Expresión y evaluación de la proteína YdeM como posible activador de sulfatasas en Pichia pastoris

La mucopolisacaridosis es una enfermedad dentro del grupo de los errores innatos del metabolismo, la cual se caracteriza por afectar la producción de la enzima N-acetilgalactosamina-6-sulfato sulfatasa (GALNS), encargada de catalizar la degradación de glucosaminoglicanos, queratán sulfato y condroitín-6-sulfato. El presente informe tiene como objetivo la expresión y evaluación del gen de la proteína YdeM como posible activador de sulfatasas en Pichia pastoris. Para lograr esto, se tienen varios objetivos secundarios; entre los que se encuentran, la obtención del gen de la proteína YdeM de la bacteria Escherichia coli BL21(DE3). Para esto se realizó una PCR que permitirá amplificar la secuencia de YdeM con ayuda de primers creados para tal fin (primers forward y reverse). Se verificará la presencia de la proteína mediante electroforesis, finalmente, se purificará para su posterior uso. De este modo, podrá ser introducido en el plásmido pPic9k con ayuda de enzimas de restricción EcoRI y BamHI. El plásmido pPic9k fue proporcionado por el Instituto de Errores Innatos del Metabolismo de la Pontificia Universidad Javeriana. Para poder insertar el gen de interés es importante realizar una transformación de este en una bacteria Escherichia coli, con el fin de tener varias copias del plásmido con y sin el gen de interés. Una vez insertado el gen se purificará el plásmido y se introducirá el ADN no viral en la Pichia pastoris para así evaluar la producción de la enzima GALNS. Sin embargo, se tuvieron problemas en la trasformación lo que impidió continuar el procedimiento para transformar en Pichia pastoris. Dichos problemas son explicados a lo largo del documento

• Autores: Mojica Boada, Diego Andrés; Mora Guevara, Lady Juliet
• Tipo de recurso: Trabajo de grado de pregrado
• Fecha de publicación: 2018
• Institución: Universidad de los Andes
• Repositorio: Séneca: repositorio Uniandes
• Idioma: spa
• OAI Identifier: oai:repositorio.uniandes.edu.co:1992/39280
• Acceso en línea: http://hdl.handle.net/1992/39280
• Palabra clave: Activación enzimática; Enzimas proteolíticas; Sulfatasas; Escherichia coli; Ingeniería
• Rights: openAccess
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