Evaluación fisiológica de los efectos del litio sobre la movilización de calcio intracelular en la línea celular HEK 293

El litio ha sido ampliamente usado como tratamiento para el desorden bipolar, sin embargo sus mecanismos de acción a nivel celular y molecular permanecen desconocidos. En fotoreceptores de anfioxo, ha sido reportado que el litio potencia la foto-transdución mediada por la cascada de la fosfolipasa C...

Full description

Autores:: Landinez Macias, Maria Paula

Tipo de recurso:

Fecha de publicación:: 2016

Institución:: Universidad Nacional de Colombia

Repositorio:: Universidad Nacional de Colombia

Idioma:: spa

Description
Summary:	El litio ha sido ampliamente usado como tratamiento para el desorden bipolar, sin embargo sus mecanismos de acción a nivel celular y molecular permanecen desconocidos. En fotoreceptores de anfioxo, ha sido reportado que el litio potencia la foto-transdución mediada por la cascada de la fosfolipasa C (PLC). Con el fin de extender la relevancia de este hallazgo en un modelo mamífero, se evaluó la línea celular HEK 293 como modelo de estudio de los efectos del litio en la cascada de la PLC. Se realizaron mediciones con indicador fluorescente de calcio Fluo 4 a nivel de célula única, donde se encontró movilización de calcio por estimulación con carbacol. La intervención de la PLC en este proceso se comprobó con el uso del inhibidor U-73122, y se corroboró que el calcio liberado proviene de depósitos intracelulares realizando mediciones en una solución externa con baja concentración de calcio. Después de registrar una respuesta reproducible y robusta de la cascada de la PLC por estimulación con carbacol, se evaluó el efecto del remplazo iso-osmótico de Na+ por Li+ (140mM). La concentración de calcio alcanzada fue en promedio más alta que en la situación control (70%  27, n= 4). Posteriormente se redujo la concentración de Li en la solución a 14mM y se encontró que el aumento persiste. Por lo cual se disminuyó la concentración de litio a 4mM, valor cercano a las dosis terapéuticas, y se obtuvo también un aumento en concentración de calcio alcanzada. Dado que los efectos del litio en pacientes con desorden bipolar se observan bajo tratamiento crónico, se evaluó el efecto de adicionar litio al medio de cultivo por dos semanas. En las células cultivadas en 1 y 4 mM de litio hubo un promedio más alto en la fluorescencia basal del indicador de calcio, pero no fue significativo (p=0,422, n=25). El incremento en la concentración de calcio por estimulación con carbacol tampoco presentó diferencias (p=0,606, n=25). Como primer acercamiento para evaluar si los cambios en la concentración de calcio observados pueden tener efectos en un sensor fisiológico, se propuso transfectar células HEK 293 silvestres con el constructo mSlo1-GFP.

Evaluación fisiológica de los efectos del litio sobre la movilización de calcio intracelular en la línea celular HEK 293

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