Evaluación transitoria del promotor del gen de la proteina de la capside del virus del mosaico amarillo de la papa (pymv) - Colombia en plantas de tabaco

Los promotores derivados de virus son herramientas biotecnológicas muy útiles que permiten regular la expresión de genes de interés en plantas transgénicas. Sin embargo algunos promotores no promueven eficientemente la transcripción de genes en diferentes plantas, siendo necesario evaluar nuevos promotores que permitan obtener mejores resultados en cuanto a expresión y estabilidad génica. Con base en lo anterior, el presente estudio tuvo como objetivo general: Evaluar la expresión transitoria del promotor del gen de la proteína de la cápside del Virus del mosaico amarrillo de la papaColombia (PYMV-Col) en plantas de Nicotiana tabacum var Xanthicultivadas in vitro. Para cumplir este objetivo, se optimizaron las condiciones de biobalística, utilizando el promotor 35S de CaMV fusionado al gen uidA, clonado en el vector pBI121. Las condiciones evaluadas fueron: presión de disparo, número de disparos, distancia de disparo y reactivo para eliminar pigmentos en fragmentos de hojas u hojas completas de tabaco. Las condiciones optimizadas fueron validadas utilizando el vector pCAMBIA 1305,2. Posteriormente se generó unvector de expresión heteróloga (PYMV-CPGUS) constituido por el promotor del gen de CP de PYMV-Col, fusionado al gen uidA y mediante ensayos transitorios se evaluóla expresión del gen uidAbajo la acción del promotor CP-PYMV de acuerdo al número de puntos azules obtenidos y el tejido donde fueron encontradoscon base a la expresión génica obtenida con el promotor 35S de CaMV.Las condiciones óptimas de biobalística fueron: una presión de 160psi, 4 disparos, 0 cm de distancia y etanol 70% sobre hojas completas de tabaco. Estas condiciones fueron validadas con pCAMBIA 1305,2 con el cual se obtuvo un alto número de puntos azules en los tejidos vegetales evaluados. El promedio del número de puntos azules obtenidos con el promotor CP-PYMV-Col fusionado al gen uidA (GUS) fue 23.2 en una hoja de N. tabacum y el promedio del número de puntos obtenidos con el promotor 35S de CaMV fue 26.6. Respecto a la expresión del promotor CP-PYMV-Col fue observada específicamente en células del mesófilo.

• Autores: Pulido Rendón, Andrea Jimena
• Fecha de publicación: 2014
• Institución: Universidad Nacional de Colombia
• Repositorio: Universidad Nacional de Colombia
• Idioma: spa
• OAI Identifier: oai:repositorio.unal.edu.co:unal/23396
• Acceso en línea: https://repositorio.unal.edu.co/handle/unal/23396; http://bdigital.unal.edu.co/14432/
• Palabra clave: 63 Agricultura y tecnologías relacionadas / Agriculture; Geminivirus; Promotor CP-PYMV-Col; Expresión transitoria; Gen uidA; Helios® Gene Gun; Promotor 35S de CaMV; Geminiviruses; CP-PYMV-Col promoter; transient expression; UidA gene; Helios® Gene Gun; 35S CaMV promoter
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• License: Atribución-NoComercial 4.0 Internacional