Propiedades electrofisiológicas y producción de óxido nítrico en macrófagos murinos durante su interacción con OMVs de E. coli JC8031

A pesar de la importante morbi-mortalidad que revisten las enfermedades infectocontagiosas en la actualidad, su tratamiento y las alternativas de inmunización no son satisfactorios. Es por esto, que la búsqueda de nuevas estrategias para el control de este grupo de patologías se hace imperiosa y es...

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Autores:: Leal Bohórquez, Andrés Felipe

Tipo de recurso:

Fecha de publicación:: 2017

Institución:: Universidad Nacional de Colombia

Repositorio:: Universidad Nacional de Colombia

Idioma:: spa

Description
Summary:	A pesar de la importante morbi-mortalidad que revisten las enfermedades infectocontagiosas en la actualidad, su tratamiento y las alternativas de inmunización no son satisfactorios. Es por esto, que la búsqueda de nuevas estrategias para el control de este grupo de patologías se hace imperiosa y es allí donde las tecnologías de liberación controlada como las vesículas de membrana externa (OMVs; por sus siglas en inglés) cobran particular interés. El uso de vesículas derivadas de especies como Escherichia coli, Salmonella typhimurium y Shiguella spp han mostrado actividad inmunoduladora in vivo e in vitro, debido en parte a la presencia moléculas inmunogénicas como el lipopolisacárido. Gracias a que estas OMVs son reconocidas por el sistema inmune en un contexto similar a lo ocurrido durante el proceso infeccioso real, el uso de cepas no patógenas e hipervesiculantes como E. coli JC8031 supone una alternativa más promisoria que las tradicionales sales de aluminio. Pese a esto, a la fecha no existe evidencia que soporte el efecto que tienen estas nanovesículas en la fisiología de células del sistema inmune como el macrófago y que resulta particularmente importante en la búsqueda de adyuvantes válidos. Por este motivo, durante este trabajo de investigación se determinó el impacto que tiene la interacción macrófago_OMVs de E. coli JC8031 sobre la viabilidad celular, permeabilidad iónica y activación clásica de macrófagos de ratón J774A.1. Los hallazgos de este estudio muestran que la internalización de 0,1 µg/mL OMV es tiempo-dependiente y no compromete la viabilidad del macrófago luego de 48 horas de incubación. Así mismo, se registró hiperpolarización de la membrana plasmática del macrófago que estuvo acompañada de incremento en corrientes macroscópicas de entrada y sobreexpresión de los transcritos de los canales Kir 2.1, KCa 3.1 y BK. Por otro lado, durante las primeras 6 horas de interacción se encontraron los niveles de expresión del ARNm de la iNOS más altos, comportamiento que fue consistente con la detección de la proteína y el producto de su actividad enzimática en el periodo 12-48 horas. En conclusión, estos hallazgos sugieren que el macrófago es activado clásicamente durante las primeras 6 horas de internalización de 0,1 µg/mL de OMV de E. coli JC8031, tiempo en el cual los cambios en las propiedades biofísicas registradas podrían sugerir polarización hacia activación alternativa.

Propiedades electrofisiológicas y producción de óxido nítrico en macrófagos murinos durante su interacción con OMVs de E. coli JC8031

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