Detección molecular de Streptococcus agalactiae en muestras de leche mastítica en bovinos del norte y oriente antioqueños (2015)
La mastitis bovina se define como la inflamación de la glándula mamaria, caracterizandose por producir cambios en el tejido (hinchazón, temperatura elevada, dolor, endurecimiento) y cambios físicos y químicos de la leche como decoloración, presencia de coágulos y presencia de un alto número de leucocitos. En la mayoría de las ocasiones es debida a agentes infecciosos. Es la enfermedad más común del ganado lechero y la que representa más pérdidas económicas para los productores de leche de todo el mundo. En Estados Unidos las pérdidas vaca/año se calculan en USD 200. Las malas prácticas que se dan al momento de llevar a cabo el proceso de ordeño, permiten la infección de la glándula mamaria por parte de agentes patógenos como el Streptococcus agalactiae, conocido como uno de los principales agentes etiológicos de la mastitis clínica y subclínica en los bovinos. Es altamente contagioso entre las vacas, causando una de las mayores elevaciones en el Recuentos de Células Somáticas (RCS) comparado con otros patógenos. La prueba California Mastitis Test (CMT) es el método tradicional para detectar infecciones de la glándula mamaria bovina en condiciones de campo, sin embargo, no identifica el tipo de patógeno causante de la enfermedad. La prueba para la identificación de patógenos causantes de infecciones de la glándula mamaria considerada la prueba “Gold standard”, es el cultivo in vitro de la leche. La técnica molecular Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) se basa en la detección y amplificación de secuencias específicas de cualquier genoma. Los objetivos principales de esta tesis fueron realizar la identificación de la bacteria causante de mastitis Streptococcus agalactiae a través de la técnica molecular PCR a partir de muestras de leche proveniente de cuartos de hembras bovinas afectados con mastitis clínica y/o subclínica grado 3; evaluar la sensibilidad y la especificidad de la PCR para el diagnóstico de Streptococcus agalactiae confrontado con el cultivo in vitro de leche, y estimar la frecuencia del S. agalactiae diagnosticado por la técnica PCR y cultivo bacteriológico en los hatos del norte y oriente antioqueños. Se analizaron 297 muestras de leche provenientes de cuartos de hembras bovinas diagnosticados por la prueba CMT con mastitis clínica y subclínica grado 3, procedentes de 13 municipios del norte y oriente antioqueño. Se estandarizaron las técnicas de biología molecular como la extracción de ADN bacteriano a partir de leche y la PCR, obteniéndose un fragmento de 586 pb del gen 16S rRNA en las muestra positivas para la presencia de S. agalactiae. Mediante tablas de contingencia se evaluó la sensibilidad y la especificidad de la PCR en comparación con la prueba de cultivo in vitro de leche para el diagnóstico de Streptococcus agalactiae. El resultado de sensibilidad y especificidad de la PCR fue de 60% y 87.3%, respectivamente. Los resultados también indicaron que la extracción de ADN bacteriano utilizando el kit es el más acertado para procesos moleculares. Se estimó una frecuencia de Streptococcus agalactiae diagnosticado por las técnicas PCR y cultivo microbiológico de las muestras de leche y se halló una frecuencia del patógeno de 31% (92 muestras positivas) por PCR y de 38.7% (115 muestras positivas) por cultivo in vitro, en los 13 municipios donde se tomaron muestras. Se realizó una comparación de frecuencia de Chi cuadrado para analizar si existían diferencias de frecuencia del patógeno entre los municipios donde se obtuvieron las muestras. La prueba arrojó que existe diferencia estadísticamente significativa (P0.05) en la frecuencia del S. agalactiae entre los diferentes municipios, pero no se encontró diferencia estadística (P0.05) entre la frecuencia evaluada en las dos zonas geográficas (norte y oriente antioqueño).