad. Estudios en esta área han usado técnicas como transgénicos, hibridaciones in situ, y morfolinos. Sin embargo, raramente metodologías como quimeras, fotoconversión Kaede, o zebrabow. Por tal motivo, nosotros evaluamos y estandarizamos el uso de quimeras para estudiar el desarrollo del túbulo pronéfrico del pez cebra. Para ello, transferimos blastómeros transgénicos (Beta-actina) a individuos silvestres para crear quimeras pronéfricas de pez cebra. La estandarización del proceso señaló que el mejor estadio para realizar la extracción celular era entre 3.5 a 4 hdf. Asimismo, indicó que parámetros como el diámetro de la aguja, y la velocidad de inyección/extracción eran cruciales para la supervivencia. Nuestros principales blancos fueron los destinos ectodermales (48%), seguidos de los somíticos (30%), notocordales (12%), y del mesodermo intermedio (10%). Las células transferidas que contribuían a los túbulos pronéfricos formaban epitelios con sus vecinas silvestres y transgénicas. Lo anterior demuestra la capacidad de estas células para adaptar su morfología y función dependiendo de las señales que reciben. Finalmente, concluimos que inyectar células donde los progenitores renales residen posee mayor dificultad que para otras estructuras como el tubo neural, epitelio dermal, y somitas. No obstante, es lograble y su uso debe ser propiciado, dado que es una metodología que permitiría responder muchas más preguntas en el área celular y del desarrollo. |
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Sin embargo, hay insuficiente información acerca de cómo el pronefros de este animal se forma y adquiere su funcionalidad. Estudios en esta área han usado técnicas como transgénicos, hibridaciones in situ, y morfolinos. Sin embargo, raramente metodologías como quimeras, fotoconversión Kaede, o zebrabow. Por tal motivo, nosotros evaluamos y estandarizamos el uso de quimeras para estudiar el desarrollo del túbulo pronéfrico del pez cebra. Para ello, transferimos blastómeros transgénicos (Beta-actina) a individuos silvestres para crear quimeras pronéfricas de pez cebra. La estandarización del proceso señaló que el mejor estadio para realizar la extracción celular era entre 3.5 a 4 hdf. Asimismo, indicó que parámetros como el diámetro de la aguja, y la velocidad de inyección/extracción eran cruciales para la supervivencia. Nuestros principales blancos fueron los destinos ectodermales (48%), seguidos de los somíticos (30%), notocordales (12%), y del mesodermo intermedio (10%). Las células transferidas que contribuían a los túbulos pronéfricos formaban epitelios con sus vecinas silvestres y transgénicas. Lo anterior demuestra la capacidad de estas células para adaptar su morfología y función dependiendo de las señales que reciben. Finalmente, concluimos que inyectar células donde los progenitores renales residen posee mayor dificultad que para otras estructuras como el tubo neural, epitelio dermal, y somitas. No obstante, es lograble y su uso debe ser propiciado, dado que es una metodología que permitiría responder muchas más preguntas en el área celular y del desarrollo.Kidney development goes through three types of structures: pronephros, mesonephros, and metanephros. From those, the pronephros draws special attention due to its simplicity, which is attractive for early-stage kidney studies. In particular, zebrafish have been proposed as an animal model to study nephrons due to their structural simplicity and overall similarity with mammals. Nonetheless, there is insufficient information about how the zebrafish pronephros forms and acquires functionality. Studies in this area have used techniques such as transgenics, in situ hybridization, and morpholinos. However, very rarely, methodologies such as chimeras, Kaede photoconversion, or ZebraBow are applied. For that reason, we evaluated and standardized the use of chimeras to study the development of the zebrafish pronephric tubule. To achieve this, Beta-actin transgenic blastomeres were transferred to wild-type embryos to create pronephric zebrafish chimeras. The standardization process showed that the best stage to perform the cell extraction was between 3.5 and 4 hpf; also, it indicated that parameters such as needle diameter and injection/extraction speed were crucial for embryo survival. Transferred blastomeres mainly adopted ectodermal fates (48%), followed by somitic (30%), notochordal (12%), and intermediate mesodermal fates (10%). Those transferred cells contributed to the pronephric tubules epitheliums with transgenic and wild-type neighbors. The above showed the capacity of those cells to adapt the cell morphology and function depending on the cues they received from the host neighborhood environment. Finally, we conclude that injecting cells where renal progenitors reside preferentially, can be more challenging than for other structures such as the neural tube, dermal epithelium, and somites. However, it is quite feasible and should be encouraged, as it is a favorable methodology for solving cellular and developmental questions.BiólogoPregrado27 páginasapplication/pdfengUniversidad de los AndesBiologíaFacultad de CienciasDepartamento de Ciencias BiológicasChimeras: an alternative for studying zebrafish pronephric tubule development in vivo.Trabajo de grado - Pregradoinfo:eu-repo/semantics/bachelorThesisinfo:eu-repo/semantics/acceptedVersionhttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1fTexthttp://purl.org/redcol/resource_type/TPMicroinyecciónTransgénicosTransferencia de blastómerosPeces cebraPronefrosBiología201712053Publicationhttps://scholar.google.es/citations?user=J1xQFB4AAAAJvirtual::2980-10000-0001-5671-7017virtual::2980-1https://scienti.minciencias.gov.co/cvlac/visualizador/generarCurriculoCv.do?cod_rh=0001443145virtual::2980-14033451d-4829-428f-99e0-968786798fcbvirtual::2980-14033451d-4829-428f-99e0-968786798fcbvirtual::2980-1THUMBNAIL26476.pdf.jpg26476.pdf.jpgIM Thumbnailimage/jpeg23579https://repositorio.uniandes.edu.co/bitstreams/b75fe6d8-d1eb-41bc-aaf0-2791d1a9f632/download161b618d49ae19ebd7a8886b7167d855MD52ORIGINAL26476.pdfapplication/pdf4217119https://repositorio.uniandes.edu.co/bitstreams/ac158855-a157-4c41-9bf2-e7cd3cff1fd0/download312ddaf50ef7c6fcba984f30e33aae47MD51TEXT26476.pdf.txt26476.pdf.txtExtracted texttext/plain92871https://repositorio.uniandes.edu.co/bitstreams/0a81768c-a387-418d-be96-4994a080b8ff/downloade28fb53aff34dfc907e4f36a7b241544MD531992/55393oai:repositorio.uniandes.edu.co:1992/553932024-03-13 12:19:39.351http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/open.accesshttps://repositorio.uniandes.edu.coRepositorio institucional Sénecaadminrepositorio@uniandes.edu.co |