Evaluación de cambios en la actividad Osteoclástica con la aplicación de agentes reductores u oxidantes en células U937 fusionadas con polietilenglicol

A partir de la teoría de que la fusión celular es esencial para la función del Osteoclasto y su rol en el mantenimiento del control de la masa ósea y osteoclástica, se desarrolló un modelo para la obtención de células similares a osteoclastos que son capaces de realizar resorción utilizando polietil...

Full description

Autores:: Rodríguez Soto, María Alejandra

Tipo de recurso:

Fecha de publicación:: 2018

Institución:: Universidad Nacional de Colombia

Repositorio:: Universidad Nacional de Colombia

Idioma:: spa

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Summary:	A partir de la teoría de que la fusión celular es esencial para la función del Osteoclasto y su rol en el mantenimiento del control de la masa ósea y osteoclástica, se desarrolló un modelo para la obtención de células similares a osteoclastos que son capaces de realizar resorción utilizando polietilenglicol (PEG). Se demostró que su aplicación en monocitos (línea celular U937) genera fusión, y que este evento es suficiente para la expresión de genes específicos del Osteoclasto, y resorción ósea. El propósito de este trabajo fue investigar los cambios en la actividad resortiva al aplicar distintos agentes oxidantes y reductores sobre este modelo. Método: Se indujo fusión de células U937, para obtener células similares a osteoclastos, con 0.5μl PEG mw:1450 por cada 50.000 células que fueron sembradas sobre láminas de hueso, o un grupo control no tratado con PEG; las células fueron resuspendidas en DMEM con SFB al 10%, y mantenidas bajo una atmosfera humidificada al 5% de CO2 a 37°C durante 2 horas; aplicándolos directamente en el medio y en diferentes tiempos, se realizó inducción oxidativa con DMNQ 0.15μM, homocisteína 100μM, peróxido de hidrógeno 50μM o tratamiento con agentes reductores TROLOX 500μM, TEMPOL100μM, ácido ascórbico 50μg/ml, NAC 30mM, GSH 32mM + BME 25μM . Se evaluó presencia de especies reactivas de oxígeno (ROS), tinción para TRAP (fosfatasa ácida tartrato resistente), actividad resortiva y expresión de marcadores osteoclásticos. Resultados: La fusión con PEG induce la generación de ROS, el aumento en el porcentaje de células TRAP +, la formación de anillos de actina y el área resorbida con respecto a las células no fusionadas. El tratamiento con agentes oxidantes en los días 0 y 1 después de fusionar con PEG genera un aumento en ROS consecuente con un aumento de TRAP, anillos de actina y resorción ósea, de manera contraria se produjo una disminución de estos con el tratamiento con agentes reductores en estas etapas; el pretratamiento con agentes oxidantes y reductores generó una disminución en la resorción para ambos casos, sin embargo, la aplicación de ambos tipos de tratamiento en los días 2 y 3 después de la fusión con PEG no generó cambios significativos en la resorción. Conclusión: La fusión per se implica la generación de ROS, aumentando la expresión de marcadores osteoclastogénicos y actividad resortiva, dichas características se acentúan al aplicar reactivos oxidantes, sugiriendo que el estado oxido reductor de la célula es crítico para la supervivencia, estabilidad de la fusión y para el inicio de la actividad osteoclastogénica Palabras

Evaluación de cambios en la actividad Osteoclástica con la aplicación de agentes reductores u oxidantes en células U937 fusionadas con polietilenglicol

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