Expresión de Hey1 al realizar la pérdida de función de NotchIC en las prominencias maxilar y mandibular de embriones de pollo. (2019)
La vía de señalización Notch es compleja puesto que es temporal y contexto- dependiente; durante la diferenciación celular está involucrada repetidamente en gran variedad de procesos y su modulación tiene un potencial terapéutico, promoviendo la homeostasis en los tejidos. Tanto la activación canónica como la no canónica de la vía Notch puede promover la transcripción de genes diana de la vía Notch, entre ellos Hey1. Diversos estudios han mostrado presencia de la señal de algunos componentes de la Vía Notch durante el desarrollo de las prominencias faciales, y específicamente marcación del gen diana Hey1 en las prominencias maxilar (PMx) y mandibular (PMn) de embriones de pollo. Sin embargo, no se conoce si esta marcación se deriva de procesos canónicos o no canónicos de la vía por lo que en este estudio se propuso establecer si la expresión de Hey1 en la prominencia maxilar y mandibular depende exclusivamente de la vía canónica de Notch. Para alcanzar este objetivo se hizo necesario primero, describir la expresión de los diferentes componentes de la vía Notch; y en específico, los sitios de expresión del gen diana Hey1. Enseguida, detallar la expresión de los componentes de la vía Notch en el ectodermo de las prominencias maxilar y mandibular (donde se hizo evidente su expresión); para finalmente determinar la expresión de Hey1 al inhibir la liberación de NOTCHIC (la porción intracelular del receptor Notch) en las prominencias maxilar y mandibular. Para esto, se identificó la expresión y los sitios de expresión mediante RT-PCR, hibridación in situ e inmunofluorecencia sobre cortes; se detalló la expresión en el ectodermo, mediante la separación del ectodermo y la medición de la transcripción de los diferentes componentes mediante RT-PCR y finalmente se determinó si la expresión de Hey1 se debía a la liberación de NotchIC, inhibiendo esta liberación farmacológicamente (in vitro e in vivo) usando DAPT - un inhibidor de γ-secretasa -, y midiendo la transcripción de los diferentes componentes de la vía, entre ellos Hey1, mediante RT-PCR e hibridación in situ. Los resultados obtenidos mostraron que definitivamente todos los componentes de la vía Notch que fueron estudiados están presentes en la PMx y PMn; adicional a esto todos estos componentes (a excepción de Notch2 quien solo se expresa en el ectodermo), se expresan tanto se en el ectodermo como en el mesénquima, pero, es necesaria la presencia del ectodermo para el mantenimiento de la expresión de los ligandos Jag/Ser1 y Dll1 y los genes diana Hey1 y Hey2 en el mesénquima de las prominencias (aparentemente con una activación no canónica de la vía). Y además, la expresión de los genes diana de la Vía Notch se mantiene, incluso después de haber inhibido la liberación de NotchIC. Por lo anterior se concluye que: la expresión de los componentes de la vía Notch coincide con los resultados de otros autores, confirmando que la vía Notch podría estar cumpliendo una función importante en la morfogénesis, y posiblemente en desarrollo de las estructuras derivadas de la PMx y la PMn; el ectodermo cumple una función fundamental en el mantenimiento de señales de la vía Notch en el mesénquima; y finalmente, la expresión de Hey1 en la PMx y la PMn NO depende exclusivamente de la vía canónica de Notch.