Inmunodetección de las proteínas de la cascada de fosfoinositoles en células HEK293 y evaluación de los efectos del litio sobre corrientes de membrana activadas por esta vía (2017)
Resumen. El litio ha sido ampliamente utilizado como el principio activo en medicamentos psiquiátricos, pero el conocimiento de sus mecanismos de acción a nivel celular y molecular es limitado. Estudios bioquímicos han establecido que uno de los diversos blancos sobre los cuales podría actuar el litio es la vía de señalización de fosfoinositoles, pero se carece de estudios funcionales para comprobar esta hipótesis. Estudios previos en células sensoriales de anfioxo, que responden a la luz a través de la activación de esta vía revelaron un aumento robusto de la respuesta fisiológica ante la exposición aguda a litio extracelular en altas dosis. Para extender esta observación a un contexto clínicamente relevante y con el propósito de tener un mayor entendimiento de los efectos fisiológicos definidos del litio en células individuales, se propuso desarrollar un sistema apto para evaluar la modulación de las corrientes de membrana activadas por la vía de fosfoinositoles en células mamíferas en cultivo. Se realizaron ensayos de western blot e inmunofluorescencia para corroborar la expresión de los elementos clave de señalización de esta vía: M3-mAChR, Gq, PLCβ1 e IP3R-I en células HEK293, que de manera endógena expresa receptores muscarínicos acoplados a Gq. Para asegurar la presencia de una conductancia iónica acoplada a Gq y para corroborar la mediación de la vía de fosfoinositoles se realizaron registros de patch clamp activando la cascada por diálisis con GTP-γ-S y exponiendo las células a un antagonista de la fosfolipasa C, respectivamente. La estimulación de los receptores muscarínicos con carbacol, un análogo de la acetilcolina, produjo corrientes similares a las inducidas por GTP-γ-S, y la utilización de bajas concentraciones reveló corrientes de salida que se exacerbaron con la exposición aguda a litio. Basados en los resultados obtenidos, se propone la posibilidad de que se presenten dos poblaciones de receptores con diferente sensibilidad al carbacol y que el litio ejerza efectos diferenciales sobre ellos.