Evaluación de la actividad resortiva de cmnsp fusionadas con polietilenglicol (peg), tratadas con fuerza centrífuga y con n acetilcisteina (NAC) (2015)
Con el objeto de evaluar la actividad resortiva de las células mononucleares de sangre periférica (CMNSP), estas fueron aisladas mediante un gradiente de ficol-Hipaque y estimuladas con 10 μg/ml de fitohemaglutinina (PHA) durante 72 h en medio de cultivo RPMI 1640 y suero fetal bovino al 10%. Aproximadamente 20.000 células fueron fusionadas con PEG 3000, otro grupo aproximadamente del mismo tamaño fueron sometidas a fuerza centrífuga a 60 RPM durante120 h, sembradas sobre láminas de hueso cortical bovino estériles de aproximadamente 5 x 5 mm2 x 0.5 de alto y tratadas o no con N-acetilcisteína (NAC). Para esto, se dividieron en 6 grupos de la siguiente manera: 1. Células no fusionadas. 2. Células no fusionadas + NAC. 3. Células no fusionadas + fuerza centrífuga. 4. Células no fusionadas + fuerza centrífuga + NAC. 5. Células fusionadas con PEG. 6. Células fusionadas con PEG + NAC. Transcurrido el tiempo de cultivo las células se fijaron con metanol ácido acético en proporción 1:3; se procedió a identificar proteínas de membrana utilizadas como marcadores característicos de osteoclastos. Entre estas proteínas están: ADAM-12, ATPasa, Integrina β3, DC-stamp, Receptor de calcitonina y Catepsina K. Igualmente se evaluó la actividad de la enzima tartrato resistente (TRAP). Posteriormente las células se retiraron de la lámina ósea y se evaluó la actividad resortiva sobre el hueso donde se cultivaron las células. Se encontró que al fusionar células con PEG, o aplicar fuerza centrífuga a células no fusionadas, se inducen marcadores característicos de células osteoclasticas y actividad resortiva, probablemente relacionado con un aumento de ROS, dado que al aplicar NAC los marcadores y la actividad resortiva disminuyen.