Desarrollo de un hidrogel funcionalizado tipo apósito para la aplicación de derivados acelulares provenientes de células madre mesenquimales como potencial tratamiento para úlceras cutáneas crónicas: Modelo preclínico en diabetes tipo 1
La úlcera de pie diabético es un problema de salud pública en el mundo, conlleva a un alto impacto personal, social y económico, situación que se hace más dramática por la poca efectividad de las terapias convencionales. En los últimos 10 años se ha demostrado que la administración de las células ma...
- Autores:
-
Becerra Bayona, Silvia Milena
Arango Rodríguez, Martha Ligia
Solarte David, Víctor Alfonso
Sossa Melo, Claudia Lucia
Botero Espinosa, Lucía
- Tipo de recurso:
- Investigation report
- Fecha de publicación:
- 2020
- Institución:
- Universidad Autónoma de Bucaramanga - UNAB
- Repositorio:
- Repositorio UNAB
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- Acceso en línea:
- http://hdl.handle.net/20.500.12749/25312
- Palabra clave:
- Stem cells
Multipotent stem cells
Suppuration
Public health
Skin (Diseases)
Sugar in the body
Glycemia
Células madre
Células madre multipotentes
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Salud pública
Piel (Enfermedades)
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La úlcera de pie diabético es un problema de salud pública en el mundo, conlleva a un alto impacto personal, social y económico, situación que se hace más dramática por la poca efectividad de las terapias convencionales. En los últimos 10 años se ha demostrado que la administración de las células madre mesenquimales (MSCs) son seguras y efectivas en el tratamiento de las úlceras cutáneas crónicas, induciendo la regeneración, tanto de la dermis como de la epidermis. Sin embargo, el trasplante de las MSCs es difícilmente masificable debido a su producción compleja y costosa a gran escala. Publicaciones recientes de nuestros estudios evidencian que el uso de los derivados acelulares que éstas producen (dac-MSCs), presentan una mayor efectividad que las células per se en la regeneración de lesiones cutáneas (Tomas de Mayo, et al., 2017). No obstante, es necesario hacerlos más compatibles a una presentación farmacológica convencional como son los apósitos. En este contexto, también hemos demostrado que las matrices poliméricas, como los hidrogeles a base de polietilenglicol diacrilado (PEGDA), permiten la incorporación de diferentes moléculas bioactivas como proteínas, para su posterior uso como soportes tridimensionales para estudiar el comportamiento de células madre (S. Becerra-Bayona, Guiza-Arguello, Qu, Munoz-Pinto, & Hahn, 2012; S. M. Becerra-Bayona, Guiza-Arguello, Russell, Hook, & Hahn, 2018; Browning, et al., 2014; Munoz-Pinto, et al., 2015). Por lo tanto, en la primera etapa del proyecto se logró fabricar un hidrogel degradable de PEGDA al insertar un péptido que es reconocido por la metaloproteinasa tipo 1 (MMP-1), y que permite su degradación. En la segunda parte del proyecto, se logró establecer la tasa de degradación de los hidrogeles degradables de PEGDA (denominado hidrogel funcionalizado tipo apósito), y se determinó la relación de acrilación que debe usarse para la incorporación de las moléculas bioactivas como son los dac-MSCs, teniendo en cuenta los resultados iniciales de adhesión celular. Asimismo, se llevaron a cabo los estudios de proliferación y migración celular en los hidrogeles en estudio, así como la caracterización de las moléculas presentes en los dacMSCs. Una vez establecidos los parámetros a tener en cuenta para la fabricación de dichos hidrogeles, se llevó a cabo un estudio piloto con ratas Wistar, con el fin de determinar la concentración apropiada de estreptozotocina para inducir la diabetes en las mismas. Los resultados de este estudio preliminar confirmaron que a las dosis de 30, 40 y 50 mg/kg, los animales no desarrollan cuadros de diabetes (glicemias superiores a 250 mg/dL) mientras que con la dosis de 60 mg/kg se garantiza el desarrollo de diabetes. |
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Becerra-Bayona, S., Guiza-Arguello, V., Qu, X., Munoz-Pinto, D. J., & Hahn, M. S. (2012). Influence of select extracellular matrix proteins on mesenchymal stem cell osteogenic commitment in three-dimensional contexts. Acta Biomater, 8(12), 4397-4404 Becerra-Bayona, S. M., Guiza-Arguello, V. R., Russell, B., Hook, M., & Hahn, M. S. (2018). Influence of collagen-based integrin alpha1 and alpha2 mediated signaling on human mesenchymal stem cell osteogenesis in three dimensional contexts. J Biomed Mater Res A, 106(10), 2594-2604. Browning, M. B., Guiza, V., Russell, B., Rivera, J., Cereceres, S., Hook, M., et al. (2014). Endothelial cell response to chemical, biological, and physical cues in bioactive hydrogels. Tissue Eng Part A., 20(23-24), 3130-3141. Flavia, B., David, C., Paulette, C., Benjamín, E., Claudia L., S., & Martha L., A.-R. (2016). Regenerative Potential of Mesenchymal Stromal Cells: Age-Related Changes. Stem Cells International, 2016. Griffin, D. R., Weaver, W. M., Scumpia, P., Di Carlo, D., & Segura, T. (2015). Accelerated wound healing by injectable microporous gel scaffolds assembled from annealed building blocks. Nature materials, 14(7), 737-744 Hou, Y., Schoener, C. A., Regan, K. R., Munoz-Pinto, D., Hahn, M. S., & Grunlan, M. A. (2010). Photo-crosslinked PDMS(star)-PEG Hydrogels: Synthesis, Characterization, and Potential Application for Tissue Engineering Scaffolds. Biomacromolecules, 11(3), 648-656 Mann, B. K., Gobin, A. S., Tsai, A. T., Schmedlen, R. H., & West, J. L. (2001). Smooth muscle cell growth in photopolymerized hydrogels with cell adhesive and proteolytically degradable domains: synthetic ECM analogs for tissue engineering. Biomaterials, 22(22), 3045-3051 Moon, J. J., Saik, J. E., Poche, R. A., Leslie-Barbick, J. E., Lee, S.-H., Smith, A. A., et al. (2010). Biomimetic hydrogels with pro-angiogenic properties. Biomaterials, 31(14), 3840-3847. Munoz-Pinto, D. J., Guiza-Arguello, V. R., Becerra-Bayona, S. M., Erndt-Marino, J., Samavedi, S., Malmut, S., et al. (2015). Collagen-mimetic hydrogels promote human endothelial cell adhesion, migration and phenotypic maturation. Journal of Materials Chemistry B, 3(40), 7912-7919 Tomas de Mayo, Paulette Conget, Silvia Becerra-Bayona, Claudia L. Sossa, Galvis, V., & Arango-Rodríguez, M. L. (2017). The role of bone marrow Mesenchymal Stromal Cell derivatives in skin wound healing in diabetic mice. PLoS ONE. West, J. L., & Hubbell, J. A. (1999). Polymeric Biomaterials with Degradation Sites for Proteases Involved in Cell Migration. Macromolecules, 32(1), 241-244 |
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En los últimos 10 años se ha demostrado que la administración de las células madre mesenquimales (MSCs) son seguras y efectivas en el tratamiento de las úlceras cutáneas crónicas, induciendo la regeneración, tanto de la dermis como de la epidermis. Sin embargo, el trasplante de las MSCs es difícilmente masificable debido a su producción compleja y costosa a gran escala. Publicaciones recientes de nuestros estudios evidencian que el uso de los derivados acelulares que éstas producen (dac-MSCs), presentan una mayor efectividad que las células per se en la regeneración de lesiones cutáneas (Tomas de Mayo, et al., 2017). No obstante, es necesario hacerlos más compatibles a una presentación farmacológica convencional como son los apósitos. En este contexto, también hemos demostrado que las matrices poliméricas, como los hidrogeles a base de polietilenglicol diacrilado (PEGDA), permiten la incorporación de diferentes moléculas bioactivas como proteínas, para su posterior uso como soportes tridimensionales para estudiar el comportamiento de células madre (S. Becerra-Bayona, Guiza-Arguello, Qu, Munoz-Pinto, & Hahn, 2012; S. M. Becerra-Bayona, Guiza-Arguello, Russell, Hook, & Hahn, 2018; Browning, et al., 2014; Munoz-Pinto, et al., 2015). Por lo tanto, en la primera etapa del proyecto se logró fabricar un hidrogel degradable de PEGDA al insertar un péptido que es reconocido por la metaloproteinasa tipo 1 (MMP-1), y que permite su degradación. En la segunda parte del proyecto, se logró establecer la tasa de degradación de los hidrogeles degradables de PEGDA (denominado hidrogel funcionalizado tipo apósito), y se determinó la relación de acrilación que debe usarse para la incorporación de las moléculas bioactivas como son los dac-MSCs, teniendo en cuenta los resultados iniciales de adhesión celular. Asimismo, se llevaron a cabo los estudios de proliferación y migración celular en los hidrogeles en estudio, así como la caracterización de las moléculas presentes en los dacMSCs. Una vez establecidos los parámetros a tener en cuenta para la fabricación de dichos hidrogeles, se llevó a cabo un estudio piloto con ratas Wistar, con el fin de determinar la concentración apropiada de estreptozotocina para inducir la diabetes en las mismas. Los resultados de este estudio preliminar confirmaron que a las dosis de 30, 40 y 50 mg/kg, los animales no desarrollan cuadros de diabetes (glicemias superiores a 250 mg/dL) mientras que con la dosis de 60 mg/kg se garantiza el desarrollo de diabetes.1. IDENTIFICACIÓN DEL PROGRAMA PROYECTO 1 2. TABLA DE CONTENIDO 2 3. RESUMEN 3 4. SINÓPSIS TECNICA 4 5. CUMPLIMIENTO DE OBJETIVOS 5 5.1 Cumplimiento del objetivo general 5 5.2 Cumplimiento de los objetivos específicos 7 6. DESCRIPCIÓN DE OTROS RESULTADOS ESPECÍFICOS 15 7. RESULTADOS ADICIONALES 17 8. CUMPLIMIENTO DE LA METODOLOGÍA 18 9. CRONOGRAMA DE EJECUCIÓN A LA FECHA, DIFICULTADES Y PLAN DE CONTINGENCIA 25 10. PROYECCIÓN DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS FRENTE A LOS IMPACTOS REGISTRADOS 29 EN EL PROYECTO/PROGRAMA (SI APLICA) 11. ASPECTOS FINANCIEROS 29 12. DISCUSIÓN Y ANÁLISIS 29 13. CONCLUSIONES 45 14. SIGLAS Y ABREVIATURAS 46 15. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS 46 16. LISTA DE ANEXOS 47Diabetic foot ulcer is a public health problem in the world, it leads to a high personal, social and economic impact, a situation that is made more dramatic by the ineffectiveness of conventional therapies. In the last 10 years, it has been shown that the administration of mesenchymal stem cells (MSCs) is safe and effective in the treatment of chronic skin ulcers, inducing regeneration of both the dermis and epidermis. However, the transplantation of MSCs is difficult to massify due to their complex and expensive large-scale production. Recent publications of our studies show that the use of the acellular derivatives they produce (dac-MSCs) are more effective than cells per se in the regeneration of skin lesions (Tomas de Mayo, et al., 2017). However, it is necessary to make them more compatible with a conventional pharmacological presentation such as dressings. In this context, we have also shown that polymeric matrices, such as hydrogels based on diacrylated polyethylene glycol (PEGDA), allow the incorporation of different bioactive molecules such as proteins, for their subsequent use as three-dimensional supports to study the behavior of stem cells (S . Becerra-Bayona, Guiza-Arguello, Qu, Munoz-Pinto, & Hahn, 2012; et al., 2015). Therefore, in the first stage of the project, it was possible to manufacture a degradable PEGDA hydrogel by inserting a peptide that is recognized by metalloproteinase type 1 (MMP-1), and that allows its degradation. In the second part of the project, it was possible to establish the degradation rate of the degradable PEGDA hydrogels (called dressing-type functionalized hydrogel), and the acrylation ratio that should be used for the incorporation of bioactive molecules such as dac- MSCs, taking into account the initial results of cell adhesion. Likewise, cell proliferation and migration studies were carried out in the hydrogels under study, as well as the characterization of the molecules present in the dacMSCs. Once the parameters to be taken into account for the manufacture of said hydrogels were established, a pilot study was carried out with Wistar rats, in order to determine the appropriate concentration of streptozotocin to induce diabetes in them. The results of this preliminary study confirmed that at doses of 30, 40 and 50 mg/kg, the animals do not develop diabetes (glycemia greater than 250 mg/dL) while with the dose of 60 mg/kg the development of diabetes.Modalidad Presencialapplication/pdfspahttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/2.5/co/Abierto (Texto Completo)Atribución-NoComercial-SinDerivadas 2.5 Colombiahttp://purl.org/coar/access_right/c_abf2Desarrollo de un hidrogel funcionalizado tipo apósito para la aplicación de derivados acelulares provenientes de células madre mesenquimales como potencial tratamiento para úlceras cutáneas crónicas: Modelo preclínico en diabetes tipo 1Development of a functionalized dressing-type hydrogel for the application of acellular derivatives from mesenchymal stem cells as a potential treatment for chronic skin ulcers: preclinical model in type 1 DiabetesResearch reportinfo:eu-repo/semantics/workingPaperInforme de investigaciónhttp://purl.org/coar/resource_type/c_18wshttp://purl.org/coar/resource_type/c_8042info:eu-repo/semantics/acceptedVersionhttp://purl.org/redcol/resource_type/IFIUniversidad Autónoma de Bucaramanga UNABFacultad Ciencias de la SaludStem cellsMultipotent stem cellsSuppurationPublic healthSkin (Diseases)Sugar in the bodyGlycemiaCélulas madreCélulas madre multipotentesSupuraciónSalud públicaPiel (Enfermedades)Azúcar en el organismoGlicemiaBecerra-Bayona, S., Guiza-Arguello, V., Qu, X., Munoz-Pinto, D. J., & Hahn, M. S. (2012). Influence of select extracellular matrix proteins on mesenchymal stem cell osteogenic commitment in three-dimensional contexts. Acta Biomater, 8(12), 4397-4404Becerra-Bayona, S. M., Guiza-Arguello, V. R., Russell, B., Hook, M., & Hahn, M. S. (2018). Influence of collagen-based integrin alpha1 and alpha2 mediated signaling on human mesenchymal stem cell osteogenesis in three dimensional contexts. J Biomed Mater Res A, 106(10), 2594-2604.Browning, M. B., Guiza, V., Russell, B., Rivera, J., Cereceres, S., Hook, M., et al. (2014). Endothelial cell response to chemical, biological, and physical cues in bioactive hydrogels. Tissue Eng Part A., 20(23-24), 3130-3141.Flavia, B., David, C., Paulette, C., Benjamín, E., Claudia L., S., & Martha L., A.-R. (2016). Regenerative Potential of Mesenchymal Stromal Cells: Age-Related Changes. Stem Cells International, 2016.Griffin, D. R., Weaver, W. M., Scumpia, P., Di Carlo, D., & Segura, T. (2015). 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Collagen-mimetic hydrogels promote human endothelial cell adhesion, migration and phenotypic maturation. Journal of Materials Chemistry B, 3(40), 7912-7919Tomas de Mayo, Paulette Conget, Silvia Becerra-Bayona, Claudia L. Sossa, Galvis, V., & Arango-Rodríguez, M. L. (2017). The role of bone marrow Mesenchymal Stromal Cell derivatives in skin wound healing in diabetic mice. PLoS ONE.West, J. L., & Hubbell, J. A. (1999). Polymeric Biomaterials with Degradation Sites for Proteases Involved in Cell Migration. 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