Evaluación del efecto antiresortivo de NAC en células similares a osteoclastos obtenidas por fusión con PEG o por fuerza centrifuga

Previamente mostramos que la fusión inducida con Polietilenglicol (PEG) de macrófagos tanto de las líneas U937/A y J774 conducía a la diferenciación y activación de osteoclastos de acuerdo con la expresión de marcadores de osteoclastos como la fosfatasa ácida resistente al tartrato (TRAP) y la activ...

Full description

Autores:: Moreno Beltrán, Pedro José

Tipo de recurso:

Fecha de publicación:: 2017

Institución:: Universidad Nacional de Colombia

Repositorio:: Universidad Nacional de Colombia

Idioma:: spa

Description
Summary:	Previamente mostramos que la fusión inducida con Polietilenglicol (PEG) de macrófagos tanto de las líneas U937/A y J774 conducía a la diferenciación y activación de osteoclastos de acuerdo con la expresión de marcadores de osteoclastos como la fosfatasa ácida resistente al tartrato (TRAP) y la actividad de resorción óse a, por otro lado al someter células de fibroblastos gingivales a fuerzas centrifugas se observó marcadores osteoclásticos como presencia TRAP y actividad resortiva. Se ha identificado que para que suceda la diferenciación hacia osteoclasto es necesario el aumento de las concentraciones intracelulares de especies reactivas de oxigeno (ROS). En el momento no hay un modelo experimental que explique el papel de ROS en la diferenciación osteoclástica cuando se aplican fuerzas como en los tratamientos de ortod oncia. El objetivo del presente trabajo fue evaluar el efecto antiresortivo de NAC (n acetil cisteina) en células similares a osteoclastos obtenidas por fusión con PEG o en células sometidas a fuerzas centrifugas. Células U937 fueron sembradas sobre lámi nas de hueso cortical de origen bovino y sometidas a fuerzas compresivas. Paralelamente otra fracción de células se fusionó con PEG 1450 y a otra porción no se les aplicó ningún tratamiento y fueron cultivadas en similares condiciones (grupo control), los grupos expuestos anteriormente fueron tratados o no con 30 mM del fármaco anti-oxidante N-acetil cisteína (NAC), se evaluó la actividad TRAP, la actividad resortiva ósea, la presencia de anillos de actina por medio de fluorescencia indiceta, y la expresión de marcadores poblacionales exclusivos de osteoclastos por medio de inmunofluorescencia indirecta. Los niveles ROS fueron evaluados mediante el reactivo DHE ( Hydroethidine), la fusión celular se evaluó mediante el uso de los marcadores DiD y DiO . La diferencia de los grupos de los tratamientos fue analizada por el método de ANOVA de doble vía. Para evaluar el grado de correlación entre las variables se realizó una prueba de correlación de Tuquey. Encontramos que la fusión celular per se, de células U937, con PEG 1450 o al aplicar fuerza compresiva, induce características similares a la de los osteoclastos como generar anillos de actina, aumentar la actividad ROS, formar células multinucleadas TRAP positivas, aumentar la expresión de NF-kB, así como, el de marcadores poblacionales característicos evaluados, al aumentar la actividad de resorción en láminas de hueso cortical bovino. Sin embargo, los patrones de resorción y de fusión son diferentes al tratar con PEG o someter a fuerzas com presivas. Al tratar estas mismas células con 30mM de NAC todos los efectos se revirtieron observándose diferencias altamente significativas P0.001. Fusionar células con PEG o someterlas a fuerza centrífuga genera estrés oxidativo (producción de ROS ) lo cual activa vías relacionadas con la maduración del osteoclasto (anillos de actina TRAP, resorción y marcadores característicos de los osteoclastos). Al aplicar reductores probablemente disminuye la actividad o la maduración de estas células.

Evaluación del efecto antiresortivo de NAC en células similares a osteoclastos obtenidas por fusión con PEG o por fuerza centrifuga

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