Identificación y caracterización de la Nicotinamida Mononucleótido Adenilil Transferasa (NMNAT) en Trypanosoma cruzi: enzima clave en el metabolismo del NAD+ (2014)
Trypanosoma cruzi es el causante de la enfermedad de Chagas. El aumento reciente de esta enfermedad, se debe en gran medida al desarrollo de resistencia por parte del parásito a las drogas comúnmente usadas contra este. Las NMNAT (EC: 2.7.7.1) catalizan un paso clave en la biosíntesis del NAD+. Dado que el NAD+ es fundamental para sostener procesos fisiológicos basales en T. cruzi, garantizar su supervivencia en el hospedero y contribuir a los mecanismos de resistencia a drogas, la identificación de la NMNAT de T. cruzi (TcNMNAT) es primordial para desarrollar nuevas estrategias terapéuticas contra la enfermedad de Chagas; partiendo del conocimiento de la bioquímica del parásito. En este estudio se buscaron secuencias candidato para la TcNMNAT mediante programas de alineamiento, usando las bases de datos TritrypDB y PDB. Se generaron modelos tridimensionales de la proteína correspondiente, y un mutante delecional de la misma, en el servidor I-TASSER. La secuencia identificada se amplificó y clonó en el vector de expresión pET-100. La proteína 6xHisTcNMNAT fue expresada en E. coli y purificada parcialmente empleando cromatografía de afinidad. De esta proteína se confirmó su actividad enzimática y se determinaron sus constantes cinéticas correspondientes; todo esto mediante ensayos enzimáticos directos empleando RPHPLC. En este trabajo se identificó un marco de lectura para una NMNAT en el genoma de T. cruzi, cuya proteína recombinante presenta actividad adenilil transferasa. Esto representa la primera identificación y caracterización cinética de una NMNAT en Trypanosoma cruzi; lo cual constituye un primer paso en la comprensión del metabolismo del NAD+ en este parásito, dando nuevos aportes al conocimiento del metabolismo del NAD+ en parásitos intracelulares.