Caracterización parcial de una proteasa alcalina a partir de hongos filamentosos implicados en el deterioro de documentos históricos (2011)
Se ha buscado y seleccionado sistemáticamente una proteasa alcalina que pudiese ser usada en la eliminación “limpia” de proteínas residuales sobre soportes documentales con valor de patrimonio histórico de forma eficiente y económica. Se logró purificar y caracterizar parcialmente una proteasa alcalina extracelular producida por el hongo filamentoso Eladia saccula en medios líquidos con extracto de carne como única fuente de nitrógeno. El extracto crudo fue fraccionado con sulfato de amonio (p/v: 85%, 65% y 35%), recuperando mayoritariamente la enzima en la fracción del 35% (p/v). La proteasa alcalina fue purificada hasta la homogeneidad mediante cromatografía FPLC empleando una resina DEAE-sefarosa. Se evaluó la pureza de la enzima mediante SDS-PAGE y revelado con plata. Se evidenció una banda de aproximadamente 30kDa correspondiente a la proteasa alcalina de interés. La enzima presentó un pH óptimo de reacción de 8.3 (rango de 5.0 – 10.0), con una temperatura óptima de reacción de 60°C (rango de 30°C – 70°C), y sin reducción evidente de la actividad proteolítica por efecto de la adición de EDTA 5mM en las reacciones. / Abstract. Studies on an alkaline protease as an efficient, environmental friendly and relatively economical remover of residual proteins for historical valuable documents were performed and was selected for this work. It was purified and partially characterized from filamentous fungi E. saccula in liquid medias, supplemented with meat extract as a sole nitrogen source. The raw extract was fractionated with ammonium sulphate (w/v: 85%, 65% y 35%), and the enzyme was recovered mostly in the 35% (w/v) fraction. The alkaline protease was purified using Fast Protein Liquid Chromatography (FPLC) equipment with DEAE.Sepharose as a resin. The purity of the enzyme was assessed through SDS-PAGE and silver staining. A band of approximately 30kDa, corresponding to the enzyme of interest, was revealed. The alkaline protease present at an optimum pH and temperature of 8.3 and 60°C respectively, without evident loss of activity when EDTA (5mM) was incorporated in the reactions.