Purificación de la enzima homoserina deshidrogenasa de Malassezia furfur y detección de treonina como inhibidor competitivo a partir de la actividad enzimática y los parámetros cinéticos de la enzima

Las especies de Malassezia son levaduras dependientes de los lípidos y lipofílicas pertenecientes a la microbiota de la piel de los humanos y animales, comúnmente asociadas con enfermedades dermatológicas crónicas. La enzima homoserina deshidrogenasa (HSD) juega un papel importante en el metabolismo de Malassezia furfur, y estudios previos la han reportado como blanco para impedir el crecimiento de este género, así mismo, se ha visto que la treonina tiene una capacidad inhibidora sobre esta enzima. De esta forma, en este estudio se evaluó la actividad enzimática de la HSD frente al aminoácido treonina y se determinó que tipo de inhibidor era. La purificación se realizó mediante la técnica de Dynabeads, a partir de una cepa de Escherichia coli con el clon especifico de HSD, y la medición enzimática se realizó con un kit especifico de cuantificación de NADH, usando varias concentraciones de sustrato y con la presencia del inhibidor. La actividad enzimática fue medida con éxito demostrando la presencia de la HSD en las muestras purificadas, además, se lograron calcular los parámetros cinéticos para una cinética enzimática de Michaelis Menten, con la ausencia y presencia del inhibidor los cuales arrojaron resultados de Vmax de 0.0116 mM/min y Km de 29.72 mM, y Vmax de 0.0137 mM/min y Km de 38.93 mM, respectivamente. Lo anterior, permitió concluir que la treonina actúa como un inhibidor competitivo para el sustrato usado, etanol, por el efecto creciente que tiene sobre el parámetro Km

• Autores: Rodríguez Simbaqueba, Natalia
• Tipo de recurso: Trabajo de grado de pregrado
• Fecha de publicación: 2018
• Institución: Universidad de los Andes
• Repositorio: Séneca: repositorio Uniandes
• Idioma: spa
• OAI Identifier: oai:repositorio.uniandes.edu.co:1992/39716
• Acceso en línea: http://hdl.handle.net/1992/39716
• Palabra clave: Enzimas; Homoserina deshidrogenasa; Malassezia furfur; Microbiología; Química
• Rights: openAccess
• License: http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/