Microinyección de EdU para la visualización de proliferación celular en larvas de Pez Cebra (Danio rerio)

La investigación cuenta con la aprobación del CICUA para el manejo de uso de modelos animales además de respetar todas las pautas correspondientes al desarrollo del protocolo.

Autores:
Cruz Javela, Laura Sué
Tipo de recurso:
Trabajo de grado de pregrado
Fecha de publicación:
2023
Institución:
Universidad de los Andes
Repositorio:
Séneca: repositorio Uniandes
Idioma:
spa
OAI Identifier:
oai:repositorio.uniandes.edu.co:1992/64092
Acceso en línea:
http://hdl.handle.net/1992/64092
Palabra clave:
Microinyección
EdU
Proliferación
Desarrollo
Biología
Rights
openAccess
License
Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
id UNIANDES2_162a5ebaf80e6930b3acb205385bf3af
oai_identifier_str oai:repositorio.uniandes.edu.co:1992/64092
network_acronym_str UNIANDES2
network_name_str Séneca: repositorio Uniandes
repository_id_str
dc.title.none.fl_str_mv Microinyección de EdU para la visualización de proliferación celular en larvas de Pez Cebra (Danio rerio)
title Microinyección de EdU para la visualización de proliferación celular en larvas de Pez Cebra (Danio rerio)
spellingShingle Microinyección de EdU para la visualización de proliferación celular en larvas de Pez Cebra (Danio rerio)
Microinyección
EdU
Proliferación
Desarrollo
Biología
title_short Microinyección de EdU para la visualización de proliferación celular en larvas de Pez Cebra (Danio rerio)
title_full Microinyección de EdU para la visualización de proliferación celular en larvas de Pez Cebra (Danio rerio)
title_fullStr Microinyección de EdU para la visualización de proliferación celular en larvas de Pez Cebra (Danio rerio)
title_full_unstemmed Microinyección de EdU para la visualización de proliferación celular en larvas de Pez Cebra (Danio rerio)
title_sort Microinyección de EdU para la visualización de proliferación celular en larvas de Pez Cebra (Danio rerio)
dc.creator.fl_str_mv Cruz Javela, Laura Sué
dc.contributor.advisor.none.fl_str_mv Garavito Aguilar, Zayra Viviana
Vásquez Vélez, Isabel Cristina
dc.contributor.author.none.fl_str_mv Cruz Javela, Laura Sué
dc.contributor.jury.none.fl_str_mv Valderrama Aguirre, Augusto Elías
Villegas Torres, María Francisca
dc.contributor.researchgroup.es_CO.fl_str_mv Laboratorio de Biología Del Desarrollo (BIOLDES) Universidad de los Andes
dc.subject.keyword.none.fl_str_mv Microinyección
EdU
Proliferación
Desarrollo
topic Microinyección
EdU
Proliferación
Desarrollo
Biología
dc.subject.themes.es_CO.fl_str_mv Biología
description La investigación cuenta con la aprobación del CICUA para el manejo de uso de modelos animales además de respetar todas las pautas correspondientes al desarrollo del protocolo.
publishDate 2023
dc.date.accessioned.none.fl_str_mv 2023-01-23T19:28:09Z
dc.date.available.none.fl_str_mv 2023-01-23T19:28:09Z
dc.date.issued.none.fl_str_mv 2023-01-15
dc.type.es_CO.fl_str_mv Trabajo de grado - Pregrado
dc.type.driver.none.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/bachelorThesis
dc.type.version.none.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/acceptedVersion
dc.type.coar.none.fl_str_mv http://purl.org/coar/resource_type/c_7a1f
dc.type.content.es_CO.fl_str_mv Text
dc.type.redcol.none.fl_str_mv http://purl.org/redcol/resource_type/TP
format http://purl.org/coar/resource_type/c_7a1f
status_str acceptedVersion
dc.identifier.uri.none.fl_str_mv http://hdl.handle.net/1992/64092
dc.identifier.instname.es_CO.fl_str_mv instname:Universidad de los Andes
dc.identifier.reponame.es_CO.fl_str_mv reponame:Repositorio Institucional Séneca
dc.identifier.repourl.es_CO.fl_str_mv repourl:https://repositorio.uniandes.edu.co/
url http://hdl.handle.net/1992/64092
identifier_str_mv instname:Universidad de los Andes
reponame:Repositorio Institucional Séneca
repourl:https://repositorio.uniandes.edu.co/
dc.language.iso.es_CO.fl_str_mv spa
language spa
dc.relation.references.es_CO.fl_str_mv Briggs, J. P. (2002). The zebrafish: a new model organism for integrative physiology. American Journal of Physiology-Regulatory, Integrative and Comparative Physiology, 282(1), R3-R9.
Cappella, P., Gasparri, F., Pulici, M., & Moll, J. (2008). A novel method based on click chemistry, which overcomes limitations of cell cycle analysis by classical determination of BrdU incorporation, allowing multiplex antibody staining. Cytometry Part A: the journal of the International Society for Analytical Cytology, 73(7), 626-636.
Choi, T. Y., Khaliq, M., Tsurusaki, S., Ninov, N., Stainier, D. Y., Tanaka, M., & Shin, D. (2017). Bone morphogenetic protein signaling governs biliary¿driven liver regeneration in zebrafish through tbx2b and id2a. Hepatology, 66(5), 1616-1630.
Diermeier-Daucher, S., Clarke, S. T., Hill, D., Vollmann-Zwerenz, A., Bradford, J. A., & Brockhoff, G. (2009). Cell type specific applicability of 5-ethynyl-2'- deoxyuridine (EdU) for dynamic proliferation assessment in flow cytometry. Cytometry Part A: The Journal of the International Society for Advancement of Cytometry, 75(6), 535-546.
García, M. A., & Pascual-Teresa, B. D. (2004). Técnicas empleadas para el estudio de la interacción entre agentes antitumorales y el DNA. Oncología (Barcelona), 27(2), 33-43.
Gemberling, M., Bailey, T. J., Hyde, D. R., & Poss, K. D. (2013). The zebrafish as a model for complex tissue regeneration. Trends in Genetics, 29(11), 611-620.
Gilbert, S. F. (2010). Developmental biology. sinauer associates, Inc.
González¿Rosa, J. M., Burns, C. E., & Burns, C. G. (2017). Zebrafish heart regeneration: 15 years of discoveries. Regeneration, 4(3), 105-123.
INSTITUTIONAL ANIMAL CARE AND USE COMMITTEE (IACUC) IACUC / LARC STANDARD PROCEDURES (Fin Clipping Of Zebrafish).
Kapuscinski, J. (1995). DAPI: a DNA-specific fluorescent probe. Biotechnic & histochemistry, 70(5), 220-233.
Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., & Schilling, T. F. (1995). Stages of embryonic development of the zebrafish. Developmental dynamics, 203(3), 253-310.
King, R. S., & Newmark, P. A. (2012). The cell biology of regeneration. Journal of Cell Biology, 196(5), 553-562.
Lele, Z., & Krone, P. H. (1996). The zebrafish as a model system in developmental, toxicological and transgenic research. Biotechnology advances, 14(1), 57-72.
Mahler, J., Filippi, A., & Driever, W. (2010). DeltaA/DeltaD regulate multiple and temporally distinct phases of notch signaling during dopaminergic neurogenesis in zebrafish. Journal of Neuroscience, 30(49), 16621-16635.
Marques, I. J., Lupi, E., & Mercader, N. (2019). Model systems for regeneration: zebrafish. Development, 146(18), dev167692.
Neef, A. B., & Luedtke, N. W. (2011). Dynamic metabolic labeling of DNA in vivo with arabinosyl nucleosides. Proceedings of the National Academy of Sciences, 108(51), 20404-20409.
Norton, W., & Bally-Cuif, L. (2010). Adult zebrafish as a model organism for behavioural genetics. BMC neuroscience, 11(1), 1-11.
Poleo, G., Brown, C. W., Laforest, L., & Akimenko, M. A. (2001). Cell proliferation and movement during early fin regeneration in zebrafish. Developmental dynamics: an official publication of the American Association of Anatomists, 221(4), 380-390.
Poss, K. D., Keating, M. T., & Nechiporuk, A. (2003). Tales of regeneration in zebrafish. Developmental dynamics: an official publication of the American Association of Anatomists, 226(2), 202-210.
Roper, C., & Tanguay, R. L. (2018). Zebrafish as a model for developmental biology and toxicology. In Handbook of developmental neurotoxicology (pp. 143-151). Academic press.
Streisinger, G., Walker, C., Dower, N., Knauber, D., & Singer, F. (1981). Production of clones of homozygous diploid zebra fish (Brachydanio rerio). Nature, 291(5813), 293-296.
Taupin, P. (2007). BrdU immunohistochemistry for studying adult neurogenesis: paradigms, pitfalls, limitations, and validation. Brain research reviews, 53(1), 198-214.
Verduzco, D., & Amatruda, J. F. (2011). Analysis of cell proliferation, senescence, and cell death in zebrafish embryos. Methods in cell biology, 101, 19-38.
Wang, J., Yan, Z., Xing, Y., Lai, K., Wang, J., Yu, D., ... & Yin, S. (2019). A zebrafish model for hearing loss and regeneration induced by blast wave. Journal of Bio-X Research, 2(02), 87-97.
Wong, C. E. D., Hua, K., Monis, S., Saxena, V., Norazit, A., Noor, S. M., & Ekker, M. (2021). gdnf affects early diencephalic dopaminergic neuron development through regulation of differentiation-associated transcription factors in zebrafish. Journal of neurochemistry, 156(4), 481-498.
Yin, C., Evason, K. J., Maher, J. J., & Stainier, D. Y. (2012). The basic helix-loop-helix transcription factor, heart and neural crest derivatives expressed transcript 2, marks hepatic stellate cells in zebrafish: Analysis of stellate cell entry into the developing liver. Hepatology, 56(5), 1958-1970.
dc.rights.license.spa.fl_str_mv Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
dc.rights.uri.*.fl_str_mv https://repositorio.uniandes.edu.co/static/pdf/aceptacion_uso_es.pdf
dc.rights.accessrights.spa.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
dc.rights.coar.spa.fl_str_mv http://purl.org/coar/access_right/c_abf2
rights_invalid_str_mv Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
https://repositorio.uniandes.edu.co/static/pdf/aceptacion_uso_es.pdf
http://purl.org/coar/access_right/c_abf2
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.extent.es_CO.fl_str_mv 22 páginas
dc.format.mimetype.es_CO.fl_str_mv application/pdf
dc.publisher.es_CO.fl_str_mv Universidad de los Andes
dc.publisher.program.es_CO.fl_str_mv Biología
dc.publisher.faculty.es_CO.fl_str_mv Facultad de Ciencias
dc.publisher.department.es_CO.fl_str_mv Departamento de Ciencias Biológicas
institution Universidad de los Andes
bitstream.url.fl_str_mv https://repositorio.uniandes.edu.co/bitstreams/87e55cdc-b18e-4d0a-919c-c652d4a2c329/download
https://repositorio.uniandes.edu.co/bitstreams/0e03a46d-034f-4dba-993e-59806e0a8a07/download
https://repositorio.uniandes.edu.co/bitstreams/c43cb218-f76f-4c90-9874-c02cf7537bca/download
https://repositorio.uniandes.edu.co/bitstreams/e20a45c3-9f26-487c-8fbb-d6c8b58e9fc3/download
https://repositorio.uniandes.edu.co/bitstreams/66efd587-430a-480f-8647-353df7621b73/download
https://repositorio.uniandes.edu.co/bitstreams/85c374ca-118a-478d-9e1f-394a0c39d6ec/download
https://repositorio.uniandes.edu.co/bitstreams/b87ac5a6-4668-47dc-92db-f07138176c9d/download
bitstream.checksum.fl_str_mv e95f015ddd25737ba14def81607f9eb2
ee80c176b4ad0c989934f0f948e163d7
63914d9cbb1f1fe9bed0b7f96dbcd668
ec3c9486cdadd509c0006cf1ecd1fc89
5aa5c691a1ffe97abd12c2966efcb8d6
e2c2bc67a0f54130224935fcaad26f6b
5a83cd8cb95c6c7601aadd400fc9716f
bitstream.checksumAlgorithm.fl_str_mv MD5
MD5
MD5
MD5
MD5
MD5
MD5
repository.name.fl_str_mv Repositorio institucional Séneca
repository.mail.fl_str_mv adminrepositorio@uniandes.edu.co
_version_ 1812133993916661760
spelling Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacionalhttps://repositorio.uniandes.edu.co/static/pdf/aceptacion_uso_es.pdfinfo:eu-repo/semantics/openAccesshttp://purl.org/coar/access_right/c_abf2Garavito Aguilar, Zayra Viviana0aacba38-29e1-454e-80b6-2ba76ef4c8ee600Vásquez Vélez, Isabel Cristina23da20cb-808d-4520-b2d6-70a3760a8f81600Cruz Javela, Laura Sué9299dbf7-89b3-4fac-9707-bc26e3c80e41600Valderrama Aguirre, Augusto ElíasVillegas Torres, María FranciscaLaboratorio de Biología Del Desarrollo (BIOLDES) Universidad de los Andes2023-01-23T19:28:09Z2023-01-23T19:28:09Z2023-01-15http://hdl.handle.net/1992/64092instname:Universidad de los Andesreponame:Repositorio Institucional Sénecarepourl:https://repositorio.uniandes.edu.co/La investigación cuenta con la aprobación del CICUA para el manejo de uso de modelos animales además de respetar todas las pautas correspondientes al desarrollo del protocolo.Con el objetivo de estandarizar el uso del análogo a la timidina 5-etinil-2'-desoxiuridina (EdU) para la observación de proliferación celular en el pez cebra Danio rerio, se generó e implementó un protocolo en estadios tempranos del desarrollo realizando una lesión caudal y posterior microinyección en larvas de la especie. Se analizó el nivel de proliferación celular mediante inmunofluorescencia, se observó igualmente la recuperación tisular en la zona afectada. El protocolo estandarizado en este trabajo será implementado en investigaciones futuras en el laboratorio BIOLDES, donde se espera no solo emplear estadios larvales sino también en adultos. Estos últimos son especialmente utilizados para estudios asociados a regeneración tisular.BiólogoPregradoRegeneración cardiaca en pez cebra22 páginasapplication/pdfspaUniversidad de los AndesBiologíaFacultad de CienciasDepartamento de Ciencias BiológicasMicroinyección de EdU para la visualización de proliferación celular en larvas de Pez Cebra (Danio rerio)Trabajo de grado - Pregradoinfo:eu-repo/semantics/bachelorThesisinfo:eu-repo/semantics/acceptedVersionhttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1fTexthttp://purl.org/redcol/resource_type/TPMicroinyecciónEdUProliferaciónDesarrolloBiologíaBriggs, J. P. (2002). The zebrafish: a new model organism for integrative physiology. American Journal of Physiology-Regulatory, Integrative and Comparative Physiology, 282(1), R3-R9.Cappella, P., Gasparri, F., Pulici, M., & Moll, J. (2008). A novel method based on click chemistry, which overcomes limitations of cell cycle analysis by classical determination of BrdU incorporation, allowing multiplex antibody staining. Cytometry Part A: the journal of the International Society for Analytical Cytology, 73(7), 626-636.Choi, T. Y., Khaliq, M., Tsurusaki, S., Ninov, N., Stainier, D. Y., Tanaka, M., & Shin, D. (2017). Bone morphogenetic protein signaling governs biliary¿driven liver regeneration in zebrafish through tbx2b and id2a. Hepatology, 66(5), 1616-1630.Diermeier-Daucher, S., Clarke, S. T., Hill, D., Vollmann-Zwerenz, A., Bradford, J. A., & Brockhoff, G. (2009). Cell type specific applicability of 5-ethynyl-2'- deoxyuridine (EdU) for dynamic proliferation assessment in flow cytometry. Cytometry Part A: The Journal of the International Society for Advancement of Cytometry, 75(6), 535-546.García, M. A., & Pascual-Teresa, B. D. (2004). Técnicas empleadas para el estudio de la interacción entre agentes antitumorales y el DNA. Oncología (Barcelona), 27(2), 33-43.Gemberling, M., Bailey, T. J., Hyde, D. R., & Poss, K. D. (2013). The zebrafish as a model for complex tissue regeneration. Trends in Genetics, 29(11), 611-620.Gilbert, S. F. (2010). Developmental biology. sinauer associates, Inc.González¿Rosa, J. M., Burns, C. E., & Burns, C. G. (2017). Zebrafish heart regeneration: 15 years of discoveries. Regeneration, 4(3), 105-123.INSTITUTIONAL ANIMAL CARE AND USE COMMITTEE (IACUC) IACUC / LARC STANDARD PROCEDURES (Fin Clipping Of Zebrafish).Kapuscinski, J. (1995). DAPI: a DNA-specific fluorescent probe. Biotechnic & histochemistry, 70(5), 220-233.Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., & Schilling, T. F. (1995). Stages of embryonic development of the zebrafish. Developmental dynamics, 203(3), 253-310.King, R. S., & Newmark, P. A. (2012). The cell biology of regeneration. Journal of Cell Biology, 196(5), 553-562.Lele, Z., & Krone, P. H. (1996). The zebrafish as a model system in developmental, toxicological and transgenic research. Biotechnology advances, 14(1), 57-72.Mahler, J., Filippi, A., & Driever, W. (2010). DeltaA/DeltaD regulate multiple and temporally distinct phases of notch signaling during dopaminergic neurogenesis in zebrafish. Journal of Neuroscience, 30(49), 16621-16635.Marques, I. J., Lupi, E., & Mercader, N. (2019). Model systems for regeneration: zebrafish. Development, 146(18), dev167692.Neef, A. B., & Luedtke, N. W. (2011). Dynamic metabolic labeling of DNA in vivo with arabinosyl nucleosides. Proceedings of the National Academy of Sciences, 108(51), 20404-20409.Norton, W., & Bally-Cuif, L. (2010). Adult zebrafish as a model organism for behavioural genetics. BMC neuroscience, 11(1), 1-11.Poleo, G., Brown, C. W., Laforest, L., & Akimenko, M. A. (2001). Cell proliferation and movement during early fin regeneration in zebrafish. Developmental dynamics: an official publication of the American Association of Anatomists, 221(4), 380-390.Poss, K. D., Keating, M. T., & Nechiporuk, A. (2003). Tales of regeneration in zebrafish. Developmental dynamics: an official publication of the American Association of Anatomists, 226(2), 202-210.Roper, C., & Tanguay, R. L. (2018). Zebrafish as a model for developmental biology and toxicology. In Handbook of developmental neurotoxicology (pp. 143-151). Academic press.Streisinger, G., Walker, C., Dower, N., Knauber, D., & Singer, F. (1981). Production of clones of homozygous diploid zebra fish (Brachydanio rerio). Nature, 291(5813), 293-296.Taupin, P. (2007). BrdU immunohistochemistry for studying adult neurogenesis: paradigms, pitfalls, limitations, and validation. Brain research reviews, 53(1), 198-214.Verduzco, D., & Amatruda, J. F. (2011). Analysis of cell proliferation, senescence, and cell death in zebrafish embryos. Methods in cell biology, 101, 19-38.Wang, J., Yan, Z., Xing, Y., Lai, K., Wang, J., Yu, D., ... & Yin, S. (2019). A zebrafish model for hearing loss and regeneration induced by blast wave. Journal of Bio-X Research, 2(02), 87-97.Wong, C. E. D., Hua, K., Monis, S., Saxena, V., Norazit, A., Noor, S. M., & Ekker, M. (2021). gdnf affects early diencephalic dopaminergic neuron development through regulation of differentiation-associated transcription factors in zebrafish. Journal of neurochemistry, 156(4), 481-498.Yin, C., Evason, K. J., Maher, J. J., & Stainier, D. Y. (2012). The basic helix-loop-helix transcription factor, heart and neural crest derivatives expressed transcript 2, marks hepatic stellate cells in zebrafish: Analysis of stellate cell entry into the developing liver. Hepatology, 56(5), 1958-1970.201712735PublicationTHUMBNAILTrabajoDeGrado_LauraSueCruzJavela.pdf.jpgTrabajoDeGrado_LauraSueCruzJavela.pdf.jpgIM Thumbnailimage/jpeg5888https://repositorio.uniandes.edu.co/bitstreams/87e55cdc-b18e-4d0a-919c-c652d4a2c329/downloade95f015ddd25737ba14def81607f9eb2MD55Formato de autorizacio¿n entrega de tesisFirmado.pdf.jpgFormato de autorizacio¿n entrega de tesisFirmado.pdf.jpgIM Thumbnailimage/jpeg16314https://repositorio.uniandes.edu.co/bitstreams/0e03a46d-034f-4dba-993e-59806e0a8a07/downloadee80c176b4ad0c989934f0f948e163d7MD57ORIGINALTrabajoDeGrado_LauraSueCruzJavela.pdfTrabajoDeGrado_LauraSueCruzJavela.pdfTrabajo de gradoapplication/pdf520314https://repositorio.uniandes.edu.co/bitstreams/c43cb218-f76f-4c90-9874-c02cf7537bca/download63914d9cbb1f1fe9bed0b7f96dbcd668MD52Formato de autorizacio¿n entrega de tesisFirmado.pdfFormato de autorizacio¿n entrega de tesisFirmado.pdfHIDEapplication/pdf326888https://repositorio.uniandes.edu.co/bitstreams/e20a45c3-9f26-487c-8fbb-d6c8b58e9fc3/downloadec3c9486cdadd509c0006cf1ecd1fc89MD53LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-81810https://repositorio.uniandes.edu.co/bitstreams/66efd587-430a-480f-8647-353df7621b73/download5aa5c691a1ffe97abd12c2966efcb8d6MD51TEXTTrabajoDeGrado_LauraSueCruzJavela.pdf.txtTrabajoDeGrado_LauraSueCruzJavela.pdf.txtExtracted texttext/plain38897https://repositorio.uniandes.edu.co/bitstreams/85c374ca-118a-478d-9e1f-394a0c39d6ec/downloade2c2bc67a0f54130224935fcaad26f6bMD54Formato de autorizacio¿n entrega de tesisFirmado.pdf.txtFormato de autorizacio¿n entrega de tesisFirmado.pdf.txtExtracted texttext/plain1205https://repositorio.uniandes.edu.co/bitstreams/b87ac5a6-4668-47dc-92db-f07138176c9d/download5a83cd8cb95c6c7601aadd400fc9716fMD561992/64092oai:repositorio.uniandes.edu.co:1992/640922023-10-10 18:24:47.004https://repositorio.uniandes.edu.co/static/pdf/aceptacion_uso_es.pdfopen.accesshttps://repositorio.uniandes.edu.coRepositorio institucional Sénecaadminrepositorio@uniandes.edu.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

Publicaciones similares