Comparación sistemática de estrategias para lograr la expresión soluble de proteínas recombinantes de plasmodium falciparum en E. coli (2020)
Se utilizaron construcciones que contenían secuencias codificantes parciales de miosina A, miosina B y proteína asociada a glideosoma (50 kDa) de Plasmodium falciparum para desafiar varias estrategias diseñadas para mejorar la producción y solubilidad de proteínas recombinantes en Escherichia coli. Los ensayos se llevaron a cabo induciendo la expresión en un cultivo en fase logarítmica tardía, optimizando la concentración del inductor, reduciendo la temperatura de crecimiento de los cultivos inducidos y complementando los aditivos en el tampón de lisis. Además, las proteínas recombinantes se expresaron como proteínas de fusión con tres etiquetas diferentes (6His, GST y MBP) en cuatro cepas de E. coli diferentes. Descubrimos que la única condición que producía proteínas solubles consistentemente era el uso de MBP como etiqueta de fusión, que se convirtió en una herramienta valiosa para detectar las proteínas utilizadas en este estudio y no causó ninguna interferencia en los ensayos de interacción proteína-proteína (Far Western Blot). Además, encontramos que la cepa BL21-pG-KJE8 no mejoró la solubilidad de ninguna de las proteínas recombinantes producidas, mientras que la cepa BL21-CodonPlus (DE3) -RIL mejoró la expresión de algunas de ellas independientemente del contenido de codones raros. Las proteínas con codones raros que se encuentran en frecuencias altas (> 10%) se expresaron de manera eficiente en cepas que no complementan los ARNt de estos tripletes. mientras que la cepa BL21-CodonPlus (DE3) -RIL mejoró la expresión de algunos de ellos independientemente del contenido de codones raros. Las proteínas con codones raros que se encuentran en frecuencias altas (> 10%) se expresaron de manera eficiente en cepas que no complementan los ARNt de estos tripletes. mientras que la cepa BL21-CodonPlus (DE3) -RIL mejoró la expresión de algunos de ellos independientemente del contenido de codones raros. Las proteínas con codones raros que se encuentran en frecuencias altas (> 10%) se expresaron de manera eficiente en cepas que no complementan los ARNt de estos tripletes.