Efecto de tres extractos naturales sobre el ciclo celular y la expresión de los oncogenes E6 y E7 de células transformadas por VPH-16

Antecedentes El virus del papiloma humano afecta al 75% de individuos sexualmente activos, a pesar del continuo aclaramiento viral, la persistencia del VPH de alto riesgo, y el agotamiento del sistema inmunológico, ha favorecido al aumento en la incidencia de cáncer oral y orofaríngeo VPH positivo,...

Full description

Autores:
Peraza Labrador, Alberto Jose
Tipo de recurso:
Fecha de publicación:
2020
Institución:
Universidad El Bosque
Repositorio:
Repositorio U. El Bosque
Idioma:
spa
OAI Identifier:
oai:repositorio.unbosque.edu.co:20.500.12495/6322
Acceso en línea:
http://hdl.handle.net/20.500.12495/6322
Palabra clave:
Productos naturales
Virus de papiloma humano
Lesiones premalignas
Cáncer oral y orofaríngeo
Ciclo celular
Proteínas oncogénicas
Papillomavirus humano 16
Neoplasias de la boca
Human papillomavirus
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Oral and oropharyngeal cancer
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Viral oncogenes
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description Antecedentes El virus del papiloma humano afecta al 75% de individuos sexualmente activos, a pesar del continuo aclaramiento viral, la persistencia del VPH de alto riesgo, y el agotamiento del sistema inmunológico, ha favorecido al aumento en la incidencia de cáncer oral y orofaríngeo VPH positivo, donde los tratamientos convencionales oncológicos generan toxicidad con secuelas al paciente y las vacunas no han sido usadas en profilaxis de cabeza y cuello. Por lo cual es de gran interés encontrar alternativas terapéuticas a partir de productos naturales que puedan ser utilizadas como tratamiento en este tipo de patologías. Objetivos: Determinar el efecto de los extractos de Schisandra Chinensis, Lycium barbarum y Trametes versicolor sobre el ciclo celular y la expresión de los oncogenes E6 y E7 en células transformadas con VPH-16. Metodología: Se evaluó in vitro el efecto de Schisandra Chinensis, Lycium barbarum y Trametes versicolor (50 -2000 μg/mL) sobre la viabilidad celular, por medio de Resazurina en las líneas SCC090, CAL27 y FGH sanos; a su vez el efecto de los extractos (1.0, 10 y 100 μg/mL) en el ciclo celular por citometría de flujo, la expresión del RNAm de los oncogenes E6/E7 y p53 por RT-PCR y la expresión de proteínas p16, p53, Ki-67 y Bcl-2 mediante inmunohistoquímica. Se usó como control negativo células sin tratar y como patrones: Cisplatino a 20 μM y el extracto de C. sinensis. Resultados: Los extractos mostraron citotoxicidad, a concentraciones mayores de 200μg/mL, con un IS >1 para L. barbarum y T. versicolor y de <1 para S. chinensis. Se evidenció que L. barbarum y T. versicolor (1.0μg/mL y 10μg/mL) producen acumulación celular en fase G0/G1, e inhibición de la expresión del RNAm en oncogenes E6 y E7 (P>0,05) y sobreexpresión de p53. En inmunohistoquímica no observamos aumento significativo de p53, Ki-67 y Bcl-2, pero si la sobreexpresión de p16 (P<0,05). Conclusiones: Los extractos de L. barbarum y T. versicolor promovieron la acumulación en fase G0/G1 y mostraron efectos inhibitorios sobre la expresión de oncoproteínas E6/E7, sobreexpresando p16, demostrando que estos extractos podrían tener efectos antivirales frente a células SCC090 transformadas con VPH16.
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Objetivos: Determinar el efecto de los extractos de Schisandra Chinensis, Lycium barbarum y Trametes versicolor sobre el ciclo celular y la expresión de los oncogenes E6 y E7 en células transformadas con VPH-16. Metodología: Se evaluó in vitro el efecto de Schisandra Chinensis, Lycium barbarum y Trametes versicolor (50 -2000 μg/mL) sobre la viabilidad celular, por medio de Resazurina en las líneas SCC090, CAL27 y FGH sanos; a su vez el efecto de los extractos (1.0, 10 y 100 μg/mL) en el ciclo celular por citometría de flujo, la expresión del RNAm de los oncogenes E6/E7 y p53 por RT-PCR y la expresión de proteínas p16, p53, Ki-67 y Bcl-2 mediante inmunohistoquímica. Se usó como control negativo células sin tratar y como patrones: Cisplatino a 20 μM y el extracto de C. sinensis. Resultados: Los extractos mostraron citotoxicidad, a concentraciones mayores de 200μg/mL, con un IS >1 para L. barbarum y T. versicolor y de <1 para S. chinensis. Se evidenció que L. barbarum y T. versicolor (1.0μg/mL y 10μg/mL) producen acumulación celular en fase G0/G1, e inhibición de la expresión del RNAm en oncogenes E6 y E7 (P>0,05) y sobreexpresión de p53. En inmunohistoquímica no observamos aumento significativo de p53, Ki-67 y Bcl-2, pero si la sobreexpresión de p16 (P<0,05). Conclusiones: Los extractos de L. barbarum y T. versicolor promovieron la acumulación en fase G0/G1 y mostraron efectos inhibitorios sobre la expresión de oncoproteínas E6/E7, sobreexpresando p16, demostrando que estos extractos podrían tener efectos antivirales frente a células SCC090 transformadas con VPH16.Magíster en Ciencias OdontológicasMaestríaBackground: The human papilloma virus affects 75% of sexually active individuals, despite the continuous viral clearance, the persistence of high-risk HPV, and the exhaustion of the immune system, has favored the increase in the incidence of oral and oropharyngeal HPV positive cancer. Where conventional cancer treatments generate toxicity with sequelae to the patient and vaccines have not been used in head and neck prophylaxis. Therefore, it is of great interest to find therapeutic alternatives from natural products that can be used as treatment in this type of pathology. Objectives: To determine the effect of the extracts of Schisandra Chinensis, Lycium barbarum and Trametes versicolor on the cell cycle and the expression of the E6 and E7 oncogenes in cells transformed with HPV-16. Methods: The effect of Schisandra Chinensis, Lycium barbarum and Trametes versicolor (50-2000 μg/mL) on cell viability was evaluated in vitro by Resazurin in SCC090, CAL27 and FGH lines. In turn the effect of the extracts (1.0, 10 and 100 μg / mL) on the cell cycle by flow cytometry, the expression of the mRNA of the E6/E7 and p53 oncogenes by RT-PCR and the expression of p16 proteins, p53, Ki-67 and Bcl-2 by immunohistochemistry. Untreated cells were used as negative control and as standards: 20 μM cisplatin and C. sinensis extract. Results; The extracts showed cytotoxicity, at concentrations greater than 200 μg / mL, with an SI> 1 for L. barbarum and T. versicolor and <1 for S. chinensis. It was shown that L. barbarum and T. versicolor (1.0μg / mL and 10μg / mL) produce cellular accumulation in the G0 / G1 phase, and inhibition of mRNA expression in E6 and E7 oncogenes (P< 0.05) and overexpression from p53. In immunohistochemistry, we did not observe a significant increase in p53, Ki-67 and Bcl-2, but we did observe overexpression of p16 (P> 0.05). Conclusions: The extracts of L. barbarum and T. versicolor promoted accumulation in the G0/G1 phase and showed inhibitory effects on the expression of E6/E7 oncoproteins, overexpressing p16, demonstrating that these extracts could have antiviral effects against SCC090 cells transformed with HPV16.application/pdfspaAttribution-NonCommercial-ShareAlike 4.0 Internationalhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/Acceso abiertoinfo:eu-repo/semantics/openAccesshttp://purl.org/coar/access_right/c_abf22020-08Productos naturalesVirus de papiloma humanoLesiones premalignasCáncer oral y orofaríngeoCiclo celularProteínas oncogénicasPapillomavirus humano 16Neoplasias de la bocaHuman papillomavirusPremalignant lesionsOral and oropharyngeal cancerCell cycleViral oncogenesWU 100Efecto de tres extractos naturales sobre el ciclo celular y la expresión de los oncogenes E6 y E7 de células transformadas por VPH-16Effect of three natural extracts on cell cycle and expression of e6 and e7 oncogenes of cells transformed by hpv-16Maestría en Ciencias OdontológicasUniversidad El BosqueFacultad de OdontologíaTesis/Trabajo de grado - Monografía - Maestríainfo:eu-repo/semantics/acceptedVersionhttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1finfo:eu-repo/semantics/bachelorThesisORIGINALPeraza_Labrador_Alberto_Jose_2020.pdfPeraza_Labrador_Alberto_Jose_2020.pdfapplication/pdf3457391https://repositorio.unbosque.edu.co/bitstreams/9953a4c8-7fc6-4fa0-949f-4e1439fd14e5/downloadd63159ba0e00ddd9ae9411560dcf6e82MD51Peraza_Labrador_Alberto_Jose_2020_anexos.pdfPeraza_Labrador_Alberto_Jose_2020_anexos.pdfapplication/pdf828993https://repositorio.unbosque.edu.co/bitstreams/79b301bb-c6c7-4d9c-93da-5db1641cd156/downloadb6c094a46fd318111186f9ef440dbe57MD52Peraza_Labrador_Alberto_Jose_2020_carta_de_autorización.pdfPeraza_Labrador_Alberto_Jose_2020_carta_de_autorización.pdfapplication/pdf986090https://repositorio.unbosque.edu.co/bitstreams/7b45ddf0-dd3d-47d2-a31f-676e41cdf3ff/downloadec5aa474523cdbb1d1820dfe0c76bc24MD53CC-LICENSElicense_rdflicense_rdfapplication/rdf+xml; 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