Ensayo de la Proteasa 3C de rhinovirus humano para el clivaje del rótulo de histidina de proteínas como dihidroorotato deshidrogenasa (DHODH) de toxoplasma gondii
Acercamiento metodológico para la producción a bajo costo de la Proteasa 3C HRV, describiendo el proceso desde la obtención del plásmido hasta la utilización de la proteasa en ensayos de proteólisis.
- Autores:
-
Tovar Martínez, Laura Valentina
- Tipo de recurso:
- Trabajo de grado de pregrado
- Fecha de publicación:
- 2022
- Institución:
- Universidad de los Andes
- Repositorio:
- Séneca: repositorio Uniandes
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- http://hdl.handle.net/1992/59153
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Este organismo posee un rango de hospederos amplio, incluyendo a los humanos. Las infecciones suelen ser asintomáticas, pero pueden llegar a ser mortales dependiendo del estado inmunológico de la persona. Se han estudiado múltiples rutas metabólicas de este organismo para encontrar blancos terapéuticos, siendo un posible blanco la enzima Dihidroorotato deshidrogenasa (DHODH), involucrada en el metabolismo de novo de pirimidinas. Para estudiar apropiadamente esta enzima es necesaria su cristalización, sin embargo, la enzima recombinante suele generarse con un rótulo para fácil purificación, y este rótulo puede interferir con la cristalización. Por lo anterior, en este trabajo se probó la capacidad de la proteasa 3C de Rhinovirus humano para retirar el rótulo de histidinas de una proteína recombinante (gelsolina).MicrobiólogoPregradoPurificación de Dihidroorotato Deshidrogenasa de Toxoplasma gondii24 páginasapplication/pdfspaUniversidad de los AndesMicrobiologíaFacultad de CienciasDepartamento de Ciencias BiológicasEnsayo de la Proteasa 3C de rhinovirus humano para el clivaje del rótulo de histidina de proteínas como dihidroorotato deshidrogenasa (DHODH) de toxoplasma gondiiTrabajo de grado - Pregradoinfo:eu-repo/semantics/bachelorThesisinfo:eu-repo/semantics/acceptedVersionhttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1fTexthttp://purl.org/redcol/resource_type/TPProteasaPurificaciónRótulo de HistidinaToxoplasma gondiiPurificación de proteínasMicrobiologíaBigna, J. J., Tochie, J. N., Tounouga, D. N., Bekolo, A. O., Ymele, N. S., Youda, E. L., Sime, P.S., & Nansseu, J. R. (2020). Global, regional, and country seroprevalence of Toxoplasma gondii in pregnant women: a systematic review, modelling and meta- analysis. Scientific Reports, 10(1), 1-10. https://doi.org/10.1038/s41598-020-69078- 9Bhargav, S. P., Vahokoski, J., Kumpula, E. P., & Kursula, I. (2013). Crystallization and preliminary structural characterization of the two actin isoforms of the malaria parasite. Acta crystallographica. Section F, Structural biology and crystallization communications, 69(Pt 10), 1171-1176. https://doi.org/10.1107/S174430911302441XBjorndahl, T. C., Andrew, L. C., Semenchenko, V., & Wishart, D. S. (2007). NMR solution structures of the apo and peptide-inhibited human rhinovirus 3C protease (Serotype 14): structural and dynamic comparison. Biochemistry, 46(45), 12945-12958. https://doi.org/10.1021/bi7010866Dubey, J. P. (2020). Chapter 1 - The history and life cycle of Toxoplasma gondii. In L. M. Weiss & K. Kim (Eds.), Toxoplasma gondii (Third Edition) (Third Edit, pp. 1-19). 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Retrieved May 11, 2022, from http://www.scielo.org.co/scielo.phpscript=sci_arttext&pid=S0124-0642002000400003&lng=en&tlng=es.Hegewald, J., Gross, U., & Bohne, W. (2013). Identification of dihydroorotate dehydrogenase as a relevant drugtarget for 1-hydroxyquinolones in toxoplasma gondii. Molecular and Biochemical Parasitology, 190(1), 6-15. https://doi.org/10.1016/j.molbiopara.2013.05.008Hortua, A. M., Herrera, D. C., Zimmermann, B. H., Fox, B. A., & Bzik, D. J. (2016). Toxoplasma gondii Mitochondrial Dihydroorotate Dehydrogenase. 84(10), 2974-2981. https://doi.org/10.1128/IAI.00187-16.EditorNoirclerc-Savoye, M., Flayhan, A., Pereira, C., Gallet, B., Gans, P., Ebel, C., & Breyton, C. (2015). Tail proteins of phage T5: investigation of the effect of the His6-tag position, from expression to crystallisation. Protein expression and purification, 109, 70-78. https://doi.org/10.1016/j.pep.2015.02.003Kiefhaber T, Rudolph R, Kohler HH, Buchner J. (1991). Protein aggregation in vitro and in vivo: a quantitative model of the kinetic competition between folding and aggregation. Biotechnology (N Y) 1991;9:825-829. doi: 10.1038/nbt0991-825.Kurien, B. T., & Scofield, R. H. (2012). Common artifacts and mistakes made in electrophoresis. Methods in molecular biology (Clifton, N.J.), 869, 633-640. https://doi.org/10.1007/978-1-61779-821-4_58Rauwolf, S., Steegmüller, T., Schwaminger, S. P., & Berensmeier, S. (2021). Purification of a peptide tagged protein via an affinity chromatographic process with underivatized silica. Engineering in life sciences, 21(10), 549-557. https://doi.org/10.1002/elsc.202100019Mogk A, Mayer MP, Deuerling E. (2002). Mechanisms of protein folding: molecular chaperones and their application in biotechnology. Chembiochem. 2002;3:807-814. doi: 10.1002/1439-7633(20020902)3:9<807::AID-CBIC807>3.0.CO;2-A.Sato, D. et al., Structural and Biochemical Features of Eimeria tenella Dihydroorotate Dehydrogenase, a Potential Drug Target. Genes 11(12), 1468 (2020). https://doi.org/10.3390/genes11121468Singh, A., Maqbool, M., Mobashir, M., & Hoda, N. (2017). Dihydroorotate dehydrogenase: A drug target for the development of antimalarials. European journal of medicinal chemistry, 125, 640-651. https://doi.org/10.1016/j.ejmech.2016.09.085Singh, A., Upadhyay, V., Upadhyay, A.K. et al. (2015). Protein recovery from inclusion bodies of Escherichia coli using mild solubilization process. Microb Cell Fact 14, 41. https://doi.org/10.1186/s12934-015-0222-8Sørensen, H. P., & Mortensen, K. K. (2005). Soluble expression of recombinant proteins in the cytoplasm of Escherichia coli. Microbial cell factories, 4(1), 1. https://doi.org/10.1186/1475-2859-4-1Ullah, R., Shah, M. 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Laura Tovarapplication/pdf333977https://repositorio.uniandes.edu.co/bitstreams/dd63a73c-be28-4d98-8b56-24e016e27165/downloadc6134f1805aceeac02db2f51ff2d55c8MD541992/59153oai:repositorio.uniandes.edu.co:1992/591532024-11-14 14:49:50.872http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/open.accesshttps://repositorio.uniandes.edu.coRepositorio institucional Sénecaadminrepositorio@uniandes.edu.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 |