Evaluación de la actividad resortiva de cmnsp fusionadas con polietilenglicol (peg), tratadas con fuerza centrífuga y con n acetilcisteina (NAC)
Con el objeto de evaluar la actividad resortiva de las células mononucleares de sangre periférica (CMNSP), estas fueron aisladas mediante un gradiente de ficol-Hipaque y estimuladas con 10 μg/ml de fitohemaglutinina (PHA) durante 72 h en medio de cultivo RPMI 1640 y suero fetal bovino al 10%. Aproxi...
- Autores:
-
Bedoya Trujillo, Juan Sebastian
- Tipo de recurso:
- Trabajo de grado de pregrado
- Fecha de publicación:
- 2015
- Institución:
- Universidad Nacional de Colombia
- Repositorio:
- Universidad Nacional de Colombia
- Idioma:
- spa
- OAI Identifier:
- oai:repositorio.unal.edu.co:unal/54856
- Acceso en línea:
- https://repositorio.unal.edu.co/handle/unal/54856
http://bdigital.unal.edu.co/50062/
- Palabra clave:
- 54 Química y ciencias afines / Chemistry
61 Ciencias médicas; Medicina / Medicine and health
66 Ingeniería química y Tecnologías relacionadas/ Chemical engineering
N-acetilcisteina
Osteoclasto
Polietilenglicol
Marcadores osteoclasto
Metabolismo óseo
Resorción y células mononucleares
N-acetylcysteine
Polyethylene glycol
Osteoclasts
Osteoclast markers
Bone metabolism
Bone resorption
Mononuclear cells
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Con el objeto de evaluar la actividad resortiva de las células mononucleares de sangre periférica (CMNSP), estas fueron aisladas mediante un gradiente de ficol-Hipaque y estimuladas con 10 μg/ml de fitohemaglutinina (PHA) durante 72 h en medio de cultivo RPMI 1640 y suero fetal bovino al 10%. Aproximadamente 20.000 células fueron fusionadas con PEG 3000, otro grupo aproximadamente del mismo tamaño fueron sometidas a fuerza centrífuga a 60 RPM durante120 h, sembradas sobre láminas de hueso cortical bovino estériles de aproximadamente 5 x 5 mm2 x 0.5 de alto y tratadas o no con N-acetilcisteína (NAC). Para esto, se dividieron en 6 grupos de la siguiente manera: 1. Células no fusionadas. 2. Células no fusionadas + NAC. 3. Células no fusionadas + fuerza centrífuga. 4. Células no fusionadas + fuerza centrífuga + NAC. 5. Células fusionadas con PEG. 6. Células fusionadas con PEG + NAC. Transcurrido el tiempo de cultivo las células se fijaron con metanol ácido acético en proporción 1:3; se procedió a identificar proteínas de membrana utilizadas como marcadores característicos de osteoclastos. Entre estas proteínas están: ADAM-12, ATPasa, Integrina β3, DC-stamp, Receptor de calcitonina y Catepsina K. Igualmente se evaluó la actividad de la enzima tartrato resistente (TRAP). Posteriormente las células se retiraron de la lámina ósea y se evaluó la actividad resortiva sobre el hueso donde se cultivaron las células. Se encontró que al fusionar células con PEG, o aplicar fuerza centrífuga a células no fusionadas, se inducen marcadores característicos de células osteoclasticas y actividad resortiva, probablemente relacionado con un aumento de ROS, dado que al aplicar NAC los marcadores y la actividad resortiva disminuyen. |
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Bedoya Trujillo, Juan Sebastian (2015) Evaluación de la actividad resortiva de cmnsp fusionadas con polietilenglicol (peg), tratadas con fuerza centrífuga y con n acetilcisteina (NAC). Otra thesis, Universidad Nacional de Colombia. |
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Aproximadamente 20.000 células fueron fusionadas con PEG 3000, otro grupo aproximadamente del mismo tamaño fueron sometidas a fuerza centrífuga a 60 RPM durante120 h, sembradas sobre láminas de hueso cortical bovino estériles de aproximadamente 5 x 5 mm2 x 0.5 de alto y tratadas o no con N-acetilcisteína (NAC). Para esto, se dividieron en 6 grupos de la siguiente manera: 1. Células no fusionadas. 2. Células no fusionadas + NAC. 3. Células no fusionadas + fuerza centrífuga. 4. Células no fusionadas + fuerza centrífuga + NAC. 5. Células fusionadas con PEG. 6. Células fusionadas con PEG + NAC. Transcurrido el tiempo de cultivo las células se fijaron con metanol ácido acético en proporción 1:3; se procedió a identificar proteínas de membrana utilizadas como marcadores característicos de osteoclastos. Entre estas proteínas están: ADAM-12, ATPasa, Integrina β3, DC-stamp, Receptor de calcitonina y Catepsina K. Igualmente se evaluó la actividad de la enzima tartrato resistente (TRAP). Posteriormente las células se retiraron de la lámina ósea y se evaluó la actividad resortiva sobre el hueso donde se cultivaron las células. Se encontró que al fusionar células con PEG, o aplicar fuerza centrífuga a células no fusionadas, se inducen marcadores característicos de células osteoclasticas y actividad resortiva, probablemente relacionado con un aumento de ROS, dado que al aplicar NAC los marcadores y la actividad resortiva disminuyen.Abstract. Whit objective In order to assess the resorptive activity of mononuclear cells from peripheral blood (PBMC), these were isolated by a gradient of ficoll-Hypaque and stimulated with 10 ug / ml phytohemagglutinin (PHA) for 72 h in RPMI 1640 fetal bovine serum and 10%. Approximately 20,000 cells were fused with PEG 3000, another group of about the same size were subjected to centrifugal force for 60 RPM durante120 h, planted on sheets of cortical bovine bone sterile approximately 5 x 5 mm x 0.5 tall and treated or not with N -acetilcystein (NAC). For this, they were divided into 6 groups as follows: 1. Cells unfused. 2. unfused + NAC. 3. unfused + centrifugal force. 4. unfused + centrifugal force+ NAC. 5. cells fused with PEG. 6. cells fused with PEG + NAC. After the culture time the cells were fixed with acetic acid methanol in proportion 1: 3; we proceeded to identify membrane proteins used as markers characteristic of osteoclasts. Among these proteins are: ADAM-12, ATPase, β3 integrin, DC-stamp, cathepsin K, calcitonin recptor and activity enzyme tartrate resistant (TRAP) was evaluated. The cells were removed from the plate, and resorptive activity was evaluated on bone where the cells were grown. It was found that by fusing cells with PEG, or applying centrifugal force to unfused cells, markers characteristic of osteoclastic cells are induced and resorptive activity, probably related to an increase in ROS, since applying NAC markers and resorptive activity decrease.Otraapplication/pdfspaUniversidad Nacional de Colombia Sede Bogotá Facultad de Odontología Departamento de Ciencias BásicasDepartamento de Ciencias BásicasBedoya Trujillo, Juan Sebastian (2015) Evaluación de la actividad resortiva de cmnsp fusionadas con polietilenglicol (peg), tratadas con fuerza centrífuga y con n acetilcisteina (NAC). Otra thesis, Universidad Nacional de Colombia.54 Química y ciencias afines / Chemistry61 Ciencias médicas; Medicina / Medicine and health66 Ingeniería química y Tecnologías relacionadas/ Chemical engineeringN-acetilcisteinaOsteoclastoPolietilenglicolMarcadores osteoclastoMetabolismo óseoResorción y células mononuclearesN-acetylcysteinePolyethylene glycolOsteoclastsOsteoclast markersBone metabolismBone resorptionMononuclear cellsEvaluación de la actividad resortiva de cmnsp fusionadas con polietilenglicol (peg), tratadas con fuerza centrífuga y con n acetilcisteina (NAC)Trabajo de grado - Pregradoinfo:eu-repo/semantics/bachelorThesisinfo:eu-repo/semantics/acceptedVersionhttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1fTexthttp://purl.org/redcol/resource_type/TPORIGINALEVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD RESORTIVA DE CMNSP FUSIONADAS CON POLIETILENGLICOL (PEG), TRATADAS CON FUERZA CENTR JUAN SEBASTIAN BEDOYA TRUJILLO TESIS 2015.pdfapplication/pdf3326210https://repositorio.unal.edu.co/bitstream/unal/54856/1/EVALUACI%c3%93N%20DE%20LA%20ACTIVIDAD%20RESORTIVA%20DE%20CMNSP%20FUSIONADAS%20CON%20POLIETILENGLICOL%20%28PEG%29%2c%20TRATADAS%20CON%20FUERZA%20CENTR%20JUAN%20SEBASTIAN%20BEDOYA%20TRUJILLO%20TESIS%202015.pdf11834fe78ed7ea3d284d07f4e996f5f6MD51THUMBNAILEVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD RESORTIVA DE CMNSP FUSIONADAS CON POLIETILENGLICOL (PEG), TRATADAS CON FUERZA CENTR JUAN SEBASTIAN BEDOYA TRUJILLO TESIS 2015.pdf.jpgEVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD RESORTIVA DE CMNSP FUSIONADAS CON POLIETILENGLICOL (PEG), TRATADAS CON FUERZA CENTR JUAN SEBASTIAN BEDOYA TRUJILLO TESIS 2015.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg4708https://repositorio.unal.edu.co/bitstream/unal/54856/2/EVALUACI%c3%93N%20DE%20LA%20ACTIVIDAD%20RESORTIVA%20DE%20CMNSP%20FUSIONADAS%20CON%20POLIETILENGLICOL%20%28PEG%29%2c%20TRATADAS%20CON%20FUERZA%20CENTR%20JUAN%20SEBASTIAN%20BEDOYA%20TRUJILLO%20TESIS%202015.pdf.jpg7ae74f080a4e3bb046da1edf80233784MD52unal/54856oai:repositorio.unal.edu.co:unal/548562023-03-09 23:11:55.219Repositorio Institucional Universidad Nacional de Colombiarepositorio_nal@unal.edu.co |