Desarrollo y evaluación de un prototipo de formulación a base de una mezcla de levaduras contra Botrytis cinerea en rosas (2014)
Las levaduras poseen mecanismos de acción contra B. cinerea: competencia por espacio y nutrientes, producción de metabolitos secundarios inhibitorios, producción de compuestos orgánicos volátiles, entre otros. Sin embargo, las levaduras requieren ser formuladas para su estabilización y actividad bio-controladora en función del tiempo. Las formulaciones han usado mono-inóculos de antagonistas como principio activo, no obstante, sus mezclas también han sido empleadas, pero relegadas a un segundo plano. En este trabajo se desarrolló un prototipo de formulación liofilizado, a base de mezclas de levaduras con capacidad antagónica contra Botrytis cinerea. Se usaron seis aislamientos de levaduras: LvGr20, LvSb29, LvGr3, LvGr26, LvGr1 y LvGr10, del cepario del Laboratorio de Microbiología Agrícola del IBUN, Bogotá D.C. La evaluación de sus actividades bio-controladoras se llevó a cabo mediante antagonismo in vitro, empleando la técnica del enfrentamiento dual e, in vivo, sobre pétalos de rosa (Rosa sp. variedad Vendela), donde también se estimó la dosis-respuesta a concentraciones celulares que oscilaron entre 105 y 108 UFC/mL de levadura. El efecto de la producción de VOCs en el desarrollo de la enfermedad sobre pétalos de rosa también fue evaluado. Una vez se determinó la compatibilidad entre los aislamientos seleccionados (LvGr20 y LvSb29), se evaluó in vivo el efecto de las proporciones en mezclas celulares entre estas dos levaduras y, se estudió, el efecto de las interacciones de sus mezclas (a concentraciones entre 106 -108 UFC/mL), para el desarrollo de una formulación con actividad bio-controladora de B. cinerea. Con lo anterior se desarrolló un prototipo de formulación con manitol y trehalosa al 1% y 5% m/v como excipientes de formulación, usando una mezcla con proporción 2:1 de LvGr20 con respecto a LvSb29 y, empleando la liofilización como estrategia de estabilización celular; la formulación se almacenó a 4°C durante sesenta días. Al cabo de este tiempo, se evaluó viabilidad y actividad antagónica de las formulaciones en co-inoculación con B. cinerea. Después de 60 días, la viabilidad del prototipo de formulación con trehalosa registró valores más altos que manitol, 18% y 14% respectivamente, sin embargo, el control de sólo leche produjo la misma viabilidad que trehalosa. A pesar que en todas las formulaciones no hubo control de la enfermedad en co-inoculación, se evidenció que todos los aislamientos presentaron al menos un mecanismo de acción. Adicionalmente, se notó que la liofilización afectó diferentemente la viabilidad celular de los aislamientos seleccionados, lo cual, además de potenciar la patogenicidad de B. cinerea con leche, no permitió evidenciar la expresión de los mecanismos de control de los aislamientos en un ambiente oligotrófico.