Estandarización de un método fluorométrico para la determinación de la densidad parasitaria por Plasmodium en modelos farmacológicos de malaria in vivo e in vitro (2015)
La eficacia in vivo e in vitro de potenciales antimaláricos generalmente es evaluada mediante la determinación microscópica directa de la parasitemia de Plasmodium en extendidos de sangre teñidos con Giemsa. Este proceso es subjetivo, consume mucho tiempo, carece de precisión y requiere de personal técnico experimentado. En el presente estudio hemos adaptado y optimizado un método basado en la fluorescencia del SYBR Green I (SGI). La sincronicidad (para el cultivo de P falciparum), el uso de sangre entera (Whole blood cell_WBC) frente a células rojas infectadas (para el modelo in vivo), y los parámetros de lisis y el tiempo de tinción (en ambos modelos) fueron examinados para definir las condiciones óptimas. El tiempo de tinción fue robusto entre 5 minutos y 4 horas (2 horas óptimo); el cultivo asincrónico del parásito permite evaluar las concentraciones más bajas y la WBC no interfiere. Bajo condiciones experimentales óptimas, el ruido de fondo generado es bajo, hay buena linealidad (dentro de los rangos de parasitemia empleados comúnmente en estos modelos farmacológicos). El método de Bland-Altman evidenció una fuerte correlación entre el método SGI y el estándar Giemsa. El Factor Z fue 0,5Z0 para el modelo in vitro y Z0,5 para el modelo in vivo, lo que confirma que el método es apropiado para el cribado de alto rendimiento. Estos hallazgos sugieren que nuestro método alternativo basado en la fluorescencia es adecuado para la evaluación in vitro e in vivo de sustancias o extractos con posible actividad frente a malaria.