Estandarización de un protocolo sencillo para la extracción de adn genómico de levaduras

Standardising a simple protocol for extracting yeast from genomic DNA Resumen: Se estandarizó un protocolo rápido, sencillo y de bajo costo para la extracción de ADN genómico de levaduras a partir de lisis de la pared celular mediante tratamiento enzimático y precipitación por alcoholes. El empleo de la enzima Beta-glucoronidasa en reemplazo de la enzima Zimolasa, permitió obtener ADN en alta concentración (124,9±30,2 ng/μl) y de buena calidad (A260/A280 nm =1,86±0,1), ideal para su uso en estudios de biología molecular. Además, se adicionó un paso de incubación del ADN obtenido a 100° C para inactivar ADNasas. La calidad del ADN obtenido fue evaluada por medio de la amplificación de la región ITS1-5.8S-ITS2, presentando bandas definidas y cuantificables (entre 380 y 880 pb) ideales para estudios de identificación molecular y filogenia.Palabras clave: levadura; extracción de ADN; Beta-Glucoronidasa. Abstract: A quick, simple and low-cost protocol for extracting genomic DNA from yeast by cell wall lysis involving enzymatic treatment and alcoholic precipitation was standardised. Higher DNA yields (124.9±30.2 ng/μl) were obtained by using beta-glucuronidase instead of zymolyase; these had very high quality (A260/A280 nm = 1.86±0.1) and would be suitable for use in molecular biology assays. Moreover, a DNAse inactivation step was also introduced by incubation at 100 °C to further ensure DNA stability. DNA quality was assayed by PCR amplification of the ITS1-5.8S-ITS2 region, revealing defined, quantifiable 380 to 880 bp bands. These results show that the protocol is ideal for molecular identification and phylogenetic studies.Key words: Yeast; DNA extraction; beta-glucoronidase.

• Autores: Osorio-Cadavid, Esteban; Ramírez, Mauricio; López, William Andrés; Mambuscay, Luz Adriana
• Tipo de recurso: Article of journal
• Fecha de publicación: 2009
• Institución: Universidad Nacional de Colombia
• Repositorio: Universidad Nacional de Colombia
• Idioma: spa
• OAI Identifier: oai:repositorio.unal.edu.co:unal/24639
• Acceso en línea: https://repositorio.unal.edu.co/handle/unal/24639; http://bdigital.unal.edu.co/15676/
• Palabra clave: levadura; extracción de ADN; Beta-Glucoronidasa; Yeast; DNA extraction; beta-glucoronidase
• Rights: openAccess
• License: Atribución-NoComercial 4.0 Internacional