Identificación de péptido antimicrobiano a partir de manzanilla romana

La manzanilla romana (Chamaemelum nobile), es una de las plantas medicinales más usadas por la presencia de flavonoides, sesquiterpenos y azulenos en sus tejidos, que le confieren propiedades antiinflamatorias, anticancerígenas y antimicrobianas. La capacidad inhibitoria de fitopatógenos de la manzanilla romana aumenta la posibilidad de identificar genes asociados con resistencia a enfermedades en plantas. Los péptidos antimicrobianos (AMPs) actúan en la inmunidad innata de plantas aumentando su presencia en tejidos susceptibles a la invasión de fitopatógenos. El objetivo de este trabajo fue identificar un posible gen relacionado a un péptido antimicrobiano a partir de Chamaemelum nobile. Se realizaron reacciones de PCR sobre ADN genómico para la identificación de génes AMPs, y se usó herramientas de Bioinformática para su caracterización bioquímica, como predicción de la secuencia de aminoácidos, punto isoeléctrico, índice alifático, hidropaticidad y modelamiento teórico de la estructura tridimensional. Luego se procedió a estandarizar el método de clonación por recombinación homóloga en levadura para AMPs, y se llevaron a cabo pruebas de sensibilidad sobre el fitopatógeno Rhizoctonia solani. Finalmente, se caracterizaron cepas para transformación genética de plantas. Se realizó la identificación de un gen AMP denominado Proteína de Transferencia de Lípidos (LTP), que posee 94 aminoácidos, a partir de material genético de C. nobile. La secuencia de aminoácidos putativa identificada en C. nobile fué caracterizada in silicio con herramientas bioinformáticas en dónde se evidenció que esta secuencia de aminoácidos es similar a la familia de Proteínas de Transferencia de Lípidos tipo 1 destacadas por presentar actividad antimicrobiana sobre fitopatógénos. Posteriormente, se evaluó el método de clonación por recombinación homóloga en levadura, y se encontró que su eficacia depende del nivel de homología vector-genoma de levadura. Adicionalmente se determinó la actividad inhibitoria de fluido apoplástico de C. nobile a 1 µg/mL sobre R. solani. Por último, se realizó la caracterización fenotípica y molecular de cepas de Agrobacterium tumefaciens que pueden ser útiles en transformación genética de plantas de interés industrial. Este estudio aporta en la descripción de un nuevo miembro de la familia de LTPs en plantas de la familia Asteraceaes.

• Autores: Portela Dussán, Diana Daniela
• Fecha de publicación: 2016
• Institución: Universidad Nacional de Colombia
• Repositorio: Universidad Nacional de Colombia
• Idioma: spa
• OAI Identifier: oai:repositorio.unal.edu.co:unal/58282
• Acceso en línea: https://repositorio.unal.edu.co/handle/unal/58282; http://bdigital.unal.edu.co/54999/
• Palabra clave: 57 Ciencias de la vida; Biología / Life sciences; biology; 63 Agricultura y tecnologías relacionadas / Agriculture; Chamaemelum nobile; Péptidos antimicrobianos; Proteínas de transferencia de lípidos; Recombinación homóloga en levadura; Rhizoctonia solani; Agrobacterium tumefaciens; Antimicrobial peptides; Lipid transfer proteins; homologous recombination in yeast; Rhizoctonia solani; Agrobacterium tumefaciens
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