Crecimiento y producción de bioplásticos a partir de Escherichia coli genéticamente modificada

Debido a las problemáticas asociadas a los plásticos de un solo uso (e.g. explotación de recursos no renovables y contaminación de ecosistemas), se han formulado alternativas que promuevan la producción de plásticos de fácil degradación. Estos pueden ser producidos naturalmente por Ralstonia eutroph...

Full description

Autores:
Romero Valderrama, Paula Andrea
Tipo de recurso:
Trabajo de grado de pregrado
Fecha de publicación:
2022
Institución:
Universidad de los Andes
Repositorio:
Séneca: repositorio Uniandes
Idioma:
spa
OAI Identifier:
oai:repositorio.uniandes.edu.co:1992/59293
Acceso en línea:
http://hdl.handle.net/1992/59293
Palabra clave:
PHB
E. Coli
Ralstonia eutropha H16
Ácidos grasos volátiles
Ingeniería
Rights
openAccess
License
Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
id UNIANDES2_cc4269ef0bb6337d5b93f979014a7477
oai_identifier_str oai:repositorio.uniandes.edu.co:1992/59293
network_acronym_str UNIANDES2
network_name_str Séneca: repositorio Uniandes
repository_id_str
dc.title.none.fl_str_mv Crecimiento y producción de bioplásticos a partir de Escherichia coli genéticamente modificada
title Crecimiento y producción de bioplásticos a partir de Escherichia coli genéticamente modificada
spellingShingle Crecimiento y producción de bioplásticos a partir de Escherichia coli genéticamente modificada
PHB
E. Coli
Ralstonia eutropha H16
Ácidos grasos volátiles
Ingeniería
title_short Crecimiento y producción de bioplásticos a partir de Escherichia coli genéticamente modificada
title_full Crecimiento y producción de bioplásticos a partir de Escherichia coli genéticamente modificada
title_fullStr Crecimiento y producción de bioplásticos a partir de Escherichia coli genéticamente modificada
title_full_unstemmed Crecimiento y producción de bioplásticos a partir de Escherichia coli genéticamente modificada
title_sort Crecimiento y producción de bioplásticos a partir de Escherichia coli genéticamente modificada
dc.creator.fl_str_mv Romero Valderrama, Paula Andrea
dc.contributor.advisor.none.fl_str_mv Husserl Orjuela, Johana
dc.contributor.author.none.fl_str_mv Romero Valderrama, Paula Andrea
dc.subject.keyword.none.fl_str_mv PHB
E. Coli
Ralstonia eutropha H16
Ácidos grasos volátiles
topic PHB
E. Coli
Ralstonia eutropha H16
Ácidos grasos volátiles
Ingeniería
dc.subject.themes.es_CO.fl_str_mv Ingeniería
description Debido a las problemáticas asociadas a los plásticos de un solo uso (e.g. explotación de recursos no renovables y contaminación de ecosistemas), se han formulado alternativas que promuevan la producción de plásticos de fácil degradación. Estos pueden ser producidos naturalmente por Ralstonia eutropha, pero dado sus deficientes tasas de crecimiento se han buscado alternativas como la modificación genética de microorganismos como Escherichia coli. En este proyecto, se buscó comprobar que clones de E. coli modificadas previamente por medio del método CRISPR/Cas9-¿¿¿ Red y los genes asociados a la producción de PHA provenientes de Ralstonia eutropha H16, con la adición de un promotor (PaldA) inducido en presencia de ácido oleico, eran capaces de producir PHA. Para esto, se realizaron comprobaciones con tinción de gram y negro de sudán que indicaban presencia de un material polimérico en células que correspondían morfológicamente a E. coli. Debido a esto se realizó un proceso de extracción, donde se obtuvo una fina capa de polímero por E. coli. Es necesario comprobar en estudios futuros si el material resultante corresponde a PHA y llevar el proceso a una posible producción a gran escala por medio de prototipos de PTAR's.
publishDate 2022
dc.date.accessioned.none.fl_str_mv 2022-07-28T18:34:47Z
dc.date.available.none.fl_str_mv 2022-07-28T18:34:47Z
dc.date.issued.none.fl_str_mv 2022-07-22
dc.type.es_CO.fl_str_mv Trabajo de grado - Pregrado
dc.type.driver.none.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/bachelorThesis
dc.type.version.none.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/acceptedVersion
dc.type.coar.none.fl_str_mv http://purl.org/coar/resource_type/c_7a1f
dc.type.content.es_CO.fl_str_mv Text
dc.type.redcol.none.fl_str_mv http://purl.org/redcol/resource_type/TP
format http://purl.org/coar/resource_type/c_7a1f
status_str acceptedVersion
dc.identifier.uri.none.fl_str_mv http://hdl.handle.net/1992/59293
dc.identifier.instname.es_CO.fl_str_mv instname:Universidad de los Andes
dc.identifier.reponame.es_CO.fl_str_mv reponame:Repositorio Institucional Séneca
dc.identifier.repourl.es_CO.fl_str_mv repourl:https://repositorio.uniandes.edu.co/
url http://hdl.handle.net/1992/59293
identifier_str_mv instname:Universidad de los Andes
reponame:Repositorio Institucional Séneca
repourl:https://repositorio.uniandes.edu.co/
dc.language.iso.es_CO.fl_str_mv spa
language spa
dc.relation.references.es_CO.fl_str_mv Álvarez, P. A., Luna, V. M., & Ussa, J. E. (2021). Caracterización de los Microorganismos Biodegradadores del Bioplástico de Xiloglucano de Tamarindo en Biorreactores de Compostaje. Scientia et Technica, 26(2), 237-245. https://doi.org/10.22517/23447214.24361
Aponte, M. P., & Husserl, J. (2018). Caracterización de biopolímero producido por E. coli recombinante y Ralstonia eutropha. Uniandes.
Corrales Ramírez, L. C., & Caycedo Lozano, L. (2020). Principios físicoquímicos de los colorantes utilizados en microbiología. NOVA: Publicación Científica En Ciencias Biomédicas, 18(33), 73-100.
Galeano, L. (2019). Pasantía de investigación en Producción de bioplástico a partir de bacterias modificadas mediante el sistema CRISPR/Cas9- ¿Red. Bogotá D.C: Universidad de Los Andes.
Geyer, R. ( 1 ), Jambeck, J. R. ( 2 ), & Law, K. L. ( 3 ). (2017). Production, use, and fate of all plastics ever made. Science Advances, 3(7). https://doi-org.ezproxy.uniandes.edu.co:8443/10.1126/sciadv.1700782
Han, M.J., Lee, J. W., Lee, S. Y., & Yoo, J. S. (2008). Proteome-Level Responses of Escherichia coli to Long-Chain Fatty Acids and Use of Fatty Acid Inducible Promoter in Protein Production. Journal ofBiomedicine & Biotechnology, 1-12. https://doi.org/10.1155/2008/735101
Hiroe, A, Tsuge, T, Tsuge, K, Itaya, M, & Nomura, C. T. (2012). Rearrangement of gene order in the phaCAB operon leads to effective production of ultrahigh-molecular-weight poly[(R)-3-hydroxybutyrate] in genetically engineered Escherichia coli. Applied and Environmental Microbiology, 78(9), 3177¿3184. https://doi-org.ezproxy.uniandes.edu.co:8443/10.1128/AEM.07715-11
Kim, B.S., Lee, S.C., Lee, S.Y., Chang, H.N., Chang, Y.K. and Woo, S.I. (1994), Production of poly(3-hydroxybutyric acid) by fed-batch culture of Alcaligenes eutrophus with glucose concentration control. Biotechnol. Bioeng., 43: 892-898. https://doi.org/10.1002/bit.260430908
Lee, S. Y, Lee, Y. K, & Chang, H. N. (1995). Stimulatory effects of amino acids and oleic acid on poly(3-hydroxybutyric acid) synthesis by recombinant Escherichia coli. Journal of Fermentation and Bioengineering, 79(2), 177-180. https://doi-org.ezproxy.uniandes.edu.co:8443/10.1016/0922-338X(95)94089-A
Merlo, J. D. (2018). Crecimiento y producción de bioplástico por Staphylococcus hominis en efluente fermentado con agua residual de industria láctea. Bogotá D.C: Universidad de Los Andes.
Nikel, P. I, Galvagno, M. A, Pettinari, M. J, & Méndez, B. S. (2005). Statistical optimization of a culture medium for biomass and poly(3-hydroxybutyrate) production by a recombinant Escherichia coli strain using agroindustrial byproducts. International Microbiology, 8(4), 243-250.
Riedel, S. L., Jahns, S., Koenig, S., Bock, M. C. E., Brigham, C. J., Bader, J., & Stahl, U. (2015). Polyhydroxyalkanoates production with Ralstonia eutropha from low quality waste animal fats. Journal of Biotechnology, 214, 119-127. https://doi-org.ezproxy.uniandes.edu.co:8443/10.1016/j.jbiotec.2015.09.002
Romero, J. S., & Monroy, N. H. (2005). Estudio sobre la aplicabilidad de bioplástico en la industria de productos desechables plásticos: ventajas y obstáculos de su implementación en Colombia. Uniandes.
Steinbüchel, A. Schubert, P. Timm, A & Pries, A. (1990). Genetic and Molecular Analysis of the Alcaligenes Eutrophus Polyhydroxyalkanoate-Biosynthetic Genes and Accumulation of PHA in Recombinant Bacteria (Vol. 186). Springer Netherlands. https://doi-org.ezproxy.uniandes.edu.co:8443/10.1007/978-94-009-2129-0
Zúñiga, T. (2018). Producción de PHB a partir de Escherichia coli modificada, utilizando ácidos grasos grasos volátiles como sustrato y ácido oleico como inductor del proceso. Bogotá D.C: Universidad de Los Andes.
dc.rights.license.spa.fl_str_mv Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
dc.rights.uri.*.fl_str_mv http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
dc.rights.accessrights.spa.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
dc.rights.coar.spa.fl_str_mv http://purl.org/coar/access_right/c_abf2
rights_invalid_str_mv Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
http://purl.org/coar/access_right/c_abf2
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.extent.es_CO.fl_str_mv 7 páginas
dc.format.mimetype.es_CO.fl_str_mv application/pdf
dc.publisher.es_CO.fl_str_mv Universidad de los Andes
dc.publisher.program.es_CO.fl_str_mv Ingeniería Ambiental
dc.publisher.faculty.es_CO.fl_str_mv Facultad de Ingeniería
dc.publisher.department.es_CO.fl_str_mv Departamento de Ingeniería Civil y Ambiental
institution Universidad de los Andes
bitstream.url.fl_str_mv https://repositorio.uniandes.edu.co/bitstreams/cfbf2730-dadb-4719-aba9-868353d6d03a/download
https://repositorio.uniandes.edu.co/bitstreams/166d266a-2719-4c57-a0af-8397a882d84d/download
https://repositorio.uniandes.edu.co/bitstreams/e379feaf-d3d1-4ce8-bf15-55dc2504288e/download
https://repositorio.uniandes.edu.co/bitstreams/664d38de-b82d-4197-96bd-ab0809754e3d/download
https://repositorio.uniandes.edu.co/bitstreams/9ed29e11-30c4-4b06-9a7c-7f7139d62566/download
https://repositorio.uniandes.edu.co/bitstreams/8408d139-3101-4369-beab-484ea43233f9/download
https://repositorio.uniandes.edu.co/bitstreams/a459b5b2-5576-422d-abd8-9fa36dd11a3d/download
https://repositorio.uniandes.edu.co/bitstreams/b939b16f-0a1f-48c6-9566-99f1dd37e7f5/download
bitstream.checksum.fl_str_mv 02fa0b070210073f39d035b281a4ee60
1b6216c9af7aae410d33b71a741b1617
273ae6de708dea6a8514d92faf987a96
615244bd3263b6392f8640994661dcfd
4460e5956bc1d1639be9ae6146a50347
5e5b62248b2cd39b2a5794728541aeec
4491fe1afb58beaaef41a73cf7ff2e27
5aa5c691a1ffe97abd12c2966efcb8d6
bitstream.checksumAlgorithm.fl_str_mv MD5
MD5
MD5
MD5
MD5
MD5
MD5
MD5
repository.name.fl_str_mv Repositorio institucional Séneca
repository.mail.fl_str_mv adminrepositorio@uniandes.edu.co
_version_ 1818111802606616576
spelling Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacionalhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/info:eu-repo/semantics/openAccesshttp://purl.org/coar/access_right/c_abf2Husserl Orjuela, Johanavirtual::6641-1Romero Valderrama, Paula Andread1fcd9e7-8701-4317-bd1a-080aba3adca26002022-07-28T18:34:47Z2022-07-28T18:34:47Z2022-07-22http://hdl.handle.net/1992/59293instname:Universidad de los Andesreponame:Repositorio Institucional Sénecarepourl:https://repositorio.uniandes.edu.co/Debido a las problemáticas asociadas a los plásticos de un solo uso (e.g. explotación de recursos no renovables y contaminación de ecosistemas), se han formulado alternativas que promuevan la producción de plásticos de fácil degradación. Estos pueden ser producidos naturalmente por Ralstonia eutropha, pero dado sus deficientes tasas de crecimiento se han buscado alternativas como la modificación genética de microorganismos como Escherichia coli. En este proyecto, se buscó comprobar que clones de E. coli modificadas previamente por medio del método CRISPR/Cas9-¿¿¿ Red y los genes asociados a la producción de PHA provenientes de Ralstonia eutropha H16, con la adición de un promotor (PaldA) inducido en presencia de ácido oleico, eran capaces de producir PHA. Para esto, se realizaron comprobaciones con tinción de gram y negro de sudán que indicaban presencia de un material polimérico en células que correspondían morfológicamente a E. coli. Debido a esto se realizó un proceso de extracción, donde se obtuvo una fina capa de polímero por E. coli. Es necesario comprobar en estudios futuros si el material resultante corresponde a PHA y llevar el proceso a una posible producción a gran escala por medio de prototipos de PTAR's.Ingeniero AmbientalPregrado7 páginasapplication/pdfspaUniversidad de los AndesIngeniería AmbientalFacultad de IngenieríaDepartamento de Ingeniería Civil y AmbientalCrecimiento y producción de bioplásticos a partir de Escherichia coli genéticamente modificadaTrabajo de grado - Pregradoinfo:eu-repo/semantics/bachelorThesisinfo:eu-repo/semantics/acceptedVersionhttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1fTexthttp://purl.org/redcol/resource_type/TPPHBE. ColiRalstonia eutropha H16Ácidos grasos volátilesIngenieríaÁlvarez, P. A., Luna, V. M., & Ussa, J. E. (2021). Caracterización de los Microorganismos Biodegradadores del Bioplástico de Xiloglucano de Tamarindo en Biorreactores de Compostaje. Scientia et Technica, 26(2), 237-245. https://doi.org/10.22517/23447214.24361Aponte, M. P., & Husserl, J. (2018). Caracterización de biopolímero producido por E. coli recombinante y Ralstonia eutropha. Uniandes.Corrales Ramírez, L. C., & Caycedo Lozano, L. (2020). Principios físicoquímicos de los colorantes utilizados en microbiología. NOVA: Publicación Científica En Ciencias Biomédicas, 18(33), 73-100.Galeano, L. (2019). Pasantía de investigación en Producción de bioplástico a partir de bacterias modificadas mediante el sistema CRISPR/Cas9- ¿Red. Bogotá D.C: Universidad de Los Andes.Geyer, R. ( 1 ), Jambeck, J. R. ( 2 ), & Law, K. L. ( 3 ). (2017). Production, use, and fate of all plastics ever made. Science Advances, 3(7). https://doi-org.ezproxy.uniandes.edu.co:8443/10.1126/sciadv.1700782Han, M.J., Lee, J. W., Lee, S. Y., & Yoo, J. S. (2008). Proteome-Level Responses of Escherichia coli to Long-Chain Fatty Acids and Use of Fatty Acid Inducible Promoter in Protein Production. Journal ofBiomedicine & Biotechnology, 1-12. https://doi.org/10.1155/2008/735101Hiroe, A, Tsuge, T, Tsuge, K, Itaya, M, & Nomura, C. T. (2012). Rearrangement of gene order in the phaCAB operon leads to effective production of ultrahigh-molecular-weight poly[(R)-3-hydroxybutyrate] in genetically engineered Escherichia coli. Applied and Environmental Microbiology, 78(9), 3177¿3184. https://doi-org.ezproxy.uniandes.edu.co:8443/10.1128/AEM.07715-11Kim, B.S., Lee, S.C., Lee, S.Y., Chang, H.N., Chang, Y.K. and Woo, S.I. (1994), Production of poly(3-hydroxybutyric acid) by fed-batch culture of Alcaligenes eutrophus with glucose concentration control. Biotechnol. Bioeng., 43: 892-898. https://doi.org/10.1002/bit.260430908Lee, S. Y, Lee, Y. K, & Chang, H. N. (1995). Stimulatory effects of amino acids and oleic acid on poly(3-hydroxybutyric acid) synthesis by recombinant Escherichia coli. Journal of Fermentation and Bioengineering, 79(2), 177-180. https://doi-org.ezproxy.uniandes.edu.co:8443/10.1016/0922-338X(95)94089-AMerlo, J. D. (2018). Crecimiento y producción de bioplástico por Staphylococcus hominis en efluente fermentado con agua residual de industria láctea. Bogotá D.C: Universidad de Los Andes.Nikel, P. I, Galvagno, M. A, Pettinari, M. J, & Méndez, B. S. (2005). Statistical optimization of a culture medium for biomass and poly(3-hydroxybutyrate) production by a recombinant Escherichia coli strain using agroindustrial byproducts. International Microbiology, 8(4), 243-250.Riedel, S. L., Jahns, S., Koenig, S., Bock, M. C. E., Brigham, C. J., Bader, J., & Stahl, U. (2015). Polyhydroxyalkanoates production with Ralstonia eutropha from low quality waste animal fats. Journal of Biotechnology, 214, 119-127. https://doi-org.ezproxy.uniandes.edu.co:8443/10.1016/j.jbiotec.2015.09.002Romero, J. S., & Monroy, N. H. (2005). Estudio sobre la aplicabilidad de bioplástico en la industria de productos desechables plásticos: ventajas y obstáculos de su implementación en Colombia. Uniandes.Steinbüchel, A. Schubert, P. Timm, A & Pries, A. (1990). Genetic and Molecular Analysis of the Alcaligenes Eutrophus Polyhydroxyalkanoate-Biosynthetic Genes and Accumulation of PHA in Recombinant Bacteria (Vol. 186). Springer Netherlands. https://doi-org.ezproxy.uniandes.edu.co:8443/10.1007/978-94-009-2129-0Zúñiga, T. (2018). Producción de PHB a partir de Escherichia coli modificada, utilizando ácidos grasos grasos volátiles como sustrato y ácido oleico como inductor del proceso. Bogotá D.C: Universidad de Los Andes.201815144Publicationhttps://scholar.google.es/citations?user=HitOO8AAAAJvirtual::6641-10000-0002-1390-1583virtual::6641-1https://scienti.minciencias.gov.co/cvlac/visualizador/generarCurriculoCv.do?cod_rh=0000277860virtual::6641-16c9de8f6-67e3-4472-9a44-7379cf7e0fafvirtual::6641-16c9de8f6-67e3-4472-9a44-7379cf7e0fafvirtual::6641-1THUMBNAILDocumento final corregido. Paula Romero.pdf.jpgDocumento final corregido. Paula Romero.pdf.jpgIM Thumbnailimage/jpeg21309https://repositorio.uniandes.edu.co/bitstreams/cfbf2730-dadb-4719-aba9-868353d6d03a/download02fa0b070210073f39d035b281a4ee60MD56Formato bibliotecaPAR.pdf.jpgFormato bibliotecaPAR.pdf.jpgIM Thumbnailimage/jpeg16032https://repositorio.uniandes.edu.co/bitstreams/166d266a-2719-4c57-a0af-8397a882d84d/download1b6216c9af7aae410d33b71a741b1617MD58ORIGINALDocumento final corregido. Paula Romero.pdfDocumento final corregido. Paula Romero.pdfTrabajo de gradoapplication/pdf453436https://repositorio.uniandes.edu.co/bitstreams/e379feaf-d3d1-4ce8-bf15-55dc2504288e/download273ae6de708dea6a8514d92faf987a96MD53Formato bibliotecaPAR.pdfFormato bibliotecaPAR.pdfHIDEapplication/pdf164548https://repositorio.uniandes.edu.co/bitstreams/664d38de-b82d-4197-96bd-ab0809754e3d/download615244bd3263b6392f8640994661dcfdMD54CC-LICENSElicense_rdflicense_rdfapplication/rdf+xml; charset=utf-8805https://repositorio.uniandes.edu.co/bitstreams/9ed29e11-30c4-4b06-9a7c-7f7139d62566/download4460e5956bc1d1639be9ae6146a50347MD52TEXTDocumento final corregido. Paula Romero.pdf.txtDocumento final corregido. Paula Romero.pdf.txtExtracted texttext/plain15554https://repositorio.uniandes.edu.co/bitstreams/8408d139-3101-4369-beab-484ea43233f9/download5e5b62248b2cd39b2a5794728541aeecMD55Formato bibliotecaPAR.pdf.txtFormato bibliotecaPAR.pdf.txtExtracted texttext/plain1163https://repositorio.uniandes.edu.co/bitstreams/a459b5b2-5576-422d-abd8-9fa36dd11a3d/download4491fe1afb58beaaef41a73cf7ff2e27MD57LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-81810https://repositorio.uniandes.edu.co/bitstreams/b939b16f-0a1f-48c6-9566-99f1dd37e7f5/download5aa5c691a1ffe97abd12c2966efcb8d6MD511992/59293oai:repositorio.uniandes.edu.co:1992/592932024-03-13 13:14:11.327http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/open.accesshttps://repositorio.uniandes.edu.coRepositorio institucional Sénecaadminrepositorio@uniandes.edu.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