Evaluación de Enterococcus faecium en un modelo de inflamación intestinal in vitro (2017)
La microbiota del tracto gastrointestinal y su hospedero viven en equilibrio; sin embargo, múltiples factores como la alimentación, el estrés, y los antibióticos, entre otros, pueden desencadenar un desbalance intestinal causando respuesta inflamatoria en el hospedero, la cual al perpetuarse puede ocasionar enfermedades crónicas como enfermedad inflamatoria intestinal, cáncer colorrectal y obesidad. El uso de probióticos ha salido a la luz como una alternativa para modular la microbiota intestinal, mantener la homeostasis y disminuir la inflamación. Objetivo: Optimizar las condiciones de cultivo en cuanto a Suero Fetal Bovino (SFB), tiempo de maduración de las células y determinar la concentración citotóxica 50 de los LPS para la posterior evaluación del efecto antiinflamatorio del probiótico Enteroccocus faecium en un modelo de inflamación gastrointestinal in vitro usando LPS como promotores de inflamación. Métodos: Se evaluó la viabilidad celular cuando las células se cultivaron con diferentes concentraciones de SFB y días post-siembra. Adicionalmente, por el método de MTT se calculó la concentración citotóxica 50 de los LPS de Escherichia coli. Por último, usando el modelo de inflamación gastrointestinal planteado, se evaluó el efecto de la adición del probiótico Enterococcus faecium sobre la expresión de citoquinas pro y antiinflamatorias (TNF-α, IL-1, IL-8, IL-10) mediante la cuantificación relativa por RT-qPCR usando como referencia el gen constitutivo GAPDH. El diseño estadístico utilizado fue completamente al azar en un arreglo factorial 2x6 (6 condiciones experimentales y 2 momentos post-siembra), cada tratamiento tuvo un total de 6 réplicas. Resultados: No se observó diferencia estadísticamente significativa sobre la viabilidad celular cuando las células fueron cultivadas durante 12 días con 5% v/v SFB respecto a las células cultivadas durante 18 días con 10% v/v SFB. Adicionalmente, la CC50 de los LPS fue de 7mg/mL. Por último, se observó que la expresión de citoquinas proinflamatorias se ve atenuada cuando se tratan las células Caco-2 con Enterococus faecium, en relación a las no tratadas, donde la disminución fue de hasta 36% para IL-1, 41% en el caso de IL-8 y 50% para TNF-α, mientras que la expresión de IL-10 aumentó hasta en un 57% comparado con las células sin tratamiento. Conclusión: Las condiciones de cultivo para simular un modelo de inflamación intestinal in vitro fueron optimizadas a fin de disminuir el tiempo de preparación de las células y la concentración de SFB. Adicionalmente, fue posible determinar concentraciones de LPS aptas para el estudio de inflamación en células Caco-2. in vitro Finalmente, el tratamiento con el probiótico Enterococcus faecium mostró disminución en la expresión de citoquinas proinflamatorias, mientras potenció la expresión de IL-10 como citoquina antiinflamatoria en un modelo de inflamación in vitro. Por lo anterior, sería de gran interés realizar ensayos in vivo para una posterior aplicación en el tratamiento de enfermedades inflamatorias crónicas.