Evaluación del efecto del cloruro de calcio y gluconato de calcio en la activación de plaquetas humanas

La activación plaquetaria es un procedimiento de gran frecuencia en el área de la medicina regenerativa. A pesar de contar con diversos protocolos para la activación plaquetaria, los procesos carecen de una estandarización adecuada donde se logre obtener concentraciones y una cinética de liberación...

Full description

Autores:
Hinojosa Galindo, Andrés Felipe
Góngora Orozco, Laura Isabel
Gutiérrez Arenis, Carlos Sleider
Tipo de recurso:
Trabajo de grado de pregrado
Fecha de publicación:
2022
Institución:
Universidad Autónoma de Bucaramanga - UNAB
Repositorio:
Repositorio UNAB
Idioma:
spa
OAI Identifier:
oai:repository.unab.edu.co:20.500.12749/15767
Acceso en línea:
http://hdl.handle.net/20.500.12749/15767
Palabra clave:
Agonist
Platelet activation
Flow cytometry
Growth factors
Calcium chloride
Blood cells
Platelet aggregation
Ingeniería biomédica
Bioingeniería
Medicina regenerativa
Cloruro de calcio
Células sanguíneas
Agregación plaquetaria
Activación plaquetaria
Agentes activadores
Factores de crecimiento
Citometría de flujo
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description La activación plaquetaria es un procedimiento de gran frecuencia en el área de la medicina regenerativa. A pesar de contar con diversos protocolos para la activación plaquetaria, los procesos carecen de una estandarización adecuada donde se logre obtener concentraciones y una cinética de liberación de factores de crecimiento (FC) similares. Por lo tanto, existe la necesidad de evaluar diferentes alternativas que lleven a una activación plaquetaria óptima al implementar diferentes métodos, como es el uso de agentes activadores derivados del calcio que logran una gran capacidad de estimulación durante la activación de plaquetas humanas. En este estudio se realizó la activación de plaquetas bajo diferentes condiciones; en específico, resuspendidas en Plasma pobre en plaquetas (PPP) y tapón fosfato salino (PBS) con el uso de cloruro de calcio ('CaCl2') y gluconato de calcio a concentraciones de 10, 20 y 40 mM en periodos de tiempo de 0, 5, 10, 15, 20, 30 minutos y 24 horas. La activación plaquetaria inducida por estos dos agentes se evaluó por medio de citometría de flujo estudiando marcadores de superficie, mientras que la liberación de FC se determinó por medio espectrofotometría para la identificación de proteínas totales (PT). Los resultados obtenidos de la activación plaquetaria demostraron que las muestras resuspendidas en PBS presentaron mejores porcentajes de activación que las resuspendidas en PPP; de igual manera, las muestras activadas con gluconato de calcio presentaron porcentajes de activación plaquetaria mayores en comparación al 'CaCl2'. En cuanto a la liberación de FC, se observó que en el grupo de muestras resuspendidas en PPP el gluconato de calcio alcanzó una mayor liberación que el 'CaCl2' en cada uno de los periodos de tiempo, siendo la concentración de 40 mM la que llevó a la mayor liberación. Esto permite concluir que el gluconato de calcio llega a tener un mejor potencial en la activación de plaquetas humanas que el 'CaCl2'.
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Augustine, T., Van der Spuy, W., Kaberry, L., Shay, M. (2016). Thrombin-Mediated Platelet Activation of Lysed Whole Blood and Platelet-Rich Plasma: A Comparison Between Platelet Activation Markers and Ultrastructural Alterations. Cambridge University. 22(3), 630-9.https://doi.org/10.1017/S1431927616000854
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spelling Becerra Bayona, Silvia Milenaf59fde3b-924f-4fcc-96e9-5fd6250b2daeSolarte David, Victor Alfonsof117db9d-267d-46bf-be23-11fc708fca11Hinojosa Galindo, Andrés Felipe754a6e10-e694-4e90-ad37-28551bedb6a4Góngora Orozco, Laura Isabelb84d804a-4e7c-4162-af9f-ba01180863c0Gutiérrez Arenis, Carlos Sleidere0eda564-aa6f-4e4e-9817-6cff9ce7651cBecerra Bayona, Silvia Milena [0001568861]Solarte David, Víctor Alfonso [0001329391]Becerra Bayona, Silvia Milena [5wr21EQAAAAJ&hl=es&oi=ao]Becerra Bayona, Silvia Milena [0000-0002-4499-5885]Solarte David, Víctor Alfonso [0000-0002-9856-1484]Becerra Bayona, Silvia Milena [Silvia-Becerra-Bayona]Grupo de Estudio Genético de Enfermedades ComplejasGrupo de Investigaciones ClínicasBecerra Bayona, Silvia Milena [silvia-milena-becerra-bayona]Becerra Bayona, Silvia Milena [silvia-becerra-3174455a]Floridablanca, Santander (Colombia)Junio 2021-octubre 2021UNAB Campus Bucaramanga2022-03-02T16:20:51Z2022-03-02T16:20:51Z2022-01-25http://hdl.handle.net/20.500.12749/15767instname:Universidad Autónoma de Bucaramanga - UNABreponame:Repositorio Institucional UNABrepourl:https://repository.unab.edu.coLa activación plaquetaria es un procedimiento de gran frecuencia en el área de la medicina regenerativa. A pesar de contar con diversos protocolos para la activación plaquetaria, los procesos carecen de una estandarización adecuada donde se logre obtener concentraciones y una cinética de liberación de factores de crecimiento (FC) similares. Por lo tanto, existe la necesidad de evaluar diferentes alternativas que lleven a una activación plaquetaria óptima al implementar diferentes métodos, como es el uso de agentes activadores derivados del calcio que logran una gran capacidad de estimulación durante la activación de plaquetas humanas. En este estudio se realizó la activación de plaquetas bajo diferentes condiciones; en específico, resuspendidas en Plasma pobre en plaquetas (PPP) y tapón fosfato salino (PBS) con el uso de cloruro de calcio ('CaCl2') y gluconato de calcio a concentraciones de 10, 20 y 40 mM en periodos de tiempo de 0, 5, 10, 15, 20, 30 minutos y 24 horas. La activación plaquetaria inducida por estos dos agentes se evaluó por medio de citometría de flujo estudiando marcadores de superficie, mientras que la liberación de FC se determinó por medio espectrofotometría para la identificación de proteínas totales (PT). Los resultados obtenidos de la activación plaquetaria demostraron que las muestras resuspendidas en PBS presentaron mejores porcentajes de activación que las resuspendidas en PPP; de igual manera, las muestras activadas con gluconato de calcio presentaron porcentajes de activación plaquetaria mayores en comparación al 'CaCl2'. En cuanto a la liberación de FC, se observó que en el grupo de muestras resuspendidas en PPP el gluconato de calcio alcanzó una mayor liberación que el 'CaCl2' en cada uno de los periodos de tiempo, siendo la concentración de 40 mM la que llevó a la mayor liberación. Esto permite concluir que el gluconato de calcio llega a tener un mejor potencial en la activación de plaquetas humanas que el 'CaCl2'.Capítulo 1 Problema u Oportunidad ............................................................................................9 Introducción ....................................................................................................................9 Planteamiento del Problema...........................................................................................10 Justificación ..................................................................................................................11 Pregunta Problema.........................................................................................................12 Objetivo General ...........................................................................................................12 Objetivos Específicos ....................................................................................................12 Capítulo 2 Marco Teórico .........................................................................................................13 Las Plaquetas.................................................................................................................13 Definición y Función .........................................................................................13 Estructura de las Plaquetas.................................................................................13 La Activación Plaquetaria ..................................................................................14 Plasma Rico en Plaquetas ..............................................................................................16 Definición..........................................................................................................16 Preparación del PRP...........................................................................................16 Factores de Crecimiento.....................................................................................18 Capítulo 3 Estado del Arte ........................................................................................................21 Capítulo 4 Metodología.............................................................................................................24 Preparación del Plasma Rico en Plaquetas (PRP)...........................................................24 Activación Plaquetaria...................................................................................................24 Análisis del grado de activación plaquetaria...................................................................25 Cuantificación de los FC................................................................................................26 Análisis Estadístico .......................................................................................................26 Capítulo 5 Resultados y Análisis de Resultados.........................................................................28 Resultados.....................................................................................................................28 Preparación del PRP...........................................................................................28 Activación Plaquetaria .......................................................................................29 Cuantificación de Factores de Crecimiento.........................................................49 Análisis de Resultados...................................................................................................58 Capítulo 6 Conclusiones y Recomendaciones............................................................................63 Referencias ...............................................................................................................................65 Apéndice...................................................................................................................................70PregradoPlatelet activation is a frequent procedure in the area of regenerative medicine. Despite having a variety of protocols for platelet activation, these processes lack of adequate standardization where similar concentrations and release kinetics of growth factors (GF) can be obtained. Therefore, there is a need to evaluate different alternatives that lead to optimal platelet activation by implementing different methods, such as the use of activating agents derived from calcium. In this study, platelet activation was performed under different conditions; specifically, resuspending the platelet pellet in Platelet-poor plasma (PPP) and phosphate buffered saline (PBS) with the use of calcium chloride ('CaCl2') and calcium gluconate at concentrations of 10, 20 and 40 mM in time periods of 0, 5, 10, 15, 20, 30 minutes and 24 hours. Platelet activation induced by these two agents was evaluated by flow cytometry studying surface platelet markers, while the FC release was determined by spectrophotometry for the identification of total proteins (PT). Results obtained from platelet activation revealed that samples resuspended in PBS showed better activation percentages than those resuspended in PPP; Similarly, the samples activated with calcium gluconate presented higher percentages of platelet activation compared to 'CaCl2'. Regarding the release of FC, it was observed that in the group of samples resuspended in PPP, and activated by calcium gluconate reached a greater release than 'CaCl2' in each of the time periods, being the concentration of 40 mM the one that led to the highest release. This allows us to conclude that calcium gluconate reaches to have a better potential in activating human platelets than 'Cal2'.Modalidad Presencialapplication/pdfspahttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/2.5/co/Abierto (Texto Completo)Atribución-NoComercial-SinDerivadas 2.5 Colombiahttp://purl.org/coar/access_right/c_abf2Evaluación del efecto del cloruro de calcio y gluconato de calcio en la activación de plaquetas humanasEvaluation of the effect of calcium chloride and calcium gluconate on human platelete activationIngeniero BiomédicoUniversidad Autónoma de Bucaramanga UNABFacultad IngenieríaPregrado Ingeniería Biomédicainfo:eu-repo/semantics/bachelorThesisTrabajo de Gradohttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1fhttp://purl.org/redcol/resource_type/TPAgonistPlatelet activationFlow cytometryGrowth factorsCalcium chlorideBlood cellsPlatelet aggregationIngeniería biomédicaBioingenieríaMedicina regenerativaCloruro de calcioCélulas sanguíneasAgregación plaquetariaActivación plaquetariaAgentes activadoresFactores de crecimientoCitometría de flujoAugustine, T., Van der Spuy, W., Kaberry, L., Shay, M. (2016). Thrombin-Mediated Platelet Activation of Lysed Whole Blood and Platelet-Rich Plasma: A Comparison Between Platelet Activation Markers and Ultrastructural Alterations. Cambridge University. 22(3), 630-9.https://doi.org/10.1017/S1431927616000854Augustine, T., Van der Spuy, W., Kaberry, L., Shay, M. (2016). Thrombin-Mediated Platelet Activation of Lysed Whole Blood and Platelet-Rich Plasma: A Comparison Between Platelet Activation Markers and Ultrastructural Alterations. Cambridge University. 22(3), 630-9.https://doi.org/10.1017/S1431927616000854Cavallo, C., Roffi, A., Grigolo, B., Mariani, E., Pratelli, L., & Merli, G. et al. (2016). Platelet Rich Plasma: The Choice of Activation Method Affects the Release of Bioactive Molecules. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5031826/Center for Applied Research & Intelectual Property Development. (2014). Platelet-Rich Preparations to improve Healing. 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