Actividad ribonucleasa en el látex de calotropis procera (aiton) w.t. aiton y pedilanthus tithymaloides (l.) poit / ribonuclease activity in latex from calotropis procera (aiton) w.t. aiton and pedilanthus tithymaloides (l.) poit (2013)
Las enzimas ribonucleasas (RNasas) han sido utilizadascon efectividad en el tratamiento de ciertos tipos de cáncer ypueden tener otras propiedades aplicables en biotecnología. Con el objetivo de identificar la presencia de actividad RNasa en el látex de las plantas tropicales Calotropis procera y Pedilanthus tithymaloides se colectaron muestras a partir de plantas adultas ubicadas al norte del estado Aragua, Venezuela. Las proteínas solubles fueron extraídas con acetato de sodio 50 mM pH 5 (16 μL/μgde látex) y eliminada la porción poliisoprenoide por centrifugación a 16.000 x g durante 15 min. La actividad RNasa se estimó utilizando una técnica que incluye la aplicación de alícuotas de la mezcla de reacción sobre geles de poliacrilamida-urea y separadaspor electroforesis. La degradación del sustrato fue cuantificada pordensitometría. Se probaron diversos sustratos (ARNttotal, ARNtphe yARNm transcrito in vitro a partir de ADN plasmídico). El látexde ambas especies presentó actividad RNasa, con actividadesespecíficas iniciales de 1,42 ± 0,74 μg de ARN hidrolizado/min/ μg de proteína; 0,45 ± 0,18 ng de ARN hidrolizado/min/ng de proteína y 0,28 ± 0,07 ng de ARN hidrolizado/min/ng de proteínapara el ARNttotal, ARNm transcrito y ARNtphe, respectivamente, en C. procera, y de 0,02 ± 0,001 ng de ARN hidrolizado/min/ng de proteína para el ARNm transcrito y ARNtphe en P. tithymaloides. Este constituye el primer reporte acerca de la presencia de enzimas RNasas en el látex de estas especies. / Ribonuclease enzymes (RNase) have been used effectively in the treatment of certain cancers and other properties that may be applicable in biotechnology. In order to identify the RNase activity in the latex of Calotropis procera and Pedilanthus tithymaloides, tropical plants samples were collected from adult plants located in the North State of Aragua, Venezuela. Soluble proteins were extracted with 50 mM sodium acetate pH 5 (16 μL/μg latex) and poliisoprenoide portion was removed by centrifugation at 16,000 x g for 15 min. RNase activity was estimated using atechnique that involves the application of reaction mixture aliquots on polyacrylamide-urea gels and separated by electrophoresis. Substrate degradation was quantified by densitometry. Various substrates were tested (tRNAtotal, tRNAphe and mRNA transcribed in vitro from plasmid DNA). The latex from both species showed RNase activity, with initial specific activities of 1.42 ± 0.74 μg of RNA hydrolyzed/min/mg protein, 0.45 ± 0.18 ng RNA hydrolyzed/ min/ng protein and 0.28 ± 0.07 ng RNA hydrolyzed/min/ng proteinfor the tRNAtotal, mRNA transcribed and tRNAphe, respectively, for C. procera; and 0.02 ± 0.001 ng RNA hydrolyzed/min/ng protein for the mRNA transcribed and tRNAphe in P. tithymaloides. This is the first report of RNases enzymes in the latex from these species