Estudio de la nicotinamida/nicotinato mononucleótido adenililtransferasa de giardia lamblia (gnmnat): determinación de la localización subcelular y aproximación estructural

Giardia lamblia es un organismo divergente, causante de una enfermedad denominada Giardiasis. Este parásito reviste especial interés biológico por su posición evolutiva basal y metabolismo simplificado; por esta razón es importante estudiar el metabolismo del NAD+ en este organismo y así conocer sus...

Full description

Autores:
Moreno González, Paula Andrea
Tipo de recurso:
Fecha de publicación:
2013
Institución:
Universidad Nacional de Colombia
Repositorio:
Universidad Nacional de Colombia
Idioma:
spa
OAI Identifier:
oai:repositorio.unal.edu.co:unal/60028
Acceso en línea:
https://repositorio.unal.edu.co/handle/unal/60028
http://bdigital.unal.edu.co/57937/
Palabra clave:
5 Ciencias naturales y matemáticas / Science
54 Química y ciencias afines / Chemistry
Giardia lamblia
Dinucleótido de Adenina y Nicotinamida (NAD+)
Nicotinamida/Nicotinato Mononucleotido
Adenililtransferasa (NMNAT)
anticuerpos
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description Giardia lamblia es un organismo divergente, causante de una enfermedad denominada Giardiasis. Este parásito reviste especial interés biológico por su posición evolutiva basal y metabolismo simplificado; por esta razón es importante estudiar el metabolismo del NAD+ en este organismo y así conocer sus diferencias con otros modelos de estudio. El Dinucleótido de Adenina y Nicotinamida (NAD+) es una molécula de relevancia metabólica y celular que actúa como cofactor, sustrato y participa en procesos de transducción de señales intracelulares. Las distintas rutas de síntesis de este metabolito convergen en la enzima Nicotinamida/Nicotinato Mononucleotido Adenililtransferasa (NMNAT) (EC: 2.7.7.1/18). En estudios previos se identificaron por herramientas bioinformáticas dos candidatos para la NMNAT de G. lamblia (GlNMNAT-A y GlNMNAT-B); los cuales se clonaron, expresaron y evaluaron enzimáticamente. En el presente trabajo se continuó el estudio de la GlNMNAT-A, mediante aproximaciones bioinformáticas y experimentales. Específicamente, se generó un modelo estructural in sillico y se evaluó la expresión de esta proteína, mediante retro-transcripción. Adicionalmente, se realizaron estudios de inmunodetección; para lo cual se produjeron anticuerpos policlonales en modelos murinos y aviares (IgG e IgY). De igual manera, se estudió la localización intracelular de la GlNMNAT-A, mediante el empleo de transgenes. El modelo bioinformático generado presentó características representativas de las NMNAT, fundamentales para la función biosintética de estas enzimas. El análisis transcripcional mostró una baja expresión de las isoenzimas en trofozoitos de G lamblia. Finalmente, los análisis de localización mostraron patrones de ubicación citoplasmática de la GlNMNAT-A en trofozoítos y quistes del parásito.
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Las distintas rutas de síntesis de este metabolito convergen en la enzima Nicotinamida/Nicotinato Mononucleotido Adenililtransferasa (NMNAT) (EC: 2.7.7.1/18). En estudios previos se identificaron por herramientas bioinformáticas dos candidatos para la NMNAT de G. lamblia (GlNMNAT-A y GlNMNAT-B); los cuales se clonaron, expresaron y evaluaron enzimáticamente. En el presente trabajo se continuó el estudio de la GlNMNAT-A, mediante aproximaciones bioinformáticas y experimentales. Específicamente, se generó un modelo estructural in sillico y se evaluó la expresión de esta proteína, mediante retro-transcripción. Adicionalmente, se realizaron estudios de inmunodetección; para lo cual se produjeron anticuerpos policlonales en modelos murinos y aviares (IgG e IgY). De igual manera, se estudió la localización intracelular de la GlNMNAT-A, mediante el empleo de transgenes. El modelo bioinformático generado presentó características representativas de las NMNAT, fundamentales para la función biosintética de estas enzimas. El análisis transcripcional mostró una baja expresión de las isoenzimas en trofozoitos de G lamblia. Finalmente, los análisis de localización mostraron patrones de ubicación citoplasmática de la GlNMNAT-A en trofozoítos y quistes del parásito.Abstract: Giardia lamblia is a divergent organism and is the causal agent of a disease called giardiasis. This parasite has a special biological interest regarding its evolutive position and its simplified metabolism. For the above is important to study the NAD+ metabolism this organism in order to determine differences with other parasites. The Nicotinamide Adenine Dinucleotide (NAD+) is a fundamental molecule in the cellular metabolism. NAD+ act as a cofactor, substrate and participate in processes like signal transduction. The NAD+ Synthesis routes converge in the enzyme Nicotinamide /Nicotinate Mononucleotide Adenylyltransferase (NMNAT) (EC:2.7.7.1/18). Previous studies identified two candidate sequences for NMNAT (glNMNAT-A y glNMNAT-B) of G. lamblia by bioinformatic tools. These candidates were cloned, expressed, and their enzymatic activity was evaluated. In this work the study of glNMNATs is continued by means of bioinformatic and experimental approaches. Specifically a structural model was generated in silico. Protein transcription was determined using retrotranscription. Additionally, polyclonal murine and avian antibodies (IgG and IgY) were produced in order to detect the expression of the glNMNATs. In the same way, glNMNATs cellular location was evaluated using transgenes. The bioinformatic model showed NMNATs representative features. These features are important to biosynthetic function. Transcriptional analysis showed a cytoplasmic location of glNMNAT in trofozoítos and in the parasite cyst.Maestríaapplication/pdfspaUniversidad Nacional de Colombia Sede Bogotá Facultad de Ciencias Departamento de QuímicaDepartamento de QuímicaMoreno González, Paula Andrea (2013) Estudio de la nicotinamida/nicotinato mononucleótido adenililtransferasa de giardia lamblia (gnmnat): determinación de la localización subcelular y aproximación estructural. Maestría thesis, Universidad Nacional de Colombia - Sede Bogotá.5 Ciencias naturales y matemáticas / Science54 Química y ciencias afines / ChemistryGiardia lambliaDinucleótido de Adenina y Nicotinamida (NAD+)Nicotinamida/Nicotinato MononucleotidoAdenililtransferasa (NMNAT)anticuerposNicotinamide Adenine Dinucleotide (NAD+)(NMNAT),Nicotinamide/Nicotinate MononucleotideAdenylyltransferasaantibodiesEstudio de la nicotinamida/nicotinato mononucleótido adenililtransferasa de giardia lamblia (gnmnat): determinación de la localización subcelular y aproximación estructuralTrabajo de grado - Maestríainfo:eu-repo/semantics/masterThesisinfo:eu-repo/semantics/acceptedVersionTexthttp://purl.org/redcol/resource_type/TMORIGINAL01188158 2013.pdfapplication/pdf2529049https://repositorio.unal.edu.co/bitstream/unal/60028/1/01188158%202013.pdfb20484be82fa07c8ff3a1c113512ef09MD51THUMBNAIL01188158 2013.pdf.jpg01188158 2013.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg4584https://repositorio.unal.edu.co/bitstream/unal/60028/2/01188158%202013.pdf.jpgdc3de0a3cde43c681568208493848c9fMD52unal/60028oai:repositorio.unal.edu.co:unal/600282024-04-11 23:09:06.79Repositorio Institucional Universidad Nacional de Colombiarepositorio_nal@unal.edu.co