Estandarización de una PCR-SSP para la identificación del fitopatógeno phythophtora infestans (Oomycete) a partir de muestras de ADN en frutos inoculados en la berenjena (Solanum Melongena)

La infección causada por Phytophtora infestans ocasiona la enfermedad de gota, marchitez, gotera, lancha o tizón tardío que afecta a la mayoría de especies de la familia Solanaceae. En la berenjena (Solanum melongena) aún no se tiene claro cuál es la especie, o las especies del género Phytophtora qu...

Full description

Autores:
Tipo de recurso:
Trabajo de grado de pregrado
Fecha de publicación:
2017
Institución:
Universidad Distrital Francisco José de Caldas
Repositorio:
RIUD: repositorio U. Distrital
Idioma:
spa
OAI Identifier:
oai:repository.udistrital.edu.co:11349/5451
Acceso en línea:
http://hdl.handle.net/11349/5451
Palabra clave:
Secuencias ITS
Electroforesis
Phytophtora Infestans
Inoculación
PCR-SSP
Solanum melongena
Licenciatura en Biología - Tesis y disertaciones académicas
Reacción en cadena de la polimerasa
Patología vegetal
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description La infección causada por Phytophtora infestans ocasiona la enfermedad de gota, marchitez, gotera, lancha o tizón tardío que afecta a la mayoría de especies de la familia Solanaceae. En la berenjena (Solanum melongena) aún no se tiene claro cuál es la especie, o las especies del género Phytophtora que afectan a la planta y que es la causante de la podredumbre de los frutos, y, muchas veces, llega a ser confundido con otros géneros de hongos como Fusarium spp y Botrytis spp. En consecuencia, no se puede determinar qué tipo de control se puede utilizar frente al patógeno y que tipo de funguicida emplear. Inoculando hasta 25 frutos de berenjena utilizando el linaje clonal EC-1, se realizaron extracciones de ADN, que luego fueron cuantificadas por el equipo Nanodrop 2000c; para estandarizar una PCR-SPP empleando Cebadores o Primers de Secuencias ITS. Los resultados de estas extracciones y de las PCRs, fueron visualizadas en geles de agarosa al 2% y 3%. Para probar la sensibilidad de la prueba, se realizaron diluciones de hasta 10-3. El linaje Clonal de Phytophtora infestans EC-1, no está reportado como agente causal de la enfermedad de gota, marchitez, gotera, lancha o tizón tardío en la berenjena, se propone como nuevo patógeno para Solaum melongena. Se utilizaron 3 juegos de primers de secuencias ITS, solo dos de ellos amplifican el tamaño real de una ITS y cumple con sus características. El tercer juego se descarta como secuencia ITS, pero no se descarta como secuencia de proteína especifica según lo consultado con la base de datos NBCI.
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Inoculando hasta 25 frutos de berenjena utilizando el linaje clonal EC-1, se realizaron extracciones de ADN, que luego fueron cuantificadas por el equipo Nanodrop 2000c; para estandarizar una PCR-SPP empleando Cebadores o Primers de Secuencias ITS. Los resultados de estas extracciones y de las PCRs, fueron visualizadas en geles de agarosa al 2% y 3%. Para probar la sensibilidad de la prueba, se realizaron diluciones de hasta 10-3. El linaje Clonal de Phytophtora infestans EC-1, no está reportado como agente causal de la enfermedad de gota, marchitez, gotera, lancha o tizón tardío en la berenjena, se propone como nuevo patógeno para Solaum melongena. Se utilizaron 3 juegos de primers de secuencias ITS, solo dos de ellos amplifican el tamaño real de una ITS y cumple con sus características. El tercer juego se descarta como secuencia ITS, pero no se descarta como secuencia de proteína especifica según lo consultado con la base de datos NBCI.Infection caused by Phytophtora infestans causes gout, wilt, leak, boat or late blight disease that affects most species of the family Solanaceae. In the eggplant (Solanum melongena) it is still unclear what species, or the species of the genus Phytophtora that affect the plant and that is the cause of the rot of the fruits, and, many times, becomes confused with Other genera of fungi such as Fusarium spp and Botrytis spp. Consequently, it is not possible to determine what type of control can be used against the pathogen and what type of fungicide to use. Inoculating up to 25 aubergine fruits using the clonal EC-1 lineage, DNA extractions were performed, which were then quantified by the Nanodrop 2000c team; To standardize a PCR-SPP using ITS Sequence primers or primers. The results of these extractions and the PCRs were visualized on 2% and 3% agarose gels. To test the sensitivity of the test, dilutions of up to 10-3 were performed. The Clonal lineage of Phytophtora infestans EC-1, is not reported as a causal agent of gout, wilt disease, leak, boat or late blight in eggplant, is proposed as a new pathogen for Solaum melongena. Three sets of ITS sequence primers were used, only two of them amplify the actual size of an ITS and meet its characteristics. The third set is discarded as an ITS sequence, but not discarded as a specific protein sequence as consulted with the NBCI database.pdfspaAtribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 Internacionalhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/Abierto (Texto Completo)http://purl.org/coar/access_right/c_abf2Secuencias ITSElectroforesisPhytophtora InfestansInoculaciónPCR-SSPSolanum melongenaLicenciatura en Biología - Tesis y disertaciones académicasReacción en cadena de la polimerasaPatología vegetalBerenjenaITS sequencesInoculationPCR-SSPElectrophoresisPhytophtora infestansSolanum melongenaEstandarización de una PCR-SSP para la identificación del fitopatógeno phythophtora infestans (Oomycete) a partir de muestras de ADN en frutos inoculados en la berenjena (Solanum Melongena)Standardization of a PCR-SSP for the identification of phytopathogen phythophtora infestans (Oomycete) from DNA samples in fruits inoculated in eggplant (Solanum Melongena)info:eu-repo/semantics/bachelorThesishttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1fTHUMBNAILOspinaCuestasSeirAndres2017.pdf.jpgOspinaCuestasSeirAndres2017.pdf.jpgIM Thumbnailimage/jpeg5549http://repository.udistrital.edu.co/bitstream/11349/5451/6/OspinaCuestasSeirAndres2017.pdf.jpg226199b51444a6814affe4a5ab2167b5MD56open accessORIGINALOspinaCuestasSeirAndres2017.pdfOspinaCuestasSeirAndres2017.pdfTrabajo de Gradoapplication/pdf2683487http://repository.udistrital.edu.co/bitstream/11349/5451/1/OspinaCuestasSeirAndres2017.pdf613ca72150fc481b1c678d645df27bebMD51open accessLICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-87163http://repository.udistrital.edu.co/bitstream/11349/5451/5/license.txtda5c6a3ca62d5dd4853000a60fee7083MD55open accessCC-LICENSElicense_urllicense_urltext/plain; charset=utf-843http://repository.udistrital.edu.co/bitstream/11349/5451/2/license_url321f3992dd3875151d8801b773ab32edMD52open accesslicense_textlicense_texttext/html; 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