Caracterización de un modelo murino de cultivos primarios de ganglio trigeminal enriquecido en neuronas para el estudio del efecto antiviral del interferón-β frente al virus Herpes simple tipo 1

Objetivo: Caracterizar un cultivo primario de ganglio trigeminal (GT) enriquecido en neuronas y evaluar la expresión de interferón- y su actividad frente a la infección con Herpes simple tipo 1 (HSV-1). Materiales y métodos: El porcentaje de neuronas fue determinado por inmunocitoquímica para neurof...

Full description

Autores:
Low-Calle, Ana María
Prada Arismendy, Jeanette
Castellanos, Jaime
Tipo de recurso:
Fecha de publicación:
2014
Institución:
Universidad El Bosque
Repositorio:
Repositorio U. El Bosque
Idioma:
eng
OAI Identifier:
oai:repositorio.unbosque.edu.co:20.500.12495/1637
Acceso en línea:
http://hdl.handle.net/20.500.12495/1637
http://dx.doi.org/10.1016/j.infect.2014.02.001
Palabra clave:
HSV-1
Ganglio trigeminal
Interferón-β
Neuronas
Inmunohistoquímica
Enfermedades virales del sistema nervioso central
Rights
License
Acceso cerrado
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description Objetivo: Caracterizar un cultivo primario de ganglio trigeminal (GT) enriquecido en neuronas y evaluar la expresión de interferón- y su actividad frente a la infección con Herpes simple tipo 1 (HSV-1). Materiales y métodos: El porcentaje de neuronas fue determinado por inmunocitoquímica para neurofilamento. Los cultivos fueron tratados con interferón- e infectados con HSV-1, y se cuantificaron las células positivas para antígeno viral por inmunocitoquímica y la expresión de interferón- por PCR cuantitativa. Resultados: El cultivo presentó un 15% de neuronas y 85% de células no neuronales. Se encontró efecto citopático, asociado a una alta diseminación de la infección (72,9% neuronas y 48,3% de células no neuronales positivas para antígeno viral). El interferón- evitó la aparición de efecto citopático y disminuyó las células infectadas a 16,7% en neuronas y a 7,8% las células no neuronales. La infección viral incrementó la expresión de transcritos de interferón- 18,2 veces a las 6 h de infección, mientras que a las 18 h post infección el tratamiento con interferón incrementó esta expresión 3,7 veces. Discusión: Los cultivos presentaron un 15% de neuronas, lo cual es 10 veces más que en otros cultivos reportados. Las células no neuronales representan el 85% de las células del cultivo, y se evidenció que todos los tipos de células se infectaron; similar a lo que ha sido reportado durante infecciones agudas in vivo. Adicionalmente, el interferón- disminuyó el porcentaje de células infectadas y evitó la aparición de efecto citopático, similar a lo que ha sido reportado en cultivos de GT porcino. Conclusiones: Se caracterizó un modelo de cultivo primario de GT enriquecido en neuronas. Interferón- protegió las células del efecto citopático y la diseminación viral mientras que la infección viral incrementó la expresión de interferón-. Por lo tanto, el interferón- ejerció un papel antiviral importante frente al HSV-1 en estos cultivos.
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Se encontró efecto citopático, asociado a una alta diseminación de la infección (72,9% neuronas y 48,3% de células no neuronales positivas para antígeno viral). El interferón- evitó la aparición de efecto citopático y disminuyó las células infectadas a 16,7% en neuronas y a 7,8% las células no neuronales. La infección viral incrementó la expresión de transcritos de interferón- 18,2 veces a las 6 h de infección, mientras que a las 18 h post infección el tratamiento con interferón incrementó esta expresión 3,7 veces. Discusión: Los cultivos presentaron un 15% de neuronas, lo cual es 10 veces más que en otros cultivos reportados. Las células no neuronales representan el 85% de las células del cultivo, y se evidenció que todos los tipos de células se infectaron; similar a lo que ha sido reportado durante infecciones agudas in vivo. Adicionalmente, el interferón- disminuyó el porcentaje de células infectadas y evitó la aparición de efecto citopático, similar a lo que ha sido reportado en cultivos de GT porcino. Conclusiones: Se caracterizó un modelo de cultivo primario de GT enriquecido en neuronas. Interferón- protegió las células del efecto citopático y la diseminación viral mientras que la infección viral incrementó la expresión de interferón-. Por lo tanto, el interferón- ejerció un papel antiviral importante frente al HSV-1 en estos cultivos.Objective: To characterize a neuron-enriched primary TG culture and evaluate interferon- expression and activity after HSV-1 infection. Materials and methods: The percentage of neurons present in cultures was assessed by neurofilament immunocytochemistry. Cultures were treated with interferon- and infected with HSV-1, then viral antigen positive cells were counted and interferon- expression was assessed by quantitative PCR. Results: The culture contained 15% neurons and 85% non-neuronal cells. A cytopathic effect was observed, associated with high viral spread (72.9% neurons and 48.3% non-neuronal cells were positive for viral antigen). Interferon- treatment impaired the cytopathic effect and decreased the infected neurons to 16.7% and infected non-neuronal cells to 7.8%. Viral infection at 6 h postinfection significantly increased the interferon- transcripts by 18.2 fold, while at 18 h postinfection Interferon pre-treatment in infected cultures increased interferon- transcription by 3.7 fold. Discussion: This culture model contained 15% neurons, which is 10 times higher compared to other reported cultures, and non-neuronal cells comprised 85% of cells in this culture. All types of cells were found to be infected, which is similar to that reported during acute infections in vivo. Additionally, interferon- decreased the infected cells, avoiding the cytopathic effect, which is similar to that reported in swine TG cultures. Conclusions: A neuron-enriched primary TG model was characterized. Interferon- treatment protected cells from cytopathic effects and viral spread, while viral infection up-regulated interferon- expression. This result means that interferon- exerts an important antiviral effect against HSV-1 in these cultureapplication/pdfengAsociación Colombiana de InfectologíaInfectioInfectio, 0123-9392, Vol. 18, num. 2, 2014, p. 37-44https://www.clinicalkey.es/#!/content/playContent/1-s2.0-S0123939214000022?returnurl=https:%2F%2Flinkinghub.elsevier.com%2Fretrieve%2Fpii%2FS0123939214000022%3Fshowall%3Dtrue&referrer=HSV-1Ganglio trigeminalInterferón-βNeuronasInmunohistoquímicaEnfermedades virales del sistema nervioso centralCaracterización de un modelo murino de cultivos primarios de ganglio trigeminal enriquecido en neuronas para el estudio del efecto antiviral del interferón-β frente al virus Herpes simple tipo 1Characterization of a murine neuron-enriched model of primary trigeminal ganglia cultures to study the interferon- antiviral effect against Herpes Simplex Virus type 1articleartículohttp://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85http://purl.org/coar/resource_type/c_6501Acceso cerradohttp://purl.org/coar/access_right/c_abf1972014http://purl.org/coar/access_right/c_abf2LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-81748https://repositorio.unbosque.edu.co/bitstreams/61adb392-96a6-4a2c-bc87-6dea2e6bf46c/download8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33MD52ORIGINALLow-Calle A.M., Prada-Arismendy J., Castellanos J.E._2014.pdfLow-Calle A.M., Prada-Arismendy J., Castellanos J.E._2014.pdfapplication/pdf1897874https://repositorio.unbosque.edu.co/bitstreams/0133bfae-1d7f-4faf-a483-5aaec5048359/download5a95c8a20e112bcd7cdee0045bb30272MD51THUMBNAILLow-Calle A.M., Prada-Arismendy J., Castellanos J.E._2014.pdf.jpgLow-Calle A.M., Prada-Arismendy J., Castellanos J.E._2014.pdf.jpgIM Thumbnailimage/jpeg11864https://repositorio.unbosque.edu.co/bitstreams/438bcd13-b9cf-4630-bee6-27f0f325888b/download3d09ef5b6ba7b676579795d6fe2d8d5dMD53TEXTLow-Calle A.M., Prada-Arismendy J., Castellanos J.E._2014.pdf.txtLow-Calle A.M., Prada-Arismendy J., Castellanos J.E._2014.pdf.txtExtracted texttext/plain93463https://repositorio.unbosque.edu.co/bitstreams/d9fa40be-9f41-4066-b9ba-8d3aed190d1f/download78591900f284afcf3ab758029604e8f5MD5420.500.12495/1637oai:repositorio.unbosque.edu.co:20.500.12495/16372024-02-07 08:39:49.493open.accesshttps://repositorio.unbosque.edu.coRepositorio Institucional Universidad El Bosquebibliotecas@biteca.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