Estudio de las características biológicas de Sarconesiopsis magellanica y análisis bioquímico de sus excreciones y secreciones larvales (2013)
Sarconesiopsis magellanica es una mosca necrófaga de importancia médica y forense, utilizada para establecer el intervalo post-mortem. Las larvas de dípteros liberan enzimas proteolíticas contenidas en los productos de las excreciones y secreciones larvales (ES), que juegan un papel muy importante en procesos digestivos y en la curación de las heridas crónicas, ya que degradan tejido necrótico durante la terapia larval. Este proceso promueve el desbridamiento, la desinfección y la estimulación del tejido de granulación; adicionalmente, las ES tienen un papel importante en el aumento de la proliferación, adhesión y migración de células involucradas en la curación de heridas. El objetivo del presente trabajo fue estudiar las características biológicas de S. magellanica y analizar bioquímicamente las enzimas proteolíticas derivadas de las ES. Para tal fin, se colonizó la especie bajo condiciones controladas de laboratorio, se evaluó su ciclo biológico y se analizó su mortalidad, supervivencia, parámetros reproductivos y poblacionales, a partir de tablas de vida. Las proteínas de las ES fueron separadas por SDS – PAGE y su actividad proteolítica fue caracterizada por zimogramas y ensayos de inhibición sobre los sustratos BAPNA y SAPNA. Por otro lado, se evaluó la viabilidad y proliferación en células epiteliales a través del ensayo de MTT, analizando además la morfología, adhesión y migración celular. El ciclo de vida más corto fue para los individuos alimentados con la dieta de hígado en polvo (HP). Los parámetros poblacionales fueron: Tasa neta de reproducción (Ro) =447,752±17,15, Tiempo medio generacional (Tc) =18,18±0,67, Tasa intrínseca de crecimiento natural poblacional (rm) =0,145 y Tasa finita de incremento poblacional (λ) =1,398. En relación con el perfil proteico de las ES, se encontró la presencia de bandas entre ~69 kDa y ~23 kDa, coincidiendo varias de ellas con las del perfil de Lucilia sericata. La actividad de las serin-proteasas fue confirmada cuando una banda de ~25kDa desapareció bajo la incubación de las ES con PMSF a pH 7,8. Los análisis sobre los sustratos sugirieron una gran cantidad de proteasas de tipo tripsina. Por otro lado, estas ES no afectaron la viabilidad de células epiteliales, induciendo un aumento en la proliferación celular. Adicionalmente, reducen la adhesión y estimulan la migración celular a través de la matriz extracelular. Las ES redujeron la superficie celular e incrementaron las alteraciones morfológicas. Los parámetros antes mencionados se ven disminuidos al incubar las ES a 60ºC, posiblemente debido a la inhibición de las proteasas. Estos datos sugieren que las enzimas proteolíticas contenidas dentro de las ES de S. magellanica, contribuyen en la formación del tejido de granulación, facilitando el proceso de regeneración, aumentan la migración de células, promueven la proliferación y aceleran la remodelación de la matriz extracelular. Estos resultados, en su conjunto, dan soporte a futuros experimentos encaminados a la validación de S. magellanica en terapia larval.