Ensamblaje y liberación del virus dengue: Controversia sobre la participación de la proteína alix

Algunos virus envueltos usurpan la maquinaria celular ESCRT (complejo de clasificación endosomal requerido para el transporte) para llevar a cabo funciones como la transcripción, la traducción, el ensamblaje y la liberación de partículas virales desde las células huésped. Aunque esta estrategia ha s...

Full description

Autores:
Bueno Angarita, Claudia Liliana
Morales, Liliana
Velandia-Romero, Myriam Lucía
Calderón-Peláez, María Angélica
Chaparro-Olaya, Jacqueline
Tipo de recurso:
Fecha de publicación:
2019
Institución:
Universidad El Bosque
Repositorio:
Repositorio U. El Bosque
Idioma:
spa
OAI Identifier:
oai:repositorio.unbosque.edu.co:20.500.12495/2184
Acceso en línea:
http://hdl.handle.net/20.500.12495/2184
https://doi.org/10.15446/abc.v24n3.79321
Palabra clave:
Serina endopeptidasa
Maquinaria ESCRT
Flavivirus
Endosomas
Células
Inmunoprecipitación
ESCRT machinery
Flavivirus
Serine endopeptidase
Rights
License
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El objetivo del trabajo fue explorar la participación de una proteína accesoria de ESCRT, la proteína Alix, en la transcripción, traducción, ensamblaje y liberación del virus dengue (DENV), así como su interacción con la proteína viral NS3. Células A549 infectadas con DENV2 fueron tratadas con pequeños ARN de interferencia (siRNA) para disminuir la expresión (“knock-down”) de la proteína Alix. Simultáneamente, se obtuvo una línea A549 que expresaba una proteína NS3 recombinante y sobre este sistema se hicieron ensayos de inmunoprecipitación y “pull-down” para detectar interacción entre NS3 y Alix. Los resultados mostraron que el “knock-down” de Alix no tuvo efecto notable en la transcripción o la traducción viral, pero sí en el ensamblaje y la liberación de DENV2, mientras que los ensayos de “pull-down” revelaron la interacción entre NS3 y Alix. La participación de Alix en la producción de DENV2 y su interacción con NS3 constituyen un potencial blanco para el diseño de estrategias dirigidas a controlar la propagación de DENV.Since the finding that HIV recruits cellular ESCRT (endosomal sorting complexes required for transport) machinery to accomplish viral budding, this strategy has emerged as an escape route for enveloped viruses also. The work aimed to explore the participation of the cellular protein Alix (a human protein that acts as an adapter in the ESCRT pathway) on the transcription, protein expression, assembly and release of Dengue virus (DENV), and explore for its potential interaction with the viral protein NS3. To this purpose, A549 cells were infected with DENV2 and treated with small interfering RNAs (siRNA) to generate an Alix stable knockdown cells line. Also, an A549 cells line expressing a histidine-tagged NS3 protein was obtained. Both cells lines were used in immunoprecipitation and pull-down assays to assess the interaction between NS3 and Alix. The results showed that Alix knockdown had no effect on viral transcription or viral protein expression but influenced the assembly and release of DENV2 negatively. Finally, pull-down assays revealed the interaction between NS3 and Alix. The finding of an Alix participation in the production of DENV2 and its interaction with NS3 provides a potential target for the design of control/inhibition strategies against DENV spread.application/pdfspaUniversidad nacional de colombiaActa biologica colombianaActa biologica colombiana, 1900-1649, Vol. 24, Nro. 3, 2019, p. 509-519.https://revistas.unal.edu.co/index.php/actabiol/article/view/79321Attribution-NonCommercial-ShareAlike 4.0 Internationalhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/Acceso abiertohttp://purl.org/coar/access_right/c_abf422019http://purl.org/coar/access_right/c_abf2Serina endopeptidasaMaquinaria ESCRTFlavivirusEndosomasCélulasInmunoprecipitaciónESCRT machineryFlavivirusSerine endopeptidaseEnsamblaje y liberación del virus dengue: Controversia sobre la participación de la proteína alixAssembly and release of dengue virus: Role of alix proteinarticleartículohttp://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85http://purl.org/coar/resource_type/c_6501LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; 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