Determinación de mutaciones en el gen INSL3 y de la mutación A664C (T222P) en el GEN LGR8, en pacientes colombianos con Criptorquidia y en un grupo control (2010)
La criptorquidia –descenso defectuoso o incompleto del testículo desde su origen hasta su situación definitiva en la bolsa escrotal– representa el trastorno más frecuente de la diferenciación sexual en los varones. Al final del primer año, la frecuencia es del 0,8 - 1,1%. Estudios realizados en Colombia reportan tasas que oscilan entre 3.4% y 13.3 X 10.000 nacidos vivos. La literatura reporta que los individuos con criptorquidia presentan alteraciones en la espermatogénesis, infertilidad, y un riesgo aumentado de malignidad testicular. El gen INSL3, el cual se expresa específicamente en las células de Leydig, ha sido asociado con la criptorquidia. La deleción del gen Insl3 en ratones transgénicos da lugar a criptorquidia bilateral. Usando ratones transgénicos que sobre expresan el Insl3 y ratones con deleción del gen Lgr8 (leucine-rich repeat-containing G protein-coupled receptor), se estableció que Lgr8 es el único receptor conocido para Insl3 in vivo. Ningún estudio a nivel colombiano o latinoamericano ha analizado mutaciones en los genes INSL3 y LGR8 en pacientes con criptorquidia. Se analizó una población de 200 individuos sanos y 52 pacientes. Se realizó la extracción de ADN y la amplificación a partir de estas muestras de los exones 1 y 2 del gen INSL3, amplificados que fueron posteriormente purificados y secuenciados (“3730 DNA Analyzer” de Applied Biosystems). Para la mutación A664C en el gen LGR8, se realizaron PCR alelo específica para las formas tipo silvestre y mutada. Se hallaron las mutaciones, R30H, G35R, A60T, Q92H, tanto en controles como en pacientes, considerándose por lo tanto polimorfismos. La mutación A60T, ha sido reportada previamente en poblaciones de Europa y Japón. Otras seis mutaciones, en condición heterocigota, fueron encontradas en el grupo de pacientes: L10R, P27L, L87Q, P93L, R105G y A107P. La mutación P93L ha sido estudiada reportada y determinada previamente como patogénica. En el presente estudio consideramos como hallazgo muy importante la observación de 5 mutaciones nuevas, presuntamente asociadas con la presencia de criptorquidia. En el gen LGR8 no se encontró la mutación evaluada (A664C). / Abstract. Cryptorchidism, defective or incomplete descent of the testis from its origin to its final location in the scrotum, represents the most common birth defect of male genitalia. At the end of the first year, the frequency drops to 0.8 - 1,1%. Studies realized in Colombia have reported rates between 3,4 % and 13,3 X 10,000 in male live birth. The literature reports that patient with cryptorchidism have spermatogenesis dysfunction, infertility, and increased risk of testicular malignancy. The INSL3 gene, which is specifically expressed in the Leydig cells has been characterized and its mutations have been associated with criptorchidism. The deletion of the gene Insl3 in transgenic mice results in bilateral cryptorchidism. Using transgenic mice that over express Insl3 and mice with deletion the gene Lgr8 (leucine-rich repeat-containing G protein-coupled), was established that the gen Lgr8 is the only known receptor for Insl3 in vivo. Any national or Latin American study have searched for mutations in the INSL3 and LGR8 genes in patients with cryptorchidism, and in healthy control men. Blood samples for 200 healthy individuals and in 52 patients with cryptorchidism were obtained. Which were performed DNA extraction and amplification from these samples, of exons 1 and 2 of the INSL3 gene, were subsequently amplified, purified and sequenced (3730 DNA Analyzer "from Applied Biosystems). For the A664C polymorphism in the LGR8 gene, allele specific PCR was performed for wild type and mutated forms. 4 mutations present in both in controls, and patients, that considered as polimorphisms: R30H, G35R, A60T, Q92H were found. The A60T polymorphism, has been previously reported in several populations of Europe and Japan. Six mutations were found in heterozygous condition in the group of patients: L10R, P27L, L87Q, P93L, R105G and A107P. The P93L mutation has been reported previously, and modeling studies altered protein showed a rearrangement of secondary structure with total loss of the helix, which could lead to instability of the protein. In the present study we described 6 mutations in men with cryptorchidism. Five of these mutations have not been previously described. The LGR8 gene mutation (A664C) was not found.