Evaluación de efectos antitumorales de un oligonucleótido (ODN) tipo señuelo dirigido a STAT3 en un modelo de línea celular de cáncer de pulmón (2017)
Resumen: Actualmente el cáncer continúa siendo una enfermedad con altas tasas de incidencia y mortalidad a nivel mundial. El desarrollo de nuevas moléculas para tratar los diferentes tipos de cáncer se encuentra enfocado en la terapia molecular dirigida. Sin embargo, pocas estrategias de este tipo han alcanzado la etapa de estudios clínicos debido a sus efectos inespecíficos, inestabilidad o baja permeabilidad celular. Los oligonucleótidos (ODNs) tipo señuelo son una alternativa para la terapia molecular dirigida. Estos han mostrado gran efectividad en diversos modelos de líneas celulares, junto con una mejor selectividad y mayor especificidad en sus efectos. Se seleccionó al factor de transcripción STAT3 como un blanco molecular potencial ya que su sobrexpresión en el tejido tumoral claramente se ha asociado con el desarrollo y progresión del cáncer de pulmón y a fenómenos de resistencia a medicamentos usados en clínica. El objetivo de este trabajo fue validar el potencial antitumoral de ODNs dirigidos contra STAT3 en líneas celulares de cáncer de pulmón teniendo en cuenta la selectividad y especificidad de los efectos. La expresión y activación de STAT3 fue medida por inmunofluorescencia para asegurar la presencia del blanco molecular en el modelo escogido. Posteriormente se cuantificó la captación celular de los ODNs por medio de citometría de flujo. Los efectos citotóxicos de los ODNs fueron determinados medio del ensayo metabólico de resazurina teniendo en cuenta diferentes concentraciones y tiempos de tratamientos. Finalmente se evaluó el posible mecanismo de muerte celular asociado a los tratamientos por medio de ensayos de actividad de caspasas y fragmentación nuclear por microscopía de fluorescencia. Los resultados mostraron que hubo una mayor expresión y activación del factor de transcripción STAT3 en las líneas tumorales respecto a una línea control de fibroblastos pulmonares. Además se encontró que los ODNs empleados fueron transfectados eficientemente en las células localizándose principalmente en el citoplasma. Mediante los ensayos de citotoxicidad se evidenció que los ODNs parental y modificado lograron la disminución de la supervivencia celular de forma dosis y tiempo dependiente alcanzando concentraciones letales 50 (CL50) en el rango nanomolar. Dichos efectos fueron exclusivos para las líneas tumorales y no para la línea celular normal demostrando la selectividad de los ODNs. Por otra parte se encontró que los ODNs bajo las condiciones de tratamiento indujeron un proceso de muerte por apoptosis y generaron cambios en la expresión de mRNA de tres genes blanco de STAT3. Estos resultados permitieron validar la tecnología de ODNs tipo señuelo como un modelo potencial de terapia dirigida con efectos selectivos sobre líneas celulares de cáncer de pulmón.