Efecto de medios condicionados de células de carcinoma escamocelular oral VPH (+) y VPH (-) sobre el fenotipo y función de células dendríticas humanas

ANTECEDENTES: Pueden existir diferencias en el fenotipo y/o secreción de citocinas solubles por células dendríticas condicionadas con medios de cultivo de células tumorales de carcinoma escamocelular oral VPH (+) vs VHP (-). El objetivo de este estudio fue comparar el efecto de medios condicionados de células de carcinoma escamocelular oral VPH positivo (+) y VPH negativo (-) sobre el fenotipo y la función de Células dendríticas humanas. MÉTODOS: Las células mononucleares de sangre periférica fueron obtenidas mediante un gradiente de Ficoll y separadas con perlas magnéticas acoplados a anticuerpos anti-CD14 haciendo una selección positiva. Estas células fueron resuspendidas y puestos en cultivo por 6 días junto al factor estimulador de colonias granulomonocíticas en presencia de Interleucina-4. Se utilizaron 2 líneas celulares de carcinoma escamocelular de lengua CAL-27 VPH (-) y SCC090 VPH (+), mantenidas en medio de cultivo tanto condicionado como sin condicionar durante 72 horas. Posteriormente las células dendríticas derivadas de monocitos obtenidas previamente se pusieron en contacto con estos medios condicionados de células de carcinoma escamocelular de lengua, en medios diluidos 1⁄2 y 1⁄4 por 4 horas. Se utilizó un control positivo de maduración agregando Lipopolisacárido de E. coli durante 18 horas. Todos los experimentos se realizaron en 4 réplicas biológicas, por último, se determinó la intensidad media de fluorescencia (IMF) por citometría de flujo, en donde se analizó el fenotipo, estado de maduración y perfil de citocinas. El cambio en la expresión de los marcadores fue determinado dividiendo la IMF de las células estimuladas con LPS sobre las no estimuladas con LPS. El valor p fue calculado usando un Mann Whitney test. *p < 0.05. RESULTADOS: Las CDs condicionadas con MC proveniente de células tumorales VPH (-) y VPH (+), presentan tendencias a la disminución en la expresión de HLA-DR, PDL-1 y CD83, con respecto al control positivo con LPS, con un efecto más marcado para CD83 y HLA-DR en las CDs condicionadas con MC de SCC-090 (VPH+), en comparación con Cal27 (VPH-). En las CDs condicionadas con MC de SCC-090, se obtuvo un resultado estadísticamente significativo con una dilución 1⁄4. Las CDs en condiciones basales (sin estímulo), no secretan o secretan concentraciones bajas de las diferentes citocinas. Después del tratamiento con LPS (control positivo), se observa un incremento en la secreción de algunas citocinas como: IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-8, TGF-β e IL-10. Cuando estas, son condicionadas con medios provenientes de células tumorales Cal-27 (VPH (-)) y SSC-090 (VPH (+)), se observa un incremento en la secreción de dichas citocinas con respecto al control con LPS, sin diferencias marcadas entre las CDs condicionada con MC de SCC-090 (VPH+), y las Cal27 (VPH-). Se observa un incremento en la concentración de IL-1β en las CDs condicionadas con MC de Cal-27 con respecto a las de SSC-090, de manera estadísticamente significativa. CONCLUSIÓN: Los medios condicionados provenientes de células tumorales VPH (+) exhiben una mayor afectación en la maduración y producción de citocinas por parte de las CDs a expensas de la disminución en la expresión de HLA-DR y CD83, en comparación con aquellas que fueron condicionadas con medios de la línea VPH (-), en donde se evidencia que en el microambiente tumoral con células escamosas infectadas con VPH, diferentes factores solubles pueden alterar la maduración y funcionalidad de las CDs en comparación con aquellas que no están infectadas, entre ellas destacamos que Las CDs condicionadas con MC de Cal-27 (VPH-) secretan mayores niveles de citocinas pro-inflamatorias IL-B e IFN-Y con respecto a las SCC- 090 (VPH (+)), por lo que su aumentó en medios VPH (-) representa un mayor grado de maduración y un efecto positivo en la funcionalidad de las CDs.

• Autores: Aguirre-Montenegro, German David; Manrique-Bustos, Juan Camilo; Rojas-Rojas, Diego Erney
• Tipo de recurso: Trabajo de grado de pregrado
• Fecha de publicación: 2021
• Institución: Universidad El Bosque
• Repositorio: Repositorio U. El Bosque
• Idioma: spa
• OAI Identifier: oai:repositorio.unbosque.edu.co:20.500.12495/6738
• Acceso en línea: http://hdl.handle.net/20.500.12495/6738
• Palabra clave: Células dendríticas; VPH; Medios condicionados; Carcinoma escamocelular; Fenotipo; Citocinas; Citometría de flujo; Dendritic cells; HPV; Conditioned media; Squamous cell carcinoma; Phenotype; Cytokines; Flow cytometry; WY 100
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