Estandarización de un protocolo basado en el análisis de la proliferación de linfocitos t como modelo de estudio para la selección de principios activos con actividad inmunomoduladora (2025)
Los linfocitos T juegan un papel fundamental en la defensa del cuerpo al identificar y eliminar sustancias extrañas, además de regular la activación de otras células del sistema inmune para evitar respuestas patológicas. En este sentido, es esencial contar con protocolos que midan su actividad, a través de la estimulación o inhibiendo la proliferación de los Linfocitos T. El ensayo con carboxifluoresceína succinimidil éster(CFSE) se utiliza ampliamente para este fin, aunque con diversas variaciones en su implementación. En la presente investigación, se definieron los parámetros experimentales para evaluar la proliferación de linfocitos T en un modelo de reacción mixta leucocitaria utilizando CFSE. Variables como la concentración del reactivo, tiempo de incubación y proporción de células dendríticas (CD) y linfocitos T (LT) fueron analizados. Inicialmente, se establecieron las condiciones experimentales para la adecuada incorporación de CFSE a una concentración de 1,5μM, 2,5μM y 5μM, durante un período de 10, 15 y 20 minutos. La proliferación fue monitoreada cada 48 horas mediante citometría de flujo, siguiendo la reducción progresiva de la fluorescencia. . Se emplearon diferentes proporciones entre células dendríticas (CD) y linfocitos T (LT) (CD:LT de 2:1, 1:1 y 1:2), efectuando un seguimiento periódico por citometría de flujo durante 8 días. Finalmente se evidenció que los LT incorporaron el reactivo CFSE a una concentración de 5μM y un tiempo de incubación de 10 min. Finalmente se demostró, que tanto la proporción como el tiempo influyen de manera significativa en el seguimiento de la proliferación de los linfocitos T en un cultivo de reacción mixta leucocitaria. En consecuencia, se recomienda emplear una proporción CD:LT de de 2:1, 5μM de CFSE y 10 min de incubación en futuras investigaciones