Aislamiento y caracterización de bacterias fijadoras de nitrógeno en rizósfera de yuca (Manihot esculenta)
Las bacterias promotoras de crecimiento de rizósfera cuentan con diferentes mecanismos de acción que benefician el crecimiento de las plantas, posicionándolas con un papel fundamental para la formulación de bioproductos que puedan servir para sustituir fertilizantes químicos. Dentro de los beneficio...
- Autores:
-
Palacio Rodríguez, Valeria
- Tipo de recurso:
- Trabajo de grado de pregrado
- Fecha de publicación:
- 2024
- Institución:
- Universidad de los Andes
- Repositorio:
- Séneca: repositorio Uniandes
- Idioma:
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- OAI Identifier:
- oai:repositorio.uniandes.edu.co:1992/73671
- Acceso en línea:
- https://hdl.handle.net/1992/73671
- Palabra clave:
- PGPR
Fijación de nitrógeno
Manihot esculenta
Solubilización de fosfatos
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Las bacterias promotoras de crecimiento de rizósfera cuentan con diferentes mecanismos de acción que benefician el crecimiento de las plantas, posicionándolas con un papel fundamental para la formulación de bioproductos que puedan servir para sustituir fertilizantes químicos. Dentro de los beneficios que pueden conferir estas bacterias a las plantas se resalta su capacidad de fijar nitrógeno atmosférico N2. El nitrógeno en su forma atmosférica no es asimilable por las plantas, por lo que las bacterias son aquellas encargadas de realizar su fijación y convertirlo en especies asimilables como amonio NH4+. El mecanismo que permite realizar la fijación de nitrógeno se lleva acabo por la acción del complejo de la nitrogenasa, enzima que es codificada por diferentes genes nif y es inhibida por la presencia de oxígeno. Teniendo en cuenta que el nitrógeno es uno de los macronutrientes esenciales para el desarrollo de las plantas, esta investigación busca aislar bacterias fijadoras de nitrógeno en rizósfera de yuca. Esto, por medio del aislamiento en medios de cultivo libre de nitrógeno y el uso de PCR para evaluar la amplificación del gen nifH, metodología que permitió encontrar diez bacterias con esta capacidad. Adicionalmente, se evaluó la capacidad de estas bacterias para solubilizar fosfatos y producir sideróforos con el fin de ahondar en su posible acción como bacterias promotoras de crecimiento. Se logró identificar tres bacterias con mayor potencial como bacterias benéficas con capacidad de fijación de nitrógeno atmosférico, solubilización de fosfatos y producción de sideróforos: Acinetobacter baumanii, Pseudoxanthomonas sp. y Agrobacterium sp. |
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Aguado-Santacruz,G.A.,Moreno-Gómez,B.,Jiménez-Francisco,B.,García-Moya,E.,& Preciado-Ortiz, R.E.(2012).Impactodelossideróforosmicrobianosyfitosidéforos en la asimilación de hierro por las plantas:una síntesis. Revista fitotecnia mexicana, 35 (1), 9-21. Ajijah, N.,Fiodor,A.,Pandey,A.K.,Rana,A.,&Pranaw,K.(2023).Plant growth-promoting bacteria(PGPB) with biofilm-forming ability: A multifaceted agent for Sustainable Agriculture. Diversity, 15 (1), 112. https://doi.org/10.3390/d15010112 Ali, S.S., Kornaros, M., Manni, A., Al-Tohamy, R., El-Shanshoury, A.E.-R., Matter, I.M., Elsamahy, T., Sobhy, M.,&Sun, J.(2021).Advances in microorganisms-based bio-fertilizers: Major mechanisms and applications. Biofertilizers, 371-385. https://doi.org/10.1016/b978-0-12-821667-5.00023-3 Andrade, R.S.,Rivera Vasco,T.C.,Labarta,R & González,C.(2022).Producción de Yuca en Colombia:¿Que tanto conocemos? https://cgspace.cgiar.org/handle/10568/125826 Babalola, O.O.(2010).Beneficial bacteria of agricultural importance. Biotechnology Letters,32 (11), 1559-1570. https://doi.org/10.1007/s10529-010-0347-0 Bazzi, A.M., Al-Tawfiq, J.A & Rabaan,A.A.(2017). Misinterpretation of gram stain from the stationary growth phase of positive blood cultures for Brucella and Acinetobacter species. The Open Microbiology Journal, 11 (1), 126-131. https://doi.org/10.2174/1874285801711010126 Berg, G.,Eberl,L.,& Hartmann,A.(2005).The Rhizosphere as a reservoir for opportunistic human pathogenic bacteria. Environmental Microbiology, 7 (11), 1673-1685. https://doi.org/10.1111/j.1462-2920.2005.00891.x Castellano-Hinojosa,A.,Correa-Galeote,D.,Palau,J.,& Bedmar,E.J.(2015).Isolation of N2-fixing rhizobacteria from Lolium Perenne and evaluating their plant growth promoting traits. Journal of Basic Microbiology, 56 (1), 85-91. https://doi.org/10.1002/jobm.201500247 Cheng, Y.,Narayanan,M.,Shi,X.,Chen,X.,Li,Z.,&Ma,Y.(2023).Phosphate-solubilizing bacteria: Their agroecological function and optimistic application for enhancing agro-productivity. Science of The Total Environment, 901, 166468. https://doi.org/10.1016/j.scitotenv.2023.166468 Chialva,M.,& Bonfante,P.(2018).Plant microbiota: from model plants to Mediterranean crops. Phytopathologia Mediterranea, 57 (1). https://doi.org/10.14601/Phytopathol_Mediterr-22052 Chukwuneme,C.F.,Babalola,O.O.,Kutu,F.R.,&Ojuederie,O.B.(2020). Characterization of actinomycetes isolates for plant growth promoting traits and their effects on drought tolerance in maize. Journal ofPlantInteractions, 15 (1), 93-105. https://doi.org/10.1080/17429145.2020.1752833 Fitriyanti, D.,Mubarik,N.R.,& Tjahjoleksono, A.(2017).Characterization and identification of phosphate solubilizing bacteria isolate GPC3.7 from limestone mining region. IOP Conference Series: Earth and Environmental Science, 58, 012016. https://doi.org/10.1088/1755-1315/58/1/012016 Gaby, J.C.,& Buckley, D.H.(2012).A comprehensive evaluation of PCR primers to amplify the nifH gene of nitrogenase. Gaby, J.C.,& Buckley, D.H.(2014).A comprehensive aligned nifh gene database: A multi-purpose tool for studies of nitrogen-fixing bacteria. Database, 2014. https://doi.org/10.1093/database/bau001 Glick, B.R.(2012).Plant growth-promoting bacteria: Mechanisms and applications. Scientifica, 2012, 1-15. https://doi.org/10.6064/2012/963401 Gómez Osorio, L.M.(2017).Aislamiento de Bacterias solubilizadoras de fosfato nativas de la ciénaga de mallorquín en el departamento del atlántico-colombia. Microciencia, 6,11-19. https://doi.org/10.18041/2323-0320/microciencia.0.2017.3657 Gordillo Altamirano, F., Forsyth, J.H., Patwa, R., Kostoulias, X.,Trim, M., Subedi, D., Archer, S.K., Morris, F.C., Oliveira, C., Kielty, L.,& et al.(2021).Bacteriophage-resistant Acinetobacter baumannii are resensitized to antimicrobials. NatureMicro-biology, 6 (2), 157-161. https://doi.org/10.1038/s41564-020-00830-7 Ha, J., Gao, Y., Zhang, R., Li, K., Zhang, Y., Niu, X., Chen, X., Luo, K.,&Chen, Y.(2021).Diversity of the bacterial microbiome associated with the endosphere and rhizosphere of different cassava (manihot esculenta Crantz)genotypes. Frontiers in Microbiology,12. https://doi.org/10.3389/fmicb.2021.729022 Himedia. (s.f.-a).Ashby’s Mannitol Agar[[Accessed28-08-2023]]. https://www.himedialabs.com/us/m706-ashbys-mannitol-agar.html Himedia. (s.f.-b).Jensen’sMedium(Agar)[[Accessed28-08-2023]]. https://www.himedialabs.com/us/m710-jensens-medium-agar.html Huda, N.u.,Tanvir,R.,Badar,J.,Ali,I.,&Rehman,Y.(2022).Arsenic-resistant plant growth promoting Pseudoxanthomonas Mexicana S254 and Stenotrophomonas maltophilia S255 isolated from agriculture soil contaminated by industrial effluent. Sustainability, 14 (17), 10697. https://doi.org/10.3390/su141710697 Junier, P., Molina, V., Dorador, C.,Hadas, O., Kim, O.S.,Junier,T.,Witzel,K.P.,&Imhoff,J. F.(2009).Phylogenetic and functional marker genes to study ammonia-oxidizing microorganisms (AOM) in the environment. Applied Microbiology and Biotechnology,85 (3), 425-440. https://doi.org/10.1007/s00253-009-2228-9 Kanvinde, L., & Sastry, G. R. (1990). agrobacterium tumefaciens is a diazotrophic bacterium. Applied and Environmental Microbiology, 56 (7), 2087-2092. https://doi.org/10.1128/ aem.56.7.2087-2092.1990 Korenblum, E., Massalha, H., & Aharoni, A. (2022). Plant–microbe interactions in the rhizosphere via a circular metabolic economy. The Plant Cell, 34 (9), 3168-3182. https://doi.org/10.1093/plcell/koac163 Lery, L. M., Bitar, M., Costa, M. G., Rössle, S. C., & Bisch, P. M. (2010). Unraveling the molecular mechanisms of nitrogenase conformational protection against oxygen in diazotrophic bacteria. BMC Genomics, 11 (Suppl 5). https://doi.org/10.1186/1471- 2164-11-s5-s7 Louden, B. C., Haarmann, D., & Lynne, A. M. (2011). Use of Blue Agar CAS Assay for Siderophore Detection. Journal of Microbiology & Biology Education, 12 (1), 51-53. https://doi.org/10.1128/jmbe.v12i1.249 Mao, D.-P., Zhou, Q., Chen, C.-Y., & Quan, Z.-X. (2012). Coverage evaluation of universal bacterial primers using the metagenomic datasets. BMC Microbiology, 12 (1). https://doi.org/10.1186/1471-2180-12-66 Mathesius, U. (2022). Are legumes different? origins and consequences of evolving nitrogen fixing symbioses. Journal of Plant Physiology, 276, 153765. https://doi.org/10.1016/ j.jplph.2022.153765 Milipore. (s.f.). https://www.sigmaaldrich.com/CO/es/product/sial/40560 Mohapatra, B., Sar, P., Kazy, S. K., Maiti, M. K., & Satyanarayana, T. (2018). Taxonomy and physiology of Pseudoxanthomonas Arseniciresistens sp. nov., an arsenate and nitrate-reducing novel Gammaproteobacterium from arsenic contaminated groundwa- ter, India. PLOS ONE, 13 (3). https://doi.org/10.1371/journal.pone.0193718 Muangthong, A., Youpensuk, S., & Rerkasem, B. (2015). Isolation and characterisation of endophytic nitrogen fixing bacteria in sugarcane. Tropical life sciences research, 26 (1), 41. Mulissa, J. M., Carolin, R. L., Ruth, A. S., & Fassil, A. (2015). Characterization of phosphate solubilizing rhizobacteria isolated from lentil growing areas of Ethiopia. African Jour- nal of Microbiology Research, 9 (25), 1637-1648. https://doi.org/10.5897/ajmr2015.7473 Organización de las Naciones Unidas, O. (2018). La Agenda 2030 y los Objetivos de Desarrollo Sostenible Una oportunidad para América Latina y el Caribe. https://repositorio.cepal.org/server/api/core/bitstreams/cb30a4de- 7d87-4e79-8e7a-ad5279038718/content Racedo Pulido, C. (2023). Caracterización de bacterias aisladas de la rizosfera de sacha inchi (Plukenetia volubilis) asociadas a la promoción de crecimiento vegetal y protección contra estrés hídrico (inf.téc.). Universidad de los Andes. http: //hdl.handle.net/ 1992/69282 Ramakrishna, W., Yadav, R., & Li, K. (2019). Plant growth promoting bacteria in agriculture: Two sides of a coin. Applied Soil Ecology, 138, 10-18. https://doi.org/10.1016/j.apsoil. 2019.02.019 Rokhbakhsh-Zamin, F., Sachdev, D., Kazemi-Pour, N., Engineer, A., Pardesi, K. R., Zinjarde,S. S., Dhakephalkar, P. K., & Chopade, B. A. (2011). Characterization of plant-growth-promoting traits of Acinetobacter species isolated from rhizosphere of Pennisetum glaucum. Journal of Microbiology and Biotechnology, 21 (6), 556-566. https://doi.org/ 10.4014/jmb.1012.12006 Sachdev, D., Nema, P., Dhakephalkar, P., Zinjarde, S., & Chopade, B. (2010). Assessment of 16S rrna gene-based phylogenetic diversity and promising plant growth-promoting traits of Acinetobacter community from the rhizosphere of wheat. Microbiological Re- search, 165 (8), 627-638. https://doi.org/10.1016/j.micres.2009.12.002 Sangoquiza-Caiza, C. A., Pincay-Verdezoto, A. K., Park, C. H., & Zambrano-Mendoza, J. L. (2023). Diversity of nitrogen-fixing and phosphorus-solubilizing bacteria associated with the rhizosphere of Andean maize in Ecuador. Brazilian Journal of Biology, 83. https://doi.org/10.1590/1519-6984.273632 Setti, B., & Bencheikh, M. (2013). Isolation And Characterization Of The Agrobacterium Tumefaciens From Almond Nurseries In Chlef Region In Western Algeria. European Scientific Journal, 9 (30). Shomi, F. Y., Uddin, M. B., & Zerin, T. (2021). Isolation and characterization of nitrogen-fixing bacteria from soil sample in Dhaka, Bangladesh. Stamford Journal of Microbiology, 11 (1), 11-13. Trivedi, P., Leach, J. E., Tringe, S. G., Sa, T., & Singh, B. K. (2020). Plant–Microbiome Interactions: From Community Assembly to Plant Health. Nature Reviews Microbiology, 18 (11), 607-621. https://doi.org/10.1038/s41579-020-0412-1 Vázquez-López, R., Solano-Gálvez, S. G., Juárez Vignon-Whaley, J. J., Abello Vaamonde, J. A., Padró Alonzo, L. A., Rivera Reséndiz, A., Muleiro Álvarez, M., Vega López, E. N., Franyuti-Kelly, G., Álvarez-Hernández, D. A., & et al. (2020). Acinetobacter baumannii resistance: A real challenge for clinicians. Antibiotics, 9 (4), 205. https://doi.org/10.3390/antibiotics9040205 Vejan, P., Abdullah, R., Khadiran, T., Ismail, S., & Nasrulhaq Boyce, A. (2016). Role of plant growth promoting rhizobacteria in agricultural sustainability—a review. Molecules, 21 (5), 573. https://doi.org/10.3390/molecules21050573 Vinnik, V., Zhang, F., Park, H., Cook, T. B., Throckmorton, K., Pfleger, B. F., Bugni, T. S., & Thomas, M. G. (2020). Structural and biosynthetic analysis of the fabrubactins, unusual siderophores from agrobacterium fabrum strain C58. ACS Chemical Biology, 16 (1), 125-135. https://doi.org/10.1021/acschembio.0c00809 Vocciante, M., Grifoni, M., Fusini, D., Petruzzelli, G., & Franchi, E. (2022). The role of Plant Growth-promoting rhizobacteria (PGPR) in mitigating plant’s environmental stresses. Applied Sciences, 12 (3), 1231. https://doi.org/10.3390/app12031231 Wakarera, P. W., Ojola, P., & Njeru, E. M. (2022). Characterization and diversity of native Azotobacter spp. isolated from semi-arid agroecosystems of Eastern Kenya. Biology Letters, 18 (3), 20210612. Zapata, T., Galindo, D. M., Corrales-Ducuara, A. R., & Ocampo-Ibáñez, I. D. (2021a). The Diversity of Culture-Dependent Gram-Negative Rhizobacteria Associated with Manihot esculenta Crantz Plants Subjected to Water-Deficit Stress. Diversity, 13 (8). https://doi.org/10.3390/d13080366 Zebua, A., Guchi, H., & Sembiring, M. (2020). Isolation of non-symbiotic Nitrogen-fixing bacteria on andisol land affected by Sinabung eruption. IOP Conference Series: Earth and Environmental Science, 454 (1), 012167. Zhang, L., Zhang, M., Huang, S., Li, L., Gao, Q., Wang, Y., Zhang, S., Huang, S., Yuan, L., Wen, Y., et al. (2022). A highly conserved core bacterial microbiota with nitrogen- fixation capacity inhabits the xylem sap in maize plants. Nature Communications, 13 (1), 3361. Zhang, X., Tong, J., Dong, M., Akhtar, K., & He, B. (2022). Isolation, identification and characterization of nitrogen fixing endophytic bacteria and their effects on cassava production. PeerJ, 10. https://doi.org/10.7717/peerj.12677 |
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Bernal Giraldo, Adriana Jimenavirtual::261-1Barrera Garzón, Claudia CamilaPalacio Rodríguez, ValeriaFacultad de Ciencias::Interacciones Moleculares Microbianas2024-01-31T14:57:24Z2024-01-31T14:57:24Z2024-01-30https://hdl.handle.net/1992/73671instname:Universidad de los Andesreponame:Repositorio Institucional Sénecarepourl:https://repositorio.uniandes.edu.co/Las bacterias promotoras de crecimiento de rizósfera cuentan con diferentes mecanismos de acción que benefician el crecimiento de las plantas, posicionándolas con un papel fundamental para la formulación de bioproductos que puedan servir para sustituir fertilizantes químicos. Dentro de los beneficios que pueden conferir estas bacterias a las plantas se resalta su capacidad de fijar nitrógeno atmosférico N2. El nitrógeno en su forma atmosférica no es asimilable por las plantas, por lo que las bacterias son aquellas encargadas de realizar su fijación y convertirlo en especies asimilables como amonio NH4+. El mecanismo que permite realizar la fijación de nitrógeno se lleva acabo por la acción del complejo de la nitrogenasa, enzima que es codificada por diferentes genes nif y es inhibida por la presencia de oxígeno. Teniendo en cuenta que el nitrógeno es uno de los macronutrientes esenciales para el desarrollo de las plantas, esta investigación busca aislar bacterias fijadoras de nitrógeno en rizósfera de yuca. Esto, por medio del aislamiento en medios de cultivo libre de nitrógeno y el uso de PCR para evaluar la amplificación del gen nifH, metodología que permitió encontrar diez bacterias con esta capacidad. Adicionalmente, se evaluó la capacidad de estas bacterias para solubilizar fosfatos y producir sideróforos con el fin de ahondar en su posible acción como bacterias promotoras de crecimiento. Se logró identificar tres bacterias con mayor potencial como bacterias benéficas con capacidad de fijación de nitrógeno atmosférico, solubilización de fosfatos y producción de sideróforos: Acinetobacter baumanii, Pseudoxanthomonas sp. y Agrobacterium sp.MicrobiólogoPregrado29 páginasapplication/pdfspaUniversidad de los AndesMicrobiologíaFacultad de CienciasDepartamento de Ciencias Biológicashttps://repositorio.uniandes.edu.co/static/pdf/aceptacion_uso_es.pdfinfo:eu-repo/semantics/openAccesshttp://purl.org/coar/access_right/c_abf2Aislamiento y caracterización de bacterias fijadoras de nitrógeno en rizósfera de yuca (Manihot esculenta)Trabajo de grado - Pregradoinfo:eu-repo/semantics/bachelorThesisinfo:eu-repo/semantics/acceptedVersionhttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1fTexthttp://purl.org/redcol/resource_type/TPPGPRFijación de nitrógenoManihot esculentaSolubilización de fosfatosProducción de sideróforosMicrobiologíaAguado-Santacruz,G.A.,Moreno-Gómez,B.,Jiménez-Francisco,B.,García-Moya,E.,& Preciado-Ortiz, R.E.(2012).Impactodelossideróforosmicrobianosyfitosidéforos en la asimilación de hierro por las plantas:una síntesis. Revista fitotecnia mexicana, 35 (1), 9-21.Ajijah, N.,Fiodor,A.,Pandey,A.K.,Rana,A.,&Pranaw,K.(2023).Plant growth-promoting bacteria(PGPB) with biofilm-forming ability: A multifaceted agent for Sustainable Agriculture. Diversity, 15 (1), 112. https://doi.org/10.3390/d15010112Ali, S.S., Kornaros, M., Manni, A., Al-Tohamy, R., El-Shanshoury, A.E.-R., Matter, I.M., Elsamahy, T., Sobhy, M.,&Sun, J.(2021).Advances in microorganisms-based bio-fertilizers: Major mechanisms and applications. Biofertilizers, 371-385. https://doi.org/10.1016/b978-0-12-821667-5.00023-3Andrade, R.S.,Rivera Vasco,T.C.,Labarta,R & González,C.(2022).Producción de Yuca en Colombia:¿Que tanto conocemos? https://cgspace.cgiar.org/handle/10568/125826Babalola, O.O.(2010).Beneficial bacteria of agricultural importance. Biotechnology Letters,32 (11), 1559-1570. https://doi.org/10.1007/s10529-010-0347-0Bazzi, A.M., Al-Tawfiq, J.A & Rabaan,A.A.(2017). Misinterpretation of gram stain from the stationary growth phase of positive blood cultures for Brucella and Acinetobacter species. The Open Microbiology Journal, 11 (1), 126-131. https://doi.org/10.2174/1874285801711010126Berg, G.,Eberl,L.,& Hartmann,A.(2005).The Rhizosphere as a reservoir for opportunistic human pathogenic bacteria. Environmental Microbiology, 7 (11), 1673-1685. https://doi.org/10.1111/j.1462-2920.2005.00891.xCastellano-Hinojosa,A.,Correa-Galeote,D.,Palau,J.,& Bedmar,E.J.(2015).Isolation of N2-fixing rhizobacteria from Lolium Perenne and evaluating their plant growth promoting traits. Journal of Basic Microbiology, 56 (1), 85-91. https://doi.org/10.1002/jobm.201500247Cheng, Y.,Narayanan,M.,Shi,X.,Chen,X.,Li,Z.,&Ma,Y.(2023).Phosphate-solubilizing bacteria: Their agroecological function and optimistic application for enhancing agro-productivity. Science of The Total Environment, 901, 166468. https://doi.org/10.1016/j.scitotenv.2023.166468Chialva,M.,& Bonfante,P.(2018).Plant microbiota: from model plants to Mediterranean crops. Phytopathologia Mediterranea, 57 (1). https://doi.org/10.14601/Phytopathol_Mediterr-22052Chukwuneme,C.F.,Babalola,O.O.,Kutu,F.R.,&Ojuederie,O.B.(2020). Characterization of actinomycetes isolates for plant growth promoting traits and their effects on drought tolerance in maize. Journal ofPlantInteractions, 15 (1), 93-105. https://doi.org/10.1080/17429145.2020.1752833Fitriyanti, D.,Mubarik,N.R.,& Tjahjoleksono, A.(2017).Characterization and identification of phosphate solubilizing bacteria isolate GPC3.7 from limestone mining region. IOP Conference Series: Earth and Environmental Science, 58, 012016. https://doi.org/10.1088/1755-1315/58/1/012016Gaby, J.C.,& Buckley, D.H.(2012).A comprehensive evaluation of PCR primers to amplify the nifH gene of nitrogenase.Gaby, J.C.,& Buckley, D.H.(2014).A comprehensive aligned nifh gene database: A multi-purpose tool for studies of nitrogen-fixing bacteria. Database, 2014. https://doi.org/10.1093/database/bau001Glick, B.R.(2012).Plant growth-promoting bacteria: Mechanisms and applications. Scientifica, 2012, 1-15. https://doi.org/10.6064/2012/963401Gómez Osorio, L.M.(2017).Aislamiento de Bacterias solubilizadoras de fosfato nativas de la ciénaga de mallorquín en el departamento del atlántico-colombia. Microciencia, 6,11-19. https://doi.org/10.18041/2323-0320/microciencia.0.2017.3657Gordillo Altamirano, F., Forsyth, J.H., Patwa, R., Kostoulias, X.,Trim, M., Subedi, D., Archer, S.K., Morris, F.C., Oliveira, C., Kielty, L.,& et al.(2021).Bacteriophage-resistant Acinetobacter baumannii are resensitized to antimicrobials. NatureMicro-biology, 6 (2), 157-161. https://doi.org/10.1038/s41564-020-00830-7Ha, J., Gao, Y., Zhang, R., Li, K., Zhang, Y., Niu, X., Chen, X., Luo, K.,&Chen, Y.(2021).Diversity of the bacterial microbiome associated with the endosphere and rhizosphere of different cassava (manihot esculenta Crantz)genotypes. Frontiers in Microbiology,12. https://doi.org/10.3389/fmicb.2021.729022Himedia. (s.f.-a).Ashby’s Mannitol Agar[[Accessed28-08-2023]]. https://www.himedialabs.com/us/m706-ashbys-mannitol-agar.htmlHimedia. (s.f.-b).Jensen’sMedium(Agar)[[Accessed28-08-2023]]. https://www.himedialabs.com/us/m710-jensens-medium-agar.htmlHuda, N.u.,Tanvir,R.,Badar,J.,Ali,I.,&Rehman,Y.(2022).Arsenic-resistant plant growth promoting Pseudoxanthomonas Mexicana S254 and Stenotrophomonas maltophilia S255 isolated from agriculture soil contaminated by industrial effluent. Sustainability, 14 (17), 10697. https://doi.org/10.3390/su141710697Junier, P., Molina, V., Dorador, C.,Hadas, O., Kim, O.S.,Junier,T.,Witzel,K.P.,&Imhoff,J. F.(2009).Phylogenetic and functional marker genes to study ammonia-oxidizing microorganisms (AOM) in the environment. Applied Microbiology and Biotechnology,85 (3), 425-440. https://doi.org/10.1007/s00253-009-2228-9Kanvinde, L., & Sastry, G. R. (1990). agrobacterium tumefaciens is a diazotrophic bacterium. Applied and Environmental Microbiology, 56 (7), 2087-2092. https://doi.org/10.1128/ aem.56.7.2087-2092.1990Korenblum, E., Massalha, H., & Aharoni, A. (2022). Plant–microbe interactions in the rhizosphere via a circular metabolic economy. The Plant Cell, 34 (9), 3168-3182. https://doi.org/10.1093/plcell/koac163Lery, L. M., Bitar, M., Costa, M. G., Rössle, S. C., & Bisch, P. M. (2010). Unraveling the molecular mechanisms of nitrogenase conformational protection against oxygen in diazotrophic bacteria. BMC Genomics, 11 (Suppl 5). https://doi.org/10.1186/1471- 2164-11-s5-s7Louden, B. C., Haarmann, D., & Lynne, A. M. (2011). Use of Blue Agar CAS Assay for Siderophore Detection. Journal of Microbiology & Biology Education, 12 (1), 51-53. https://doi.org/10.1128/jmbe.v12i1.249Mao, D.-P., Zhou, Q., Chen, C.-Y., & Quan, Z.-X. (2012). Coverage evaluation of universal bacterial primers using the metagenomic datasets. BMC Microbiology, 12 (1). https://doi.org/10.1186/1471-2180-12-66Mathesius, U. (2022). Are legumes different? origins and consequences of evolving nitrogen fixing symbioses. Journal of Plant Physiology, 276, 153765. https://doi.org/10.1016/ j.jplph.2022.153765Milipore. (s.f.). https://www.sigmaaldrich.com/CO/es/product/sial/40560Mohapatra, B., Sar, P., Kazy, S. K., Maiti, M. K., & Satyanarayana, T. (2018). Taxonomy and physiology of Pseudoxanthomonas Arseniciresistens sp. nov., an arsenate and nitrate-reducing novel Gammaproteobacterium from arsenic contaminated groundwa- ter, India. PLOS ONE, 13 (3). https://doi.org/10.1371/journal.pone.0193718Muangthong, A., Youpensuk, S., & Rerkasem, B. (2015). Isolation and characterisation of endophytic nitrogen fixing bacteria in sugarcane. Tropical life sciences research, 26 (1), 41.Mulissa, J. M., Carolin, R. L., Ruth, A. S., & Fassil, A. (2015). Characterization of phosphate solubilizing rhizobacteria isolated from lentil growing areas of Ethiopia. African Jour- nal of Microbiology Research, 9 (25), 1637-1648. https://doi.org/10.5897/ajmr2015.7473Organización de las Naciones Unidas, O. (2018). La Agenda 2030 y los Objetivos de Desarrollo Sostenible Una oportunidad para América Latina y el Caribe. https://repositorio.cepal.org/server/api/core/bitstreams/cb30a4de- 7d87-4e79-8e7a-ad5279038718/contentRacedo Pulido, C. (2023). Caracterización de bacterias aisladas de la rizosfera de sacha inchi (Plukenetia volubilis) asociadas a la promoción de crecimiento vegetal y protección contra estrés hídrico (inf.téc.). Universidad de los Andes. http: //hdl.handle.net/ 1992/69282Ramakrishna, W., Yadav, R., & Li, K. (2019). Plant growth promoting bacteria in agriculture: Two sides of a coin. Applied Soil Ecology, 138, 10-18. https://doi.org/10.1016/j.apsoil. 2019.02.019Rokhbakhsh-Zamin, F., Sachdev, D., Kazemi-Pour, N., Engineer, A., Pardesi, K. R., Zinjarde,S. S., Dhakephalkar, P. K., & Chopade, B. A. (2011). Characterization of plant-growth-promoting traits of Acinetobacter species isolated from rhizosphere of Pennisetum glaucum. Journal of Microbiology and Biotechnology, 21 (6), 556-566. https://doi.org/ 10.4014/jmb.1012.12006Sachdev, D., Nema, P., Dhakephalkar, P., Zinjarde, S., & Chopade, B. (2010). Assessment of 16S rrna gene-based phylogenetic diversity and promising plant growth-promoting traits of Acinetobacter community from the rhizosphere of wheat. Microbiological Re- search, 165 (8), 627-638. https://doi.org/10.1016/j.micres.2009.12.002Sangoquiza-Caiza, C. A., Pincay-Verdezoto, A. K., Park, C. H., & Zambrano-Mendoza, J. L. (2023). Diversity of nitrogen-fixing and phosphorus-solubilizing bacteria associated with the rhizosphere of Andean maize in Ecuador. Brazilian Journal of Biology, 83. https://doi.org/10.1590/1519-6984.273632Setti, B., & Bencheikh, M. (2013). Isolation And Characterization Of The Agrobacterium Tumefaciens From Almond Nurseries In Chlef Region In Western Algeria. European Scientific Journal, 9 (30).Shomi, F. Y., Uddin, M. B., & Zerin, T. (2021). Isolation and characterization of nitrogen-fixing bacteria from soil sample in Dhaka, Bangladesh. Stamford Journal of Microbiology, 11 (1), 11-13.Trivedi, P., Leach, J. E., Tringe, S. G., Sa, T., & Singh, B. K. (2020). Plant–Microbiome Interactions: From Community Assembly to Plant Health. Nature Reviews Microbiology, 18 (11), 607-621. https://doi.org/10.1038/s41579-020-0412-1Vázquez-López, R., Solano-Gálvez, S. G., Juárez Vignon-Whaley, J. J., Abello Vaamonde, J. A., Padró Alonzo, L. A., Rivera Reséndiz, A., Muleiro Álvarez, M., Vega López, E. N., Franyuti-Kelly, G., Álvarez-Hernández, D. A., & et al. (2020). Acinetobacter baumannii resistance: A real challenge for clinicians. Antibiotics, 9 (4), 205. https://doi.org/10.3390/antibiotics9040205Vejan, P., Abdullah, R., Khadiran, T., Ismail, S., & Nasrulhaq Boyce, A. (2016). Role of plant growth promoting rhizobacteria in agricultural sustainability—a review. Molecules, 21 (5), 573. https://doi.org/10.3390/molecules21050573Vinnik, V., Zhang, F., Park, H., Cook, T. B., Throckmorton, K., Pfleger, B. F., Bugni, T. S., & Thomas, M. G. (2020). Structural and biosynthetic analysis of the fabrubactins, unusual siderophores from agrobacterium fabrum strain C58. ACS Chemical Biology, 16 (1), 125-135. https://doi.org/10.1021/acschembio.0c00809Vocciante, M., Grifoni, M., Fusini, D., Petruzzelli, G., & Franchi, E. (2022). The role of Plant Growth-promoting rhizobacteria (PGPR) in mitigating plant’s environmental stresses. Applied Sciences, 12 (3), 1231. https://doi.org/10.3390/app12031231Wakarera, P. W., Ojola, P., & Njeru, E. M. (2022). Characterization and diversity of native Azotobacter spp. isolated from semi-arid agroecosystems of Eastern Kenya. Biology Letters, 18 (3), 20210612.Zapata, T., Galindo, D. M., Corrales-Ducuara, A. R., & Ocampo-Ibáñez, I. D. (2021a). The Diversity of Culture-Dependent Gram-Negative Rhizobacteria Associated with Manihot esculenta Crantz Plants Subjected to Water-Deficit Stress. Diversity, 13 (8). https://doi.org/10.3390/d13080366Zebua, A., Guchi, H., & Sembiring, M. (2020). Isolation of non-symbiotic Nitrogen-fixing bacteria on andisol land affected by Sinabung eruption. IOP Conference Series: Earth and Environmental Science, 454 (1), 012167.Zhang, L., Zhang, M., Huang, S., Li, L., Gao, Q., Wang, Y., Zhang, S., Huang, S., Yuan, L., Wen, Y., et al. (2022). A highly conserved core bacterial microbiota with nitrogen- fixation capacity inhabits the xylem sap in maize plants. Nature Communications, 13 (1), 3361.Zhang, X., Tong, J., Dong, M., Akhtar, K., & He, B. (2022). Isolation, identification and characterization of nitrogen fixing endophytic bacteria and their effects on cassava production. PeerJ, 10. https://doi.org/10.7717/peerj.12677201822915Publicationhttps://scholar.google.es/citations?user=vQ9yFZoAAAAJvirtual::261-10000-0002-3557-697Xvirtual::261-1https://scienti.minciencias.gov.co/cvlac/visualizador/generarCurriculoCv.do?cod_rh=0000622354virtual::261-14e93f81c-d517-4226-80b7-2c5d693a24f4virtual::261-14e93f81c-d517-4226-80b7-2c5d693a24f4virtual::261-1ORIGINALautorizacion tesis (2).pdfautorizacion tesis (2).pdfHIDEapplication/pdf1475067https://repositorio.uniandes.edu.co/bitstreams/79845da9-9940-48c4-b3ed-b6b632118356/download8e99c6974873e592778c6c2f19f52a66MD51Aislamiento y caracterización de bacterias fijadoras de nitrógeno en rizósfera de yuca (Manihot esculenta).pdfAislamiento y caracterización de bacterias fijadoras de nitrógeno en rizósfera de yuca (Manihot esculenta).pdfapplication/pdf2395504https://repositorio.uniandes.edu.co/bitstreams/9a61e56e-d976-4812-be30-88bababf18de/download65140cf9186b4d505ab5447c2ca3232aMD52LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; 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